微生物棉签擦拭取样方法验证微生物棉签擦拭取样方法验证方案1

Microbial Swab Wipe Sampling Method Validation Protocal 微生物棉签擦拭取样方法验证 HARMACEUTICAL CO.,LTD ***东药业有限公司 Microbial Swab Wipe Sampling Method Validation Protocal 微生物棉签擦拭取样方法验证方案 Doc. No./编号：VP8012-01 Page/页码： 9 / 9 This Doc. is confidential. Any unauthorized use and copy is forbidden. 仅限成都****药业有限公司内部使用。未经授权，不得使用或拷贝。 方案审核批准: Protocol Review/Approval Signatures 方案审核/批准签字 Date 日期 Drafted by/起草人 Reviewed by/审核人 Approved by/批准人 Tablet of Content 目录 1 目的和范围 4 2 验证小组职责 4 3 验证小组签名 4 4 定义与缩写 5 5 参考文件 5 6 概述…………………………………………………………………………………………………….5 7 验证前准备……………………………………………………………………………………………..5 8 验证试验……………………………………………………………………………………………………………………………..6 9 验证偏差和变更 8 10 附录列 8 1. 目的和范围 1.1. 目的 通过对清洗消毒后微生物取样方法的回收率试验，评价取样方法的有效性、代表性和科学性，并为证明清洗方法有效性提供基本依据。 1.2. 范围 本次验证适合微生物棉签擦拭法取样。 2. 验证小组职责 2.1. 验证小组组长职责 保证方案和记录的起草。 保证在执行前完成对方案及记录的审核和批准。 负责对验证小组成员进行本方案的培训。 保证完全按照方案实施。 确保能及时发现偏差，并按照已经达成一致偏差处理方法对其进行记录、纠正、调查和最终确认。 验证过程中，如有变更，参考按《变更控制》执行。 确保的生成、审核和批准，以便对方案进行最终批准。 2.2. QA职责 执行前完成对方案及记录的审核。 负责验证过程的监控和检查，保证验证方案的实施，参与验证结果评价。 参与验证偏差的调查、处理和评估。 验证过程中，如有变更，参考按《变更控制》执行。 2.3. 其它成员职责 执行前确认方案已批准，并经过培训。 按验证方案实施验证，收集、整理验证数据，完成验证记录和报告。 参与验证偏差的调查和处理，确认并通过偏差修订和解决方案。 3. 验证小组签名 在验证中担任职务 姓名 所在部门 签名 日期 组长 QC 组员 QC 组员 QC 组员 QA 4. 定义与缩写 无 5. 参考文件 5.1. 变更控制（SOP0501-01） 5.2. 验证主（SOP0702-01） 5.3. 验证的组织和实施（SOP0701-01） 5.4. 菌液配制及计数（TM7006-01） 5.5. 药品生产验证指南2003版 6. 概述 制药企业生产设备、生产场所、用具等需清洁，清洁后残留物限度经检验应符合要求，检验残留物的限度有两种方法：一是最终淋洗水取样；二是擦拭取样。擦拭取样优点是能对最难清洁部位直接取样，通过考察有代表性的最难清洁部位的残留物限度评价生产设备的清洁状况。但取样方法需验证其可行性。因此须通过取样方法验证确定清洁方法的有效性，能消除药品交叉污染及微生物污染。 7. 验证前准备 7.1. 确认设备的相关SOP和在验证过程中用到的相关文件，将检查结果记录在《文件检查》内，见附录一 7.2. 验证小组的成员已进行该验证方案及相关SOP的培训，将检查结果记录在《培训》内，见附录二。 7.3. 验证用物品 7.3.1. 设备及器具 序号 名称 规格型号 使用点 1 不锈钢载片 50mm×50mm QC微生物实验室 2 培养皿 φ90 mm QC微生物实验室 3 药用棉签 N/A QC微生物实验室 4 锥形瓶 150ml QC微生物实验室 5 恒温恒湿培养箱 HWS 培养室 6 恒温恒湿培养箱 HWS 培养室 以上器具均应在121℃、30min灭菌备用 7.3.2. 菌种 序号 名称 序列号 1 金黄色葡萄球菌jun菌菌 [CMCC(B)26003] 2 枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501] 3 白色念珠菌 [CMCC(F) 98001] [CMCC(F)98001] 7.3.3. 培养基及稀释液 序号 名称 来源 1 营养琼脂培养基 北京三药科技开发公司/ 北京奥博星生物技术有限责任公司 2 玫瑰红钠琼脂培养基 北京奥博星生物技术有限责任公司/ 北京三药科技开发公司 3 营养肉汤培养基 杭州微生物试剂有限公司 4 改良马丁培养基 北京三药科技开发公司 5 改良马丁琼脂培养基 北京奥博星生物技术有限责任公司 6 0.9%无菌氯化钠溶液 N/A 7.3.4. 记录见附录三 8. 验证试验 8.1. 菌液的制备 具体操作见《菌液配制及计数》（TM7006-01） 8.1.1. 金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌菌液的制备 8.1.1.1. 接种金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌新鲜培养物至营养肉汤或者营养琼脂培养基中，30～35℃培养18～24小时。取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50～100CFU工作菌液，并采用营养琼脂培养基计数。 8.1.2. 白色念珠菌菌液的制备 8.1.2.1. 接种白色念珠菌的新鲜培养物至改良马丁培养基或改良马丁琼脂培养基中，23～28℃培养24～48小时。取上述培养物用0.9％无菌氯化钠溶液做10倍系列稀释制成每0.1ml含菌数50～100CFU的工作菌液，采用改良马丁琼脂培养基计数。 8.2. 试验操作 8.2.1. 染菌不锈钢载片制备 8.2.1.1. 载片脱脂处理 1 载片放在含肥皂的水中煮沸30min，以纯化水洗净； 2 用纯化水煮沸10min； 3 用注射用水漂洗至pH中性晾干备用。 8.2.1.2. 菌液滴染 将经灭菌的载片平铺于无菌平皿内，滴加金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌、白色念珠菌含菌量为50～100CFU的菌液0.1ml，并均匀涂布于整个载体表面。滴染菌液后，载片置超净工作台晾干后备用。每种菌平行制备两个染菌不锈钢载片。 8.2.2. 染菌玻璃载片制备 8.2.2.1. 因培养皿的材质为玻璃，故用培养皿代替玻璃载片进行染菌试验。进行菌液滴染前，用记号笔在培养皿菌液滴染面的背面画出染菌面积（50mm×50mm），标注清晰。菌液滴染操作同8.2.1.2。 8.2.3. 擦拭取样 （1） 取无菌医用棉签2支，用0.9％无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。将其中1支棉签头按在染菌载片上，用力使其稍弯曲，平稳而缓慢地擦拭取样表面。在向前移动的同时将其从一边移到另一边。擦拭过程应覆盖整个表面。另取1支再棉签进行擦拭。但与前次擦拭移动方向垂直。擦拭完后，用无菌手术剪刀把棉签的头部（棉花部位）剪断，投入装有50ml0.9％无菌氯化钠溶液的锥形瓶中，密闭。共制备12份检品（收集样品的锥形瓶应预先编号）。 （2） 菌液计数： 取适宜稀释的菌液0.1ml（约50～100CFU）分别注入平皿中，立即倾入冷却至45℃左右的培养基，每株试验菌平行制备2个平皿，测定所涂布的试验菌数。 （3） 阴性对照： 将无菌医用棉签用0.9％无菌氯化钠溶液润湿后，在锥形瓶上挤压除去多余的溶液。将棉签头按在已灭菌的载片上（未染菌的载片）擦拭取样，操作同上。平行制备两份样品。 8.2.4. 检验 将装有样品的锥形瓶反复振摇，使棉签上的微生物释放到溶液中。取样品溶液50ml薄膜过滤，取出滤膜，菌面朝上，贴于培养基上。金黄色葡萄球菌、枯草芽孢杆菌用营养琼脂培养基，白色念珠菌用改良马丁琼脂培养基。 8.2.5. 培养及计数 检验结束后，将细菌平皿倒置于30～35ºC培养箱培养3天，霉菌培养皿倒置于23～28ºC培养箱培养5天，计数。 8.3. 可接受： 阴性对照应无菌生长，每种试验菌涂布菌落数与擦拭回收菌落数的对数值之差应在±0.3内。 8.4. 验证记录见附录四。 9. 验证偏差和变更 9.1. 验证偏差 当该方案的某一部分无法实施或实际情况无法达到可接受标准时，需要进行偏差报告。当偏差出现时，参照《偏差管理》处理，确保所有的偏差得到评估和有效的解决。 9.2. 变更控制 所有在验证过程中产生的变更都要参照《变更控制》的要求执行，确保所有的变更得到评估和批准，验证的结果达到预定的目的和要求。 10. 附录列表 序号 文件名称 1 附录一：文件检查 2 附录二： 培训记录 3 附录三：验证用物品 4 附录四：验证试验记录 5 附录五：验证偏差和变更