【doc】猪大肠杆菌和葡萄球菌混合感染的病理研究

【doc】猪大肠杆菌和葡萄球菌混合感染的病理研究 猪大肠杆菌和葡萄球菌混合感染的病理研 究 MODERNLIVESTOCKADPOUITRYBREED1NGINDUSFRY 组稿一mail:nmgxm3Sillllcomcn 猪大肠杆菌和葡萄球菌 混合感染的病理研究 郎晨辉李哲慧刘崇岭包头市动物防疫监督检验所01404 衣虹包头市改良站014010 刘军包头市兽医站014010 摘要:试验对包头一家村某个体养殖户送检的病死猪进行了病理剖检,采取病料进行了细菌的 分离鉴定,并做了生化试验和动物试验.从心脏,肝脏,脾脏中分离出大肠杆菌,从胸腔液中 分离出葡萄球菌.结合流行病学,临床症状和病理变化,综合确诊为猪大肠杆菌和葡萄球菌混 合感染.同时做了药敏试验,以指导生产实践. 关键词:猪;大肠杆菌;葡萄球菌;分离鉴定 大肠杆菌是Hschefich在 1885年发现的,在相当长的一段 时期内,一直被当作正常肠道菌 群的组成部分,认为是非致病 菌.直到20世纪中叶.Kauffma 建立了大肠杆菌的血清学方法. 才认识到一些特殊血清型的大肠 杆菌对人和动物有病原性.病原 性大肠杆菌和人畜肠道内正常寄 居的非致病性大肠杆菌在形态, 染色反应,培养特性和生化反应 等方面没有区别,但抗原构造不 同.已知大肠杆菌有菌体(0) 抗原171种.表面(K)抗原103 种,鞭毛(H)抗原60种.因而 构成许多血清型.病原性大肠杆 菌的许多血清型可引起各种家畜 发病,其中0,0勰,0..等多见 于猪,据我国多年来的实践表 明,不同地区的优势血清型往往 有差别,即使在同一地区.不同 疫场(群)的优势血清型也不尽 相同川.随着大型集约化养畜业 的发展,病原性大肠杆菌对畜牧 业所造成的损失已日益明显 葡萄球菌感染常引起皮肤的 化脓性炎症,也可引起菌血症, 败血症和各内脏器官的严重感 染,在猪多为个体的局部感染 由于葡萄球菌广泛存在于自然 界,人和动物都是该菌的主要宿 主,因此该菌极易使人和动物形 成带菌状态,致使该菌有广泛传 播的机会.近年来,世界各地该病 均有增长趋势,由葡萄球菌肠毒 素所致食物中毒大为增加.由于 耐药菌株的增多,引起许多重要 器官的疾病,常可危及人和动物 的生命.因此,该病日益受到医学 界和兽医界的重视… 2004年4月8日,包头一家 村某个养殖户送到兽医站1头 病死猪检验.据调查,该养殖户共 养猪100头,白繁自养,但猪群突 然发病,病猪f"现精神沉郁,食欲 下降,发烧,站直不稳或站不起来 等症状,病程2,3天,到送检之日 已死亡8头.为查明病因,尽快给 该养殖户提出治疗和防制方案. 笔者对送检的病死猪进行了详细 的诊断 1材料和方法 1.1材料 1.1.1病料:包头一家村某个体 养殖户送检的病死猪,无菌采取 心脏,肝脏,脾脏和胸腔液 1.1.2细菌培养基:普通营养肉 以免因小失大,从而彻底地将防疫密度达到100% 3.2围产期奶牛流产少的原因,估计与奶牛的体质 …unJ=LJxH^,J0: 屏障"的保护作用.1_?] 护胎儿的正常生长.1 3.3首次免疫后.奶 函 当代畜禽养疃业2伽J2 殖 保 稍 够 微偏长,可能与从国外到罔内的长途运输,过于疲劳 有关.第二次免疫后,奶牛3天后采食恢复正常.表 明该疫苗要求的注射剂量与奶牛的体重成正相关. 属安全有效范围. 3.4建议在具体实践中,对体质过于瘦弱的孕牛不 要免疫,以免流产,待恢复膘情后,再进行补注皿 汤,营养琼脂斜面,普通琼脂平 板,麦康凯琼脂平板和厌氧培养 基均按常规方法配制I. 1.1.3生化培养基:葡萄糖,乳 糖,麦芽糖,蔗糖,木糖,鼠李糖, 棉子糖,阿拉伯糖,甘露醇,山梨 醇,卫矛醇,肌醇,侧金盏花醇,水 杨苷,赖氨酸管,硫化氢,尿素分 解管,枸橼酸盐,均购于卜海市医 学化验所试剂厂批号:970101 1.1.4染液:革兰氏染液,瑞士染 液均南内蒙古兽医站化验室提供. 1.1.5试验动物:20g左右健康无 菌的小白鼠.购于内蒙古生物制药 rc 1.1.6药敏片:硫酸庆大霉素,阿 莫西林等24种药敏片均南内蒙 古兽医站化验室提供. 1.2方法 1.2.1病理学刮检:对死猪进行病 理剖检.观察各脏器的病理变化. 1.2.2病料涂片镜检:取病死猪 的心,肝,脾,胸腔液直接涂片,用 革兰氏染液染色.镜检,观察细菌 的形态.染色特性. 1.2.3细菌的分离和培养 1.2.3.1病料接种培养:分别将 痫料心,肝,脾,胸腔液接种于营 养肉汤,琼脂斜面和厌氧培养基 上,置于37?温箱培养24小时后 观察结果.然后再将各培养物分 别划线接种于琼脂平板.卜.置于 37?温箱培养24小时后观察菌 落生长情况. 1.2.3.2培养物涂片镜检:将心, 肝,脾,胸腔液的肉汤培养物和琼 脂斜面上的单个菌落涂片,分别进 行革兰氏染色和瑞士染色.镜枪一 1.2.3.3鉴别培养:挑取分离培 养得到的心,肝,睥,胸腔液的典 型单个菌落,分别划线接种于麦 康凯琼脂平板,置37?温箱培 养24小时后,脱察菌落生长情况 MODERNII\'ESTO(7K,XN1)P(}UtTRYBRI-ED1NGINDUSTRY i一?I'?nmgxm~@ina.COFI1cn 1.2.3.4纯培养:将分离培养的 心,肝,脾,胸腔液的典型菌落分别 接种于肉汤中,置37?温箱培养. 1.2.4生化试验:将从肝脏中分 离到的一株杆菌的肉汤培养物和 从胸腔液中分离到的一株球菌肉 汤培养物,分别接种于各种生化 培养基卜.置37?温箱培养24小 时后观察结果. 1.2.5药敏试验:将上述杆菌肉 汤的球菌肉汤分别涂布接种于普 通琼脂平板t.根据药敏试验要 求的距离贴卜药敏纸片,置37? 温箱培养24/J,n~后,测抑菌圈直 径大小判定标准I:抑菌圈直径 在l6mm以为高度敏感,10,15 nliil为中度敏感,10IllIll以下为低 度敏感.无抑菌圈为不敏感或耐 药该试验中共用24种药敏片. 1.2.6动物试验:选取20g的健 康小白鼠l0只,分成5组.每组2 只,其中一组为对照组,不接种任何 菌液.其余4组分别腹腔注射心, 肝,脾,胸的肉汤纯培养物02mL/只. 观察7天,对7天之内死亡的小白鼠 进行剖检及细菌分离鉴定,7天仍 未死亡的小白鼠剖检后处理. 2结果 2.1剖检结果 胸腔积液,且为黏性液体,有 渗出性纤维:肺脏与胸膜粘连.肺 脏萎缩,坏死.肺门淋巴结有瘀 血;心包积液,液体呈胶冻样,心 脏血管弩张;肝脏瘀血,肝表面有 坏死结节,被膜易剥离,切面多 汗;肾脏被膜易剥离:胆囊有出血 斑.出血严重;气管黏膜出血,气 管内有泡沫性黏液;咽部黏膜出 血,有泡沫性黏液;胃底部出血严 重;肠系膜淋巴结贫血,轻微出血: 十二脂肠,空肠,盲肠均血.大肠 出血严重;盲肠扁桃体有出血斑. ;扁桃体两侧有出血 切开有fn血 2.2病料涂片镜检结果 心,肝,睥3种病料中均可见 到大量G一短小杆菌.无荚膜,无芽 孢:胸腔液病料中可见到大量G 球菌,单个,成对或少量4个排列 2-3细菌分离培养结果 2.3.1病料接种培养结果:营养 肉汤,琼脂斜面和厌氧培养基上 均长菌 在营养琼脂平板I-,接种心, 肝,脾培养物的均可见到中等大 小,边缘整齐,表面光滑,微隆起, 湿润,不透明,灰白色的网形菌 落;接种胸腔液培养物的可见到 圆形,不透明,表面光滑,边缘整 齐的菌落. 2.3.2培养物涂片镜检结果:心, 肝,脾培养物的涂片用革羔氏染液 染色后镜检,均可见到G一短小的杆 菌.两端钝网.无荚膜.无芽孢:用 瑞士染液染色后镜检,均可见到 浅灰色小杆蔺,无两级着色现象 胸腔液培养物的涂片革兰氏 染色.镜枪,可见大量G球菌,单 个,成对或少蹙4个排列:瑞士染 色.镜检.可到粉红色球菌,单 个,成对或少量4个排列一 2.3-3鉴别培养结果:在麦康凯 琼脂平板卜.接种心,肝,脾典型 菌落的均可见到边缘整齐,表面 光滑,湿润,隆起,边缘部分透明, 中心为红色的网形菌落:接种胸 腔液典型菌落.可见到边缘整齐, 表面光滑,湿润,微隆起,较小的 红色菌落 2.4生化试验结果 接种肝菌株的生化培养基能 够发酵葡萄糖,乳糖,麦芽糖,H' 露醇,鼠李糖,木糖,阿拉伯糖,侧 金盏 醇产 矛醇 分解 ……,…1, 蔗糖,棉子糖,卫 苷,硫化氢,尿素 盐均为阳性,综合 I函 MODERNLI,ESTOCKANDPOUITRYBREEDINGINDUSTR3 组蕊~,,-mail:nmgxm>@sinaCOll'1.n 生化试验结果15.61,该菌基本上符 合大肠杆菌的生化特性,可鉴定 为大肠杆菌,见表1. 接种胸菌株的生化培养基能 发醇葡萄糖,麦芽糖,蔗糖产酸产 气,发酵乳糖产酸,木糖,棉子糖, 阿拉伯糖,甘露醇,水杨苷,硫化 氢,尿素分解管,山梨醇均为阴 性,综合生化试验结果.该菌基 本上符合葡萄球菌的生化特性, 可鉴定为葡萄球菌,见表2. 2.5药敏试验结果 该试验结果表明.对分离到 的2种菌均呈高度敏感的药物为 硫酸庆大霉素,注射用硫酸链霉 素,硫酸卡那霉素,阿莫西林,对 其它药物如复方庆大霉素,注射 表1杆菌生化试验结果 用青霉素钠,注射用青霉素G钾, 氟哌酸,注射用苄星青霉素呈中 度敏感,对复方新诺明,土霉素等 不敏感.该试验中高敏药物对2 种菌的抑菌圈直径见表3. 2.6动物试验结果 2.6.1人l丁感染小白鼠的临床症 状:接种心脏肉汤纯培养物的小 白鼠.24小时后有精神沉郁,采食 和饮水减少的现象,第3天时症 状消失.7天之内均未死亡. 接种肝脏肉汤纯培养物的小 白鼠.16小时后精神沉郁.采食饮 水减少,有时闭目呆立.第3天死 亡1只,第5天死亡1只 接种脾脏肉汤纯培养物的小 白鼠.16小时后精神沉郁.饮食欲 注:表中结果"0"为产酸产气."+"阳性."一" 阴性(即不产酸也不产气),下同. 表2球菌生化试验结果 菌别莫譬囊是纂臻譬妻阿莫西林 当代畜禽养殖业2004.12 下降,有的闭目呆立. 第5天时死亡1只. 接种胸腔液肉汤 纯培养物的小白鼠.24 小时后精神沉郁.饮食 欲下降.2天后症状逐渐 消失,7天内均未死亡. 对照组小白鼠未 见异常变化. 2.6.2人工感染小白 鼠的剖检:第3天死亡 的接种心培养物的小 白鼠,剖解时肺脏出 血,心包积液.其他脏 器无明显病变 第5天死亡的接 种肝培养物的小白鼠 剖解时心包,胸腔积 液,肺脏有出血斑.肝 脏质地变脆 第5天死亡的接 种脾培养物的小白鼠 剖解时心包,胸腔积 液,胃底部出血. 7天未死的小白鼠 各组剖解1只.各脏器 均未见明显病变. 2.6.3人T感染致死小白鼠的细 菌分离鉴定:取死亡小白鼠的心, 肝涂片,革兰氏染色镜检,心,肝 涂片中可见到G一短小杆菌,将心, 肝接种于肉汤,琼脂培养基均有 细菌生长,将分离得到的菌涂片, 革兰氏染色,镜检,可见到心,肝 涂片上为G一短小杆菌,两端钝圆, 无荚膜,无芽孢 3讨论与小结 3.1通过对4种病料分离出的2 种菌进行细菌形态学观察,培养 特性的鉴定和生化试验的分析. 最终鉴定这2种菌分别为致病性 大肠杆菌和葡萄球菌. 3.2通过对病死猪进行病理剖解 和细菌学检查.再结合其流行病 学,临床症状及病理变化,最后确 诊该病为猪大肠杆菌和葡萄球菌 混合感染. 3.3南于试验期问,实验室内没有 大肠杆菌多价O,K抗血清.因而未 能进行大肠杆菌血清型的鉴定 3.4进行药敏试验,目的在于指 导临床治疗用药,所以选取对2 种菌均呈高度敏感的药物,这样 才能达到最好的治疗效果 3.5大肠杆菌病是条件性致病菌 引起的一种疾病,该病一年四季 均可发生,在不良的环境条件和 其他诱因,如饲养管理不当,饲养 密度高,圈舍的卫牛条件差,饲料 配比不当及各种应激因素的作用 下,均可降低动物体的抵抗力,诱 发和促进大肠杆菌病的发生.在 应激或有其它病原感染及不良饲 养环境条件存在时,大肠杆菌感 染更为严重…,该病例即属有其它 病原感染的混合感染 3.6葡萄球菌病的发生和流行. 与各种诱发因素有密切关系.如 饲养管理条件差,恶劣环境,污染 MODERNLIVESTOCK,kNI)POUITRYBREEDINGINDUSTRY 圳耥\E一『11.dl:nmgxmy@s;ina.corn.cn 鸡新城疫病毒分离株细胞培养特性的研究 中之义 张仙保 衣虹 王海洋 内蒙古农业大学动物科学与医学学院010018 郎晨辉包头市动物防疫监督检验所014040 包头市改良站014010 包头市动监所014200 摘要:该试验对实验室保存的已适应于鸡胚的鸡新城疫病毒(NDV)分离株进行了 鸡胚成纤维 细胞(CEF)和仓鼠肾传代细胞(BHK.)的接种传代,同时利用96孑L微量多孑L板 培养BHK- 细胞单层.并在其上测定NDV分离株的细胞半数感染量(TCID?).结果表明:NDV 分离株在 CEF和BHK.细胞上引起典型的细胞病变,细胞变圆,聚集,脱落,残留的细胞呈拉网 状结 构.NDV分离株在BHK.细胞上的TCID?为0.02mL10'ars稀释的病毒液. 关键词:鸡:鸡新城疫;鸡新城疫病毒;细胞培养 鸡新城疫(NewcastleDisease, ND)是由鸡新城疫病毒(Newcastle DiseaseVirus.NDV)引起的主 要侵害鸡和火鸡的一种急性,热 性,败血性传染病.具有高度的 接触传染性.至今仍是严重危害 世界养鸡业的主要疫病之一l. 1926年.该病首次发生于印尼, 同年在英国的新城也发现该病. 故定名为新城疫[2-41.该病分布 世界各地.联合国粮农组织1989 年的年鉴报告记载.当时世界上 有67个国家和地区有新城疫疫 情131.中国是较为严重的疫区之 一 我国于1928年对该病已有 记载.1935年在我国某些地区流 行.死亡率很高.造成很大的经济 损失. 内蒙古自治区新城疫流行很 普遍.前几年,包头市红旗鸡场, 包钢鸡场,包头市共青鸡场都因 新城疫一次性被迫淘汰5000, 10000只以上.1990年包头郊区 某专业村暴发新城疫疫情.死亡 及淘汰25000只鸡.占总饲养量 的三分之--I.近年来,随着世界 各国养殖业迅速发展,种禽的频 繁调动.新城疫也日趋严重.虽然 各国政府均做了很大努力,广泛 地应用新城疫疫苗控制.但疫情 <>?<>?<>?<>?<>?<>?<>?()? <>?<>?<>?(,?<>?<>?C'?<>?<>? <>?<>?<>?<>?<>?<>?<>?<> ?<>?<>?<>?<>?<>''>?(>?<>? <>?<>?<)?0?o'<>?<>?<>?<>? <>?<>? 程度严重,以及有并发病存在使 机体抵抗力减弱等由于葡萄球 菌在自然环境中分布极为广泛. 空气,尘埃,污水以及土壤中都有 存在,宿主范围很广,人和动物的 带菌率很高,要根除这样一种条 件性致病菌和它引起的疾病是不 可能的.为控制该病的发生.首先 要减少敏感宿主对具有毒力和耐 抗生素菌株的接触.还要严格控 制有传播病菌危胁的病人和病 畜.被污染的手和物品要彻底消 毒.对动物要加强饲养管理,防止 因环境因素的影响而使抗病力降 低,防止皮肤外伤,圈舍,运动场地 应搞好卫生,以降低感染机率… 3.7根据调查.该猪场饲养管理 条件不够完善.通风不良.环境卫 生不好.饲养密度大,加之气候变 化,使猪群抵抗力下降.从而诱发 大肠杆菌和葡萄杆菌的混合感 染.建议养殖户一定要做好预防 _T作.拟定合理的免疫程序.对圈 舍进行定期消毒.必要时进行药 物预防.关键要完善科学管理体 系,加强饲养管理,搞好环境卫 生,注意通风,避免高温,高湿及 有害气体的危害.提供优质全价 料,及时消除猪群抵抗力下降的 各种因素 参考文献: [1]蔡宝祥.家畜传染病学fM1.第四 版.北京:中国农业出版社出 版.2001. 甘肃农业大学.兽医微生物学实 验指导IM】.北京:中国农业出版 社.2001. 汪诚天.叶祝年.兽医实验检验 手册fM1.1E海:科学技术出版 社.1984. 东秀珠,蔡妙英.常见细菌系统 鉴定手册IM】.北京:科学技术出 版社.2001. 姚火春.兽医微生物学实验指导 fM1.第二版.北京:中国农业出 版社出版.2002. 郝士海.现代微生物培养基和生 化试验于册fM1.一E京:中国农业 出版社出版.1992.田 ,J,J,J,J,J b