HPLC测定二十五味鬼臼丸中胡椒碱的含量

HPLC测定二十五味鬼臼丸中胡椒碱的含量 HPLC测定二十五味鬼臼丸中胡椒碱的含 量 2007年2月 第29卷第2期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedieine February2007 Vo1.29No.2 HPLC测定二十五味鬼臼丸中胡椒碱的含量 陈寒杰 (青海省人民医院,青海西宁810007) 关键词:HPLC;二十五味鬼臼丸;胡椒碱 中图分类号:R927.2文献标识码:B文章编号:1001-1528(2007)02-0296-02 二十五味鬼臼丸由鬼臼,藏茜草,藏紫草,胡椒,矮紫堇, 巴夏嘎,榜嘎等27味药组成.具有祛风镇痛,调经血.用于 妇女血症,风症,子宫虫病,下肢关节疼痛,小腹,肝,胆,上体 疼痛,心烦血虚,月经不调等功效.为中华人民共和国卫生 部药品——藏药分册…收载,本文建立了方中胡椒所含 有效成分胡椒碱的HPLC色谱含量测定. 1仪器与试药 1.1仪器岛津HPLC色谱仪LC-2010AHT,LC一10ADVP输 液泵,全自动进样器,Vfrr系列紫外检测器,CLASS-VP色谱 工作站. KQ-250型超声波提取器(功率250W频率40kHz 昆山市超声仪器有限公司). 1.2材料及试剂胡椒碱对照品(中国药品生物制品检定 所,供含量测定用,批号0775-200202),色谱纯甲醇,高纯水, 其余试剂均为分析纯,样品及药材均为产地市购. 2方法与结果 2.1色谱条件用十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂;甲醇- 水(77:23)为流动相.检测波长为343nm.柱温:室温. 2.2内标溶液的制备精密称取对二甲氨基苯甲醛适量, 置棕色量瓶中,加无水乙醇制成每1mL含0.556mg的溶 液. 2.3对照品溶液制备精密称取胡椒碱对照品适量,置棕 色量瓶中,加无水乙醇得到每1mL含胡椒碱0.990mg的溶 液.精密量取该溶液和内标溶液各2mL,置25mL棕色量 瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,备用. 2.4供试品溶液的帝】备取本品约4g,精密称定,置100 mL棕色量瓶中,加无水乙醇约80mL,超声处理(功率250 w,频率40kHz)30min,放冷,加无水乙醇至刻度,摇匀,滤 过,精密量取续滤液20mL与内标溶液2mL.置25mL棕色 量瓶中,加无水乙醇至刻度,摇匀,取续滤液,即得. 2,5阴性对照品溶液的制备取不含胡椒的各原料.按二 十五昧鬼臼丸生产工艺制备胡椒碱阴性对照品.取胡椒碱 阴性对照品适量,按供试品溶液制备方法制备. 2.6线性关系的考察分别精密吸取胡椒碱对照品溶液 (0.620mg/mL)及内标溶液(0.558mg,/mL)的混合溶液1. 10,20,30,40,50,60,80,100ILL,注入液相色谱仪中,依法测 定,以胡椒碱进样量为横坐标,校正因子为纵坐标,进行线性 回归,得回归方程如下,Y=一17053.1+409621.5X,r= 0.9999,结果表明胡椒碱在0.0496,4.960g范围内呈良 好线性关系. 2.7阴性对照试验对照品溶液,供试品溶液及阴性对照 品溶液分别进样测定,结果显示在与胡椒碱对照品相同保留 时间处未见明显吸收峰,故认为无干扰.见图1,4. 图1胡椒碱对照品色谱图 2.8稳定性试验同一浓度供试品溶液,分别于制备后0, 1,2,4及8h测定胡椒碱峰面积,考察其稳定性,结果胡椒碱 RSD为0.088%.结果表明胡椒碱在提取后8h内测定基本 稳定. 图2内标物质色谱图 2.9精密度试验精密吸取胡椒碱对照品及内标溶液的混 合液l0L,重复进样6次,求得峰面积的相对标准偏差,结 果RSD为0.122%.结果表明仪器和操作精密度良好. 2.10重复性试验批号为20040823的二十五昧鬼臼丸样 品共5份,进行测定,测得胡椒碱平均含量为5.384mg/g, RSD为0.655%.结果表明试验方法的重复性良好. 收稿日期:2006-02-20 作者简介:陈寒杰(1964一),女,副主任药师,从事药品质量标准研究及药品检验工 作,电话:097|-3899623. 296 2007年2月 第29卷第2期 中成药 ChineseTraditionalPatentMedicine February2007 Vo1.29No.2 O.5O O.25 O.o0 _ \. 一 \2n萤堂n . 娶.夫.妻1一?? 012345678 t/mln 图3二十五昧鬼臼丸样品色谱图 图4二十五昧鬼臼丸阴性HPLC色谱图 2.11回收率试验采用加样回收方法,精密称取已知含量 的样品(5.384mg/g)1.0g,分别精密加入胡椒碱对照品溶 液(0.990mg/mL×2,3,4mL),按供试品溶液的制备方法及 上述色谱条件测定,结果见表l. 以上测定结果表明,本品具有良好的回收率. 2.12样品测定结果样品测定结果见表2. 3讨论 3.1供试品制备对比了超声处理和回流提取,两者差异不 显着,因超声处理较为方便,故选择超声处理提取. 3.2超声时间的考察分别考察了超声lO,2O,30min及 60min后提取液中胡椒碱的含量,结果超声处理30min后, 胡椒碱基本提取完全,测定结果变化不明显,故采用超声处 理30min. 3.3实验表明,本测定方法简单,测定结果准确可靠,灵敏, 重现性好.可用于本品的质量控制指标之一. 表1回收率试验结果 表2样品测定结果 参考文献: [1]中华人民共和国卫生部药品标准——藏药分册(一部)[S] 1995:156. [2]苗明三,李振国.现代实用中药质量控制技术[M].北京:人民 卫生出版社,2000. [3]中国药典2000年版一部[S].2000. [4]中国药品检验标准操作[M].北京:中国医药科技出版社, 2O0o. [5]王宝栗.中成药质量标准与标准物质研究[M].北京:中国医药 科技出版社,1994. [6]赵陆华主编.HPLC色谱法分析中成药成分手册[M].北京:中 国医药科技出版社,1994.