三代5-硝基咪唑类药物体外抗口腔毛滴虫的实验研究

三代5-硝基咪唑类药物体外抗口腔毛滴虫的实验研究 三代5-硝基咪唑类药物体外抗口腔毛滴虫 的实验研究 应用预防医学20O7年lO月第13卷第5期307 ? 实验研究? 文章编号:1673—75sx(2oo7)o5—0307—02中田分类号:R531.705文献标识码-^ 三代5,一硝基咪唑类药物体外抗口腔毛滴虫的实验研究 梁裕芬,陈海英 广西中医学院寄生虫学教研室(南宁530001) 【摘要】目的对三代5,一硝基咪唑类药物甲硝唑,替硝唑和奥硝唑体外杀灭口腔毛滴虫的效果进行比较和分析, 为临床用药提供依据.方法每种药物设0.5,1,5,10,25,50和100ttg/ml7个浓度进行体外杀虫试验.结果甲硝唑,替 硝唑和奥硝唑24小时内使12I腔毛滴虫全部死亡的最低有效浓度分别为10,25,25tLg/ml,浓度在25100btg/ml之间时奥 硝唑致虫体全部死亡所经历的时间比其他两种药物短.结论甲硝唑,替硝唑和奥硝唑都具有抗口腔毛滴虫的作用,甲 硝唑的有效杀虫浓度最低,浓度在25—100~g/ml之间时,奥硝唑杀虫效率最高. 【关键词】口腔毛滴虫;甲硝唑;替硝唑;奥硝唑 口腔毛滴虫(Triehomonastenax)寄生于人体口 腔,定居于齿龈脓溢袋和扁桃体隐窝内.过去有学 者认为它是口腔共栖原虫,但近年越来越多的流行 病学调查表明,口腔毛滴虫与牙周炎,牙龈炎,龋齿 等口腔疾患密切有关n.2】,此外还有口腔毛滴虫导致 支气管炎,肺炎,乳腺炎的报道臼-5]o 甲硝唑(Metronidazole)又名灭滴灵,除了用于治 疗肠道和肠外阿米巴病(如阿米巴肝脓肿,胸膜阿米 巴病等),阴道滴虫病,小袋虫病,皮肤利什曼病,麦 地那龙线虫感染外,目前还广泛用于厌氧菌感染的 治疗.替硝唑(Tinidazole)是继甲硝唑之后研制成的 疗效更高的抗原虫,抗厌氧菌药物.奥硝唑 (Ornidazole)则为甲硝唑,替硝唑之后的第三代新型 硝基咪唑类衍生物.此药物自20世纪70年代问世 以来,人们发现其对厌氧菌,阿米巴原虫,贾第虫,阴 道毛滴虫具有良好的杀灭作用,因而在口腔科,妇 科,内科,皮肤科等相关疾病中已得到广泛应用. 文献资料显示,甲硝唑伍用红霉素等药物可杀灭口 腔毛滴虫,治疗滴虫性口腔炎症b】.但3种药物单独 使用时,抗口腔毛滴虫的杀灭效果未见相关文献报 道.在本研究中,作者拟通过体外实验,对三代5,一 硝基咪唑类药物抗口腔毛滴虫的效果进行比较和分 析,为临床用药提供依据. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1虫种来自本校已证实有口腔毛滴虫感染 的学生.采用改良的!F.q(Loche—Egg—Serum)双相 基金项目:广西中医学院科研基金资助课题(Po5oo4) 作者简介:梁裕芬(1964一),女,广西北流市人,副教授,现从事寄生 虫学教学与研究. 培养基培养并传代. 1.1.2药物甲硝唑注射液:昆明市宇斯药业有限 ,产品批号: 责任公司2OO6年1O月27日生产 061027—01.替硝唑注射液:扬子江药业集团有限责 任公司2006年1O月27日生产,产品批号: 061027N0.651.奥硝唑分散片:湖南九典制药有限公 司20O6年1O月20日生产,产品批号:061001. 1.2方法 1.2.1虫种收集把长滴管内的空气挤去并伸到 液相底部,将转种48小时生长旺盛期的口腔毛滴虫 吸出,放入干净试管中,添加新鲜培养液混匀,用血 细胞计数板计数,调整悬液中虫体浓度为约1×10 个/ml,然后往每个装有,1F.q固相培养基的试管中加 入虫体悬液0.5ml(约5×10个虫体). 1.2.2药物配制用lock'S液分别稀释甲硝唑和 替硝唑注射液为g/IIll.奥硝唑分散片1粒 (250mg)溶解于100ml蒸馏水中,然后以lock'S液稀 释为2~g/ml. 1.2.3抗虫实验与效果观察往已含有虫体悬液 的试管中加入新鲜的lock'S液和配制好的药物,使 各管药物浓度分别为0.5,1,5,1O,25,5O和100t~g/ IIll.另设不含药的培养液作为对照.除对照组外,三 种药物的各个浓度均设两个重复试管.置37~C温箱 中保温培养,分别于药物作用后2,4,6,8,1O,12,24 小时取样,制作成临时装片,光学显微镜下观察虫体 存活情况. 1.2.4结果分级标准整张装片滴虫全部死亡为 " 一 " ,装片中发现1,2个活滴虫为"+",1,2个活 滴虫/每个视野(放大100倍)为"++",3个以上活 滴虫/每个视野(放大100倍)为"+++". 308 2结果 2.1甲硝唑体外抗口腔毛滴虫效果在高倍镜下 观察,用药2小时后,浓度为100P-g/ml组口腔毛滴 虫形态发生明显变化,虫体全部变圆,鞭毛和波动膜 运动明显减弱,大部分虫体只能轻微地左右摇摆. 用药4小时后,所有的虫体均停止运动,虫体内的颗 粒数增加,透明度开始下降,颜色开始变浅.再过2 小时后,全部胞膜边缘模糊,虫体裂解..50p.g/ml组 抗虫效果与loop.g/ml组基本相当.浓度为lO一 1oop.g/ml各组虫体经24小时后全部死亡,见表1. 2.2替硝唑体外抗口腔毛滴虫效果用药l2小时 后,浓度为looP-g/nil和50p.#ml组口腔毛滴虫全部 死亡.24小时后O.5lOp.g/m|组绝大部分虫体形态 正常,运动活泼,只有很少可能日龄较长的虫体变圆 或死亡,见表1. 衰1甲硝唑,替硝唑,奥硝唑体外抗口腔毛滴虫效果 组别, 发生了明显改变,几乎全部呈圆形;而lO,5,1和 0.5p.g/ml4组没有明显的变化.用药4小时后浓度 为1OO25p.g/ml3组虫体活动很微弱,尤其是 1oop.g/ml组.用药6小时后观察,1OO,50p.g/ml两组 虫体全部死亡,25p.g/ml组绝大多数虫体已死亡,只 有个别虫体还比较透明,但已无活动能力.满8小时 后观察发现25p.g/ml组虫体也全部死亡,但浓度为 lOp.g/ml及低于long/ml组虫体的形态及活动能力 变化不大.作用24小时后lOp.g/ml组虫体变圆.但 绝大多数尚未死亡,其他3组活动能力与对照组无 异. 3讨论 在本实验中,虫体死亡判断标准是判定药物作 用的关键.作者在此前的研究中观察发现,那些胞 质内颗粒较少,透明度较高的虫体,尽管其早已失去 了活动能力,但并不能被台盼蓝染色,应视为未死 亡.而只有虫体出现大量细小颗粒,透明度下降时 才被台盼蓝染成蓝色,说明虫体这时才是真正的已 经死去.本实验就是通过胞质的变化情况和胞膜是 否清晰来判断虫体的死活,省去了每次染色观察的 麻烦. ,替硝唑和奥硝唑在体外 实验结果表明,甲硝唑 都有抗口腔毛滴虫的作用,但各药物24小时内使口 腔毛滴虫死亡的最小有效浓度不同,甲硝唑为 lOp.g/nil,而替硝唑和奥硝唑均为25p.g/ml.此外,3 种硝基咪唑类药物杀虫的效率也有差异,浓度为 25loop.g/ml时奥硝唑致虫体全部死亡所经历的 时间比其他两种药物短. 【参考文献】 ++++++++++++++【1】褚兆苹,戴军,吴淑慧,等.大学生中不同人群121腔原 0.5???????虫调查【J】. 河北医科大学,20O6,27(6):562—564. 奥硝唑lOO+++++一【2】赵惠敏,杜娈英,何廉波,等.青少年齿龈内阿米巴感染 ++++一与口腔疾病关系分析[J].寄生虫与医学昆虫,20O6, 25++++++++一13(2):57—59. 10++++++++++【3】沈培民. 重视口腔分泌物的化验一滴虫性牙周炎【J】.121 5++++?????腔医学,1986.(03):l19. 1++++++++++++++【4】王圣湖,王尤.肺口腔毛滴虫病2例【J】.中国寄生虫 0?5???????病防治杂志,1985(3):213. 对照组+++++++++++++++++++【5】滕绪伟,朱春平.口腔滴虫乳腺感染1例【J】. 齐鲁医学 2.3奥硝唑体外抗口腔毛滴虫效果经奥硝唑作[6】篡发,19,99陈,新14(峰1),:郭43 文.献.奥硝唑的临床应用[J】.海峡用2小时后,1OO,50和25p.g/ml3组虫体的外形 都药学,2005,17(6):142—144. 收稿日期_,2007—05—11 +++.+一??一?? ++++}}+卅卅,卅一一卅卅, +++++}+一 ,,,卅+?,卅卅 + 卅,,,卅,,,卅 十++++十十十+ ++???????.?? ++++++++++++ ???j=?仆????? 卅卅卅卅卅,卅,卅,卅, m?m.m?m 唑唑 硝硝 P