实验一漂白粉有效氯含量的测定

实验一漂白粉有效氯含量的测定 河南师范大学生命科学学院 水产养殖专业课程课程名称:水产动物疾病学实验 讲授人:孔 祥 会 2005 年 12 月 《水产动物疾病学实验》课程基本信息一、课程名称:水产动物疾病学实验二、预修课程:动物学，水化学，微生物学，鱼类学，生理学三、教学时数:20 学时四、使用教材:自编水产动物疾病学实验指导五、考核方式:实验课成绩包括实验操作50，实验30和平时表现 20。 实验一 漂白粉有效氯含量的测定一、实验目的 1、了解漂白粉的性质、用途及作用原理。 2、学会漂白粉有效含氯量的简易测定方法。二、实验原理 漂白粉主要成分为 CaClO2遇到水极易分解，形成次氯酸，具有极强的氧化化用，以此杀灭病原体。 CaClO2，2H2O ? CaOH2 2HClO 2HClO ? H2O Cl2 由于漂白粉极易氧化分解，为确保药效，在使用之前必须使用对有效氯含量进行测定。三、实验材料 漂白粉，依据测定有效氯含量的设计方法所必需仪器和药品。四、实验设计 1 讲解测定漂白粉有效氯含量的意义及必要性，搞清楚测定原理。 2 指导学生查阅资料，确定测定方法。 3 审阅实验设计，开始实验。 4 评价采用的实验方法。五、思考 1. ?蚴漂白粉的性质、用途及作用原理。 2(计算所测的漂白粉有效氯含量。附:教师参考的实验方法 一 蓝黑墨水滴定法简易法1 实验材料 漂白粉，蒸馏水，蓝黑墨水， 100 毫升的带刻度锥形瓶，50 毫升的锥形瓶，玻 璃棒，5ml、2ml 刻度移液管，托盘天平，吸耳球，药匙。2 实验步骤 1. 用托盘天平称取所需测定的漂白粉 5 克。 2. 取适量蒸馏水将漂白粉溶解，加水定容至 100 毫升，充分搅拌，静置。 3. 待溶液澄清后，使用 5 毫升移液管取其上清液逐滴滴入三角锥瓶中，共滴 38 滴。记录 38 滴所用去上清液的毫升数，计算出每一滴上清液所用的毫升数。 4. 另取 2 毫升的移液管吸取少量蓝黑墨水，在管壁内转动弃去。然后取蓝黑墨水向 三角锥瓶中滴定，边滴定边摇动锥形瓶，当溶液的颜色由棕色变黄色后，最后呈 稳定的蓝绿色时，记录所用蓝黑墨水的毫升数。 5. 计算: 滴定消耗的蓝黑墨水毫升数 1 有效氯含量() ———————————— × —— 每滴上清液的毫升数 100 二 碘量法《卫生消毒技术》(第三版) 漂白粉的主要成分为 CaCLOCL和 CaCL2 的混合物前者与酸反应放出 CL2 具有漂白、杀菌和消毒作用，故称之为有效氯。漂白粉的质量是以有效氯的含量为衡量标准的。 ， 2 CoClOCl2H ?Ca HOClHCl HOClHCl?Cl2H2O A1 碘量法原理 洗涤剂中有效氯在酸性溶液中与碘化钾起氧化作用，释放出一定量的碘，再以硫代硫酸钠标准溶液滴定碘，根据硫代硫酸钠标准溶液的消耗量计算出有效氯含量。 A2 试剂 A2.1 0.025mol/L 硫代硫酸钠标准溶液。 A2.2 2mol/L 硫酸溶液。 A2.3 10,碘化钾溶液。 A2.4 0.5,淀粉溶液。 A3 操作方法 称取含氯消毒剂 1.00g，用蒸馏水溶解后，转入 250mL 容量瓶中，向容量瓶加蒸馏水至刻度、混匀，向碘量瓶中加 2mol/L 硫酸 10mL，10,碘化钾溶液 10mL，混匀的消毒液 5mL 溶液即出现棕色，盖上盖并混匀后加蒸馏水于碘量瓶缘，用 0.05mol/L 硫代硫酸钠标准溶液滴定游离碘，边滴边摇匀，待溶液呈淡黄色时加入 0.5,淀粉溶液 10滴溶液立即变蓝色，继续滴定至蓝色消失，记录所用硫代硫酸钠的总量，重复 3 次取平均值计算。 A4 计算:根据硫代硫酸钠的用量，计算有效氯含量，亦即 1mol/L 硫代硫酸钠1mL 相当于 0.0355g 有效氯，因此可按下式计算有效氯含量: cv0.035 有效氯含量——————100 w 式中: c——为硫代硫酸钠的摩尔浓度; v——消耗代硫酸钠的体积，ml; W——碘量瓶中含消毒剂的量，g。 三 测氯试纸法国标方法编号:CDC/SB 304-21 适用范围 含氯消毒剂是目前应 用最广泛的消毒剂。常用的品种有漂白粉、漂白粉精、次氯酸钠、氯胺 T、氯化磷酸盐、二氯或三氯异氰尿酸钠等。2 试纸性能 反应范围:10,50000ppm。比色范围:10,20000ppm。反应颜色:淡黄?黄?橙?橙红?棕?褐色。标准比色版为 10、25、50、100、150、200、300、500、1000、2000ppm。3 使用方法 称取漂白粉 1g 置入 1L 蒸馏水中，充分混匀。静置后测试。测试时一手握试纸盒，拇指压住试纸于出口处，另一手拉出纸条，在楔状齿上割断，浸入消毒液后立即取出，与标准色版进行比色， 实验二、土法免疫疫苗的制作及其使用一、实验目的 了解人工免疫的原理，学习疫苗的制作及其使用方法。二、实验药品: 甲醛、碘酒、鱼用生理盐水、敌百虫、青霉素、链霉素。三、实验工具 解剖器械、研钵、三角瓶、注射器、水浴锅、玻璃漏斗、脱脂纱布、天平、量筒、 琼脂培养平板、小封口瓶、石蜡等。四、实验材料 具有典型病毒性出血病病症的草鱼(或以健康鱼代替)。五、实验内容 (一) 疫苗制备: 病鱼材料来源:少量使用时可在发病鱼池挑选自然患病草鱼，大量制备疫苗，可采用人工攻毒的方法获得病鱼。 1. 取材:取具有典型病毒性出血病症状的草鱼，用碘酒消毒鱼体腹部，用消毒剪刀剖开鱼腹，再用消毒镊子取出肝、脾、肾及充血的肌肉，称重，剪碎，放在研钵中。 2. 制备:将所取内脏组织加十倍生理盐水，用研钵充分捣碎、研磨成糊状，用双层纱布过滤于三角烧瓶中，弃去滤渣(或使用匀浆器将组织匀浆捣碎，再用 3000 转/分的速度离心 30 分钟， 。 取上清液) 按每毫升上清液加入青霉素 800 单位和链霉素 800微克，最后再加入 ，摇匀。 3. 灭活:将上述制成的原毒疫苗，放适量福尔马林使其最终浓度成为 0.1 在恒温水浴锅中加温至 32?灭活 72 小时。在灭活过程中，每天摇匀 2 次。 4. 细菌检查:将已灭活的去毒疫苗在琼脂培养平板上划线接种，放入恒温培养箱培养，以检查疫苗的消毒程度。最后，对制作疫苗取样做安全试验和效力试验。合格疫苗，装进小封口瓶，以石蜡封口，置 48?冰箱保存备用。 5. 安全试验:取上述灭活好的疫苗，以当年健康的草鱼种经腹腔注射，每尾注射0.20.5 毫升，在水温 2528?的水体中饲养，连续观察 15 天，如果没有发现出血病症状，证明此疫苗是安全的。 -1 6. 效力试验:对经上述疫苗免疫过的草鱼种，另用 1×10 新鲜的或甘油保存的病鱼组织制成病毒悬液，每尾按 0.20.5 毫升经腹腔注射，并设未经免疫的对照组，连续观察 15 天，若对照组全部发生出血病，死亡率在 70以上，病鱼症状与天然发病鱼的症状一样，而免疫组获得保护，仍健康存活，说明该疫苗有效，否则说明疫苗无效或效力不够。 (二)鱼体注射: 1. 用 1/5001/400 的敌百虫药液浸洗鱼体，一可使鱼体麻醉，便于注射，二是可以杀灭鱼体寄生虫。 2. 将制备好的去毒灭活疫苗，充分混匀，然后按 1:100 生理盐水稀释使用，10,15cm 的草鱼种，每尾注注射 0.20.3ml，15cm 以上的注射 0.5ml。采用胸鳍基部或背部肌肉注射。六、思考题: 1. 为什么要进行人工免疫, 2. 简述组织浆灭活疫苗的制备方法。 实验三、水产动物疾病常规检查与诊断一、实验目的 学习检查病鱼的方法，初步识别各种病原体。二、实验工具 解剖盘、 解剖器械(解剖刀、大小剪刀、镊子、解剖针等)、培养皿、盖玻片、载玻片、显微镜、解剖镜、0.7的生理盐水等。三、实验材料 活的或刚死的病鱼四、检查方法 : 1、肉眼检查法(目检) 由于病原体的寄生，往往在病鱼的相应部位呈现出一定的病理变化，有时症状很清楚，用肉眼就可诊断，例如，水霉以及一些大型的寄生原生动物、甲壳动物等。但这种方法也有一定的局限性，有不少的病原，对鱼体却不表现出明显的病状。一些病原体及相关症状，又 往往因隐藏在寄主的器官组织内，肉眼也难于鉴别。因此，除用肉眼检查外，还应进行镜检，以保证检查结果之完整、可靠、正确。 2、光学显微镜检查法(镜检): 镜检是用光学显微镜或解剖镜代替肉眼检查病变标本或病原体的方法，主要使用载玻片压展法观察，适用于低倍或高倍显微镜检查，方法是用剪刀或镊子取出一小块组织或一小滴内含物置于载玻片上，滴加一小滴蒸馏水或生理盐水，盖上盖玻片，轻轻地压平后，先在低倍显微镜下检查，发现寄生虫或可疑现象，再用高倍显微镜仔细检查。五、检查步骤 常见的主要鱼病大都发生在体表、鳃、肠道三个部位，故一般在实际诊断上，常只着重检查这三个部位: 1、体表: 将鱼放在解剖盘里，首先观察其体色及肥瘦等有关情况，按顺序从头部、嘴、眼、鳃盖、鳞片和鳍条等处仔细观察。注意观察皮肤是否擦伤或腐烂、是否长了水霉、有无发炎充血或出血、鳍条是否蛀烂、有没有锚头蚤、虱等寄生虫以及白色小点状的小瓜虫囊泡或白色的粘孢子虫孢囊等。在鱼类体表除肉眼可能见到的病症和病原体外，往往还有许多肉眼看不到的寄生虫，如斜管虫、指环虫、鱼波豆虫、小瓜虫、口丝虫、隐鞭虫、车轮虫、三代虫等，这些病原须用镜检才能观察清楚，检查方法是用解剖针或弯头镊子刮取体表粘液，置于载玻片上，加上一、二滴生理盐水，盖上盖玻片进行镜检。小白点或黑色孢囊经玻片压碎后可以看到虫体形态。 2、鳃: 肉眼首先检查，观察鳃丝的色泽，粘液的多少，有无充血、发白、肥肿;有无污 ;有无肉眼可见的白色胞囊及大型的寄生虫等。然泥，是否腐烂，鳃盖是否“开天窗”后取部分组织放在载玻片上，加少量生理盐水，盖上盖玻片，在解剖镜或显微镜下检查。鳃是特别容易被病原体寄生的器官，水霉、各类原生动物、单殖吸虫、复殖吸虫类的囊蚴、软体动物的幼虫、甲壳类等，在鳃上都可以找到。 检查时，每边鳃至少要检查两片。鲢、鳙还要检查鳃耙。取鳃丝检查时，最好从每边鳃的第一鳃片接近两端的位置剪取一小块，因为这个部位寄生虫较集中。检查完小型寄生虫后，可把整个鳃放在培养皿里，放在解剖镜下观察，观察时，用两根解剖针把鳃丝逐条拔开，仔细检查。最后用弯头镊子把每片鳃上的粘液完全刮下，并再用水稀释后，在镜下或用肉眼观察，吸虫、软体动物之幼虫、甲壳类都可以见到。 3、肠道: 检查肠道时，先用生理盐水把肠外壁脂肪组织除干净，然后将肠管拉直。先用肉眼观察，肠外壁如有许多小白点，通常是粘孢子虫的胞囊。再分别将肠道的前、中、后段各剪开一个小口，用小镊子从小口取出一些内含物放载玻片上加一小滴生理盐水，盖上盖玻片，在显微镜下检查各有一些什么病原生物，每段肠道要同时检查两片;最后再用剪刀小心地把整条肠道剪开，剪的时候将一侧剪尖向上翘地插入肠腔，由后向前剪开肠壁，注意勿把肠内的大型寄生虫剪断，如果发现有大的寄生虫，先把它取出放于生理盐水中，再看看肠内壁有无小白点、有无溃烂、发红发紫或白色的瘤状物。最后把肠的内含物刮下来，放在培养皿中，加入生理盐水稀释并搅匀，在解剖镜下检查。六、病原体的计数标准 1、 表示病原体数量的符号: “”表示有; ”表示多; ”表示很多。 病原体数量用“”表示， “ “ 2、 各种病原体的计数 传染性鱼病，如草鱼出血病、烂鳃病、白皮病、赤皮病等按病状的严重程度分别 “ “用“”表示轻微; ”表示较重; ”表示严重。还须用文字描述病状情况。 原生动物个体小，并且不同种类个体大小差异又很大，纤毛虫、毛管虫在低倍显微镜视野下有 120 个虫体记“”;2150 个虫体记“ ” ， ;51 个虫体以上记“ ”小瓜虫除按上面标准记数外，如计算囊泡时，则可用文字说明。鞭毛虫、变形虫、孢子虫则以显微镜的高倍视野为单位，具 体标准同上。胞囊的计数，用文字说明。 单殖吸虫、线虫、绦虫、棘头虫、甲壳动物、软体动物的幼虫，在 50 个以下均以数字说明，50 个以上，则说明估计数字或者部分器官里的虫体数，例如，一片鳃、一段肠子里的虫体数。七、检查病鱼的注意事项 1、供作检查诊断用的鱼，要用活的或刚死不久的。 2、检查病鱼过程中要保持体表湿润，取样时，标本应放在盛水的水桶。路较远，没有水桶或其它容器，样品可用湿布或湿纸包裹，以防干燥。 3、检查解剖过程中，所分离的器官应保持其完整性，分开放置，并保持其湿润，防止干燥。同时还要注意防止各器官间病原体的相互污染。 4、所有用具在对某一条鱼，甚至同一条的不同器官接触过的，都要洗干净后才可用在另一条鱼或另一器官上，避免诊断时产生病原体寄生部位的混乱。 5、检查时，应按照一定的程序进行，不能肯定的病变标本或病原体，应留下标本，以备日后进一步研究。八、思考题:1. 检查病鱼时应注意哪些问题,为什么,2. 根据你所检查的病原，对病鱼做出初步诊断。 实验四 传染性鱼病的观察和诊断(一):细菌病一、实验目的 通过对细菌性鱼病病变标?竞筒? 宓墓鄄欤 莆掌 拘杂悴〈蛳禄 , ?笛楣ぞ?显微镜、放大镜、解剖工具、涮氐悖 氛锒洗 载玻片、盖玻片、酒精灯、吸管、火柴等。三、实验材料 1、 白皮病、肠炎病、赤皮病、烂鳃病、腐皮病、疖疮病等病固定标本。 2、 传染病病鱼的活体标本。四、实验内容及步骤 1、观察白皮病和打印病的病鱼，注意病变部位在什么地方，主要是些什么变化, 2、观察赤皮病及疖疮病的病鱼，注意鳞片和鳍上有什么变化，病 、观察烂鳃病的患病草鱼，注鱼是什么鱼，背部肌肉有无浮肿以及鳃上的情况。 3 意鳃丝是否腐烂发白，有无污泥，主鳃盖骨内表皮充血否，有无开“天窗”现象。如果是新鲜的病变标本，可从鳃的腐烂部分取一小块鳃丝，放在显微镜下检查，一般可以见到鳃丝软骨尖端外露，附着许多粘液和污泥，有许多细长的粘细菌附着于上面。 4、观察患肠炎病的草鱼，注意体形变化，腹部膨大否，肛门情况，肠管在什么位置上开始出现变化。病鱼肠中有无食物等。五、思考题: 1、根据对病变标本和病原体的观察，用自己的语言描述病变情况和病原体的特征。 2、比较上述传染性鱼病病症特征，你发现这些疾病有哪些共同特点, 实验五 传染性鱼病的观察和诊断(一):真菌病一、实验目的 通过对真菌性鱼病病变标本和病原体的观察，掌握其特点，为正确诊断传染性鱼病打下基础。二、实验工具 显微镜、放大镜、解剖工具、载玻片、盖玻片、酒精灯、吸管、火柴等。三、实验材料 3、 水霉病、鳃霉病固定标本。 4、 真菌病病鱼的活体标本。四、实验内容及步骤 1、观察患水霉病的病鱼，注意菌丝着生部位，呈何形状，色泽以及鱼受害情况。 2、观察鳃霉病和肤霉病病鱼标本，肤霉病的病原有两种，绵霉和水霉，水霉主要寄生在鱼的表皮，真菌丝是细长的丝状体，大量繁殖呈灰白色的棉花状，肉眼易于辨认。鳃霉病的特点是病原体侵入鳃丝，鳃微血管被堵塞，鳃失去正常的鲜红色而呈苍白或粉红色，鳃霉肉眼不容易被观察到，须用显微镜检查。 3、观察受害鱼卵，有什么变化，与活卵有那些不同。 4、取一部分菌丝体在显微镜下观察，注意菌丝体的形状和构造，有无分支，有无孢子囊，什么形状, 5、取患鳃霉病的小鱼进行镜下观察，注意菌丝生长情况。五、思考题: 1、根据对病变标本和病原体的观察，用自己的语言描述病变情况和病原体的特征。 2、比较上述传染性鱼病病症特征，你发现这些疾病有哪些共同特点, 实验六 原虫性疾病的观察诊断一、实验目的 识别寄生于鱼类的常见鞭毛虫、肉足虫、孢子虫和纤毛虫，通过观察它们的形态特征及部分病变标本， 为诊断鱼类的原虫性疾病打下基础。二、实验药品 二甲苯、生理盐水、碘液、香柏油、甘油酒精等。三、实验用具 显微镜、解剖镜、解剖器具、载玻片、盖玻片、纱布等。四、实验材料 锥 体 虫 ( Trypanosoma spp )、 隐 鞭 虫 ( Cryptobia spp )、 鱼 波 豆 虫 、六鞭毛虫(Hexamita spp)(Ichthyobodonecatrix) 、内变形虫(Entamoeba spp) 、 、 虫(Myxosoma cerebralis) 碘 虫 Myxobolus driagim)艾美虫 Eimeria spp) 粘体 ( 、泡 ( 、两 极 虫 ( Myxidium spp ) 尾 孢 虫 ( Henneguya spp ) 四 极 虫 ( Chloromyxum 、 、hypophthalmichthys)、格留虫( Glugea)、肤孢虫( Dermocystidium spp)、车轮虫(Trichodina spp)小 虫 Ichthyophthirius spp)斜 虫 Chilodonella cyprini) 、瓜 ( 、管 ( 、杯体虫、毛管虫等的活体标本或玻片染色标本。五、实验内容(一)鞭毛虫病: 1、 锥体虫病 锥体虫寄生在鱼类的血液内。检查时，将要检查的鱼放在清洁的解剖盘中，可从鳃动脉或心脏取得血液，以吸管吸取血液放在培养皿中，稍等几分钟，待血清析出后，取少量血清于载玻片上镜检。锥体虫在血中活泼运动，行动胞器是一根从后基体伸出的鞭毛，沿虫体边缘构成波动膜，向前伸展游离于体前端，称前鞭毛，虫体狭长，一般体长都在 50 微米以下。 2、隐鞭虫病 鳃隐鞭虫寄生在鱼类鳃上或皮肤上，活的鳃隐鞭虫用后鞭毛固定在鳃丝表皮上，大量寄生时，成群的聚集在鳃丝两侧，波动膜不停地做波浪式摆动。细胞质活体时呈淡绿色或无色。 染色标本:体长 8.7(7.710.8)微米;体宽 4.1(3.94.8)微米。身体狭长形，轮廓象一片柳叶。生毛体 、鱼波豆虫病 漂游鱼波豆虫寄生在鱼类的皮肤或在身体前端，前、后鞭毛等长。 3 鳃上，常用两条鞭毛插入皮肤的表皮细胞间，数量多时常成群聚集在皮肤表面及鳃丝两侧。活的虫体，细胞质一般是无色透明，有时可见到几个发亮的食物粒，刚从鱼体上下来的鱼波豆虫好象一片叶子，身不由己的漂游。经过一段时间后，才恢复正常状态，慢慢游泳前进。 固定染色的标本:体长 8.7(5.511.5)微米;虫体从侧面观呈梨形或卵形。体宽平均为 5.5 微米。侧腹面观略似汤匙，并有两条纵的口沟。口沟的前端有生毛体，从此长出两根等长向后伸的鞭毛，胞核圆形，位于身体中央或稍前。 3、 六鞭毛虫病 六鞭毛虫主要寄生于草鱼的后肠(近肛门 12 寸的肠管)。在胆囊、膀胱以及肾脏也往往出现。该虫有 8 根鞭毛，六根向前，两根向后，营养体卵形或长圆形，两侧对称，背腹扁平，体长 5.48.2 微米;体宽 34.3 微米。活体标本游泳很迅速，大量寄生时，在低倍镜下观察，好象一群受惊的蚂蚁四散狂奔。(二)肉足虫病 鲩内变形虫:该虫主要寄生在二龄以上草鱼后肠。三寸左右的草鱼也偶有感染。鲩内变形虫营养体灰色。运动时能不断伸出叶状伪足。胞质分内、外两层。内层胞质常表现为细小空泡，活体时能见到透明圆形胞核。染色的标本，胞核圆形，核的周围排列着许多小的染色质粒，核的中央为核内体，在染色质粒与核内体之间，有不明显放射状非染色质丝。营养体大小为 1116 微米。(三)孢子虫病 1、艾美虫病 艾美虫寄生在鱼类肠腔。在其发育过程中，都要产生圆形或椭圆的卵囊，卵囊的直径为 614 微米，卵囊外面有一层厚而透明的卵囊膜，有一小而不时显的卵孔，卵孔上有一盖。成熟的卵囊具有 4 个孢子，每个孢子有 2 个孢子体和 1 个孢子残余体，每个孢子体有 1 个胞核、长而弯的孢子体，在孢子里互相颠倒排列。在卵囊膜内还有卵囊残余体和 12 个极体。 2、碘泡虫病 碘泡虫寄生于饲养鱼类体表、鳃、肌肉、心脏、肠道、中枢神经及感觉器官。寄生时可形成肉眼可见的乳白色球形胞囊。 碘泡虫的孢子一般呈卵形、梨形、椭圆形，表面光滑或具褶皱，两个 梨形的极囊，并列于孢子的一端，胞核不易见到，胞质中有一个明显的嗜碘泡。 3、粘体虫病 粘体虫除寄生在鱼的体表和鳃部外，多数是寄生在鱼的内部器官里。如中华粘体虫寄生于鲤的肠、胆、脾、肾、膀胱;脑粘体虫寄生于鲢、鳊、鲫的脑、肠、肾、脊髓、心脏、膀胱等处。 粘体虫属的孢子壳面观呈圆形、卵形、椭圆形，两个梨形的极.