螺旋藻在体外对双歧杆菌及乳杆菌增殖的促进作用

螺旋藻在体外对双歧杆菌及乳杆菌增殖的促进作用 第 11 卷第 4 期 Vol111 ,No14 中 国 微 生 态 学 杂 志 Aug11 9 9 9 1 9 9 9 年 8 月 螺旋藻在体外对双歧杆菌及乳杆菌增殖的促进作用 解放军第 401 医院 青岛 266071 梁 冰 于学军 吴力克 海洋大学生命学院 青岛 266003 张学成 摘 要 通过用改良的 TP Y 和 GAM 培养基作为螺旋藻的基质 ,在试管内证实了螺旋藻对双歧杆菌 、乳杆菌生 长的促进作用 。结果显示 ,钝顶螺旋藻在实验浓度下 ,对双歧杆菌和乳杆菌的增殖作用与对照组相比有非常显著的 差异 ,这一结果也说明了钝顶螺旋藻在调整肠道菌群 ,改善肠道内环境方面的作用 。 关键词 螺旋藻 双歧杆菌 乳杆菌 促进作用 ( ) 螺旋藻 pirulina作为一种全新的多功能营养食品 , ,置厌氧手套箱内 ,35 ?孵育 48 小时 。 分振荡后 s115 细菌生长增殖数量的测定 采用平板滴注法 进具有调节人体生理平衡 , 促进细胞新陈代谢 , 增强机体 免疫力等提高人体健康水平的多种功效 。为了了解螺 活菌计数 。将经 48 小时厌氧孵育的各实验浓度的菌 液- 1 - 6 旋藻对肠道菌群尤其是对生理性细菌生长的促进作用 , 稀释 10 ,10 倍 ,在每一稀释度中取 0101ml ,以滴 注我们观察了螺旋藻在体外对双歧杆菌及乳杆菌生长的 法点种在 TP Y、GAM 琼脂平板表面 ,置厌氧手套箱内 促进作用 。结果如下 : 经 35 ?,48 小 时 培 养 后 , 分 别 计 数 每 一 稀 释 度 TP Y、 1 材料与方法 GAM 琼脂平板表面生长的细菌菌落数 。 116 结果统计 每毫升菌液中的活菌数计算 : 细 111 培养基 改良 TP Y 及 GAM 培养基 。TP Y 培 ( 菌菌 落 数 ×稀 释 倍 数 ×100 ?3 = cf u/ ml colo n form u2 [ 3 ] 养基及 GAM 培养基。改良的培养基仅含有维持备试) nit,结果换算成以 10 为底的对数值进行统计比较 。统 菌最低生长限度的成份和浓度 ,并作为螺旋藻添加剂的 计方法采用两几何均数相比较的 t 检验 。 基质 , TP Y、GAM 培养基作为活菌计数的培养基 。 2 结 果() 112 备试菌种 双歧杆菌 Bifidobecterium: 角双 () () 歧杆菌 B . angulat um、短双岐杆菌 B . breve、长双歧杆 211 螺旋藻在不同实验稀释浓度下 ,对六株双歧 () () 菌 B . lo ngum、两歧双岐杆菌 B . bifidum、婴儿双歧杆 杆菌的 增 殖 促 进 作 用 见 表 1 , 当 螺 旋 藻 稀 释 浓 度 为 () () 菌 B . infantis、青 春 双 歧 杆 菌 B . adolescentis、乳 杆 菌 0105 、01025 、0101 、01005 时 ,对双歧杆菌的生长促进作() () L acto bacillus:嗜酸乳杆菌 L . acidop hilus、干酪乳杆菌 () 用与对照组相比有非常显著的差异 p < 0101。 () () L . helveticus、保加利亚乳杆菌 L . bulgaria。所有菌种 212 螺旋藻在 实 验 浓 度 为 01005 时 , 对 乳 杆 菌 的 均由解放军创伤研究所提供 。菌种经鉴定后 ,增菌并进 生长促进作用见表 2 。在此浓度下 ,螺旋藻对乳杆菌的 行活菌计数 ,以确定备试菌数量 。 (增殖促进作用与对照组相比相差有非常显著的意义 p ( ) 113 螺旋藻 钝项螺旋藻 Spirulina platensis,由 ) < 0101。 ( 海洋大学 生 命 学 院 提 供 为 山 东 无 棣 富 施 特 螺 旋 藻 藻 表 1 钝顶螺旋藻对六株双歧杆菌的增殖促进作用 ) 种。将螺旋藻作为改良 TP Y 及改良 GAM 的添加剂 、 螺旋藻粉用蒸馏水配制成 0110 、0105 、0102 、0101 四 种 浓度 ,分别等量加入 0120 浓度的改良 T YP 、GAM 液体 011 改良T PY加不同浓度螺旋 藻011 改良 TPY 培养基中 ,使其终浓度为 0105 、01025 、0101 、01005 ,做为 菌种 空白对照 原始菌量 0105 01025 0101 01005 基质的改良 TP Y、GAM 的培养基终浓度为 011 ,经高压 7187 121 158 127 126 137 B. infantis 76646() 灭菌 8 磅 15 分种p H712 。此培养基为备试培养基 ,同 876646112 127 127 135 192 181 B. lo ngum 8101 7149 6195 6128 4123 5151 B. angulat um 时将 011 浓度的改良 TP Y、GAM 培养基作为对照组培 776546153 126 144 189 180 173 B. breve 养基 ,并作为备试菌的生长标示 。全部实验均在仅含有 8117 7146 6159 6151 5123 6109 B. adolescentis 011 浓度的改良或原配方培养基的条件下进行 。 B. bifidum 4176 4163 4152 4178 2152 2195 114 实验分组及测定方法 按菌种的不同进行实 验合计与空白比较 P < 0101 P <1 001 P <1 001 P <1 001 分组 ,双歧杆菌每组由四种浓度的备试培养基和一对 照表中数值均为以 10 为底的对数值 ( ) 培养基组成 ; 乳杆菌每组一个浓度 01005备试培养 基 表 2 纯顶螺旋藻对 3 株乳杆菌的增殖促进作用 ( ) 并设一对照培养基 。将备试菌菌液 经活菌计数分 别 μ加入各组各浓度的培养基内 。菌液加入量为 30l ,充 菌种 011 改良G AM +1 005 螺旋01藻1 改良G AM空白对照 原始菌量 6178 163 115 L . acidop hilus 566184 5184 6120 L . helveticus 4152 6177 7114 L . bulgaris P < 0101 合计与空白比较 表中数值均为以 10 为底的对数值 ,改善消化和食物吸收 , 防止感染和刺 改善肠道内环境 3 讨 论 [ 7 ] 激免疫等多种生物效应。 311 半个世纪以来 ,螺旋藻作为一种健康食品经 314 本实验采用了改良的 TP Y 和 GAM 培养基 , 久不衰 ,它对人体健康的有益作用不断被发现 。近年来 当该培养基将各种营养成份和浓度降低到仅能维持备 对于螺旋藻多种功能的研究已取得了很大的进展 。例 试菌生长时 ,使螺旋藻作为添加成份的作用能够突出地 如 :研究表明螺旋藻多糖不但能提高机体非特异性的细表现出来 ,并通过改良 TP Y 和 GAM 作为对照组将其它 胞免疫功能 ,而且能促进机体特异性的体液免疫功能 , 营养成份的影响降到最低或抵消 。在螺旋藻的不同实 [ 4 ,6 ] 并通过增强机体的免疫力而抑制癌细胞的生长: 该 验浓度中 ,我们可以看到 ,随着浓度的增加 ,双歧杆菌活 多糖能显著增强辐射引起 DNA 损伤的切除修复活性和 菌数量也增加 。也就是说 ,如果螺旋藻通过胃肠道时不 [ 5 ] 程序外 DNA 合成。本文对螺旋藻调整人体肠道微生 被破坏 ,到达肠内的含量越高 , 对肠道内生理性细菌的 态平衡作用进行了实验验证 ,尤其是对肠道内源性益生 增殖促进作用也越明显 ,效果越好 。 [ 7 ] 菌生长的促进作用进行了体外验证 。作为肠道内的益 螺旋藻作为食品已有悠久历史。由于它的细胞 生菌 ,双歧杆菌和乳杆菌具有许多生理功能 : 它们与其 壁是由多糖物质构成 ,极易被人体消化吸收 。螺旋藻含 它厌氧菌一起形成肠道的生物屏障 ,对致病菌及条件致 () 有大量的蛋白质 60 %,70 %和维生素 ,特别是人体不 病菌的定植入侵构成一种定植抗力 ;合成释放多种酶类 β 能合 成 的 八 种 必 需 氨 基 酸 、r - 亚 麻 酸 、- 胡 萝 卜 素 [ 7 ] 及维生素 ,参与一些代谢过程促进营养物质的吸收 ; 作 等,作为保健食品它的功效越来越多为人们发现和研 为一种天然自动免疫 , 双歧杆菌 、乳杆菌具有类似抗原 究 。在调整肠道内菌群 , 改善肠道内环境方面 , 我们正 [ 1 ,2 ] 的刺激作 用 , 介 导 机 体 的 特 异 性 和 非 特 异 性 免 疫 。在探讨和证明它作为一种生理性细菌生长促进因子的 Kay - RA 认为螺旋藻可能含有对增进机体健康有效的 可能性 。 [ 9 ] 益生元复合物。如果螺旋藻能够在肠道作为一 种生 衷心感谢熊德鑫教授对本文的帮助和指导 ! ( ) 长刺激因子 益生元,促进生理性细菌增殖 , 改善肠道 内环境 ,将会进一步增加和完善螺旋藻作为健康食品的 价值 。对其价值的再挖掘是我们本实验的主要目的 。 312 根据实验结果 ,螺旋藻对双歧杆菌的 6 个菌 种均有非常显著的生长促进作用 ,并在 01005 的低浓度 下 ,对六株双歧杆菌的生长仍表现出突出的生长剌激作 参考文献 用 。以富 施 特 螺 旋 藻 为 例 , 它 的 建 议 剂 量 为 每 日 415 克 ,根据本次体外实验的结果 , 即使是只有百分之一到 [ 1 ]俞晓进 ,胡宏 1 双歧杆菌对小鼠单核吞噬细胞功能的影响 1 达肠道内 ,就会起到非常好的作用 。由于双歧杆菌在人 ( ) 中国微生态杂志 11993 ;5 3:45 体肠道内的主要菌种对低浓度的螺旋藻表现出的敏感 [ 2 ] Mizutani S. Immunological respo nses to mp noassociated Bifi2 性 ,使肠道微生物群比例优化 , 我们可以期望口服螺旋 do bacteriam Lo ngum and t heir relatio n to p reventio n of becteri2 藻后 ,可使肠道内双歧杆菌的增殖旺盛 , 肠道内环境得 ( ) al invasio n . Immunology. 1985 ;56 1: 43 以改善 ,并使双歧杆菌各种重要的生理功能效应得以放 [ 3 ] 熊德鑫 1 临床厌氧菌检验手册 1 中国科学技术出版社 1 第 1 大 。我们将继续关注这一方面的研究 。 版 11994 313 当螺旋藻的实验浓度稀释至 01005 ,对两株肠 [ 4 ]刘力生 ,郭宝江 ,阮继红 ,等 1 螺旋藻多糖对机体免疫功能提 道内主要的乳杆菌 : 嗜酸乳杆菌 、干酪乳杆菌和一株外 ( ) 高作用及其研究 1 海洋科学 11991 ;11 6: 44 —48 ( ) 源性保加利亚乳杆菌 商品株均表现了非常好的生长 [ 5 ]庞启深 ,郭宝江 ,阮继红 1 螺旋藻多糖对核酸内切酶活性和 ( 刺激作用 。与对照组相比相差有非常显著的意义 P < ( ) DNA 修复合成的增强作用 1 遗传学报 11988 ; 15 5 : 373 — ) 0101,说明它除了对内源性乳杆菌的繁殖有扶植作用 381 外 ,对外源性乳杆菌的定植生长也有同样的扶植作用 。 [ 6 ]刘力生 ,郭宝江 ,阮继红 1 螺旋藻多糖对移植性癌细胞的抑 这将有可能有助于提高一些乳杆菌活菌制剂的疗效 。 ( ) 制作用及其机理的研究 1 海洋科学 11991 ;9 5: 33 —36 () Tsuchi hashi 等 1987报道了在食物中添加 5 %的螺 [ 7 ] Amha Belay , Yo shimichi Ota , Kaznyuki Miya Kawa . Current 旋藻 ,使小鼠盲肠内乳杆菌的数量较对照组小鼠增加了 Knowledge o n p rotential heat h benefit s of Spirulina . Jo urnal of 3 倍 。01005 浓度的螺旋藻在试管内也表现出对乳杆菌 ( ) Applied Phycology. 1993 ; 5: 235 - 241 较强的增殖促进作用 。这一结果使我们有理由相信 ,螺 [ 8 ] Tsu chihashi N , Watanabe T , Takai Y. Effect of spirulina platensis o n caecum co ntent in rat s. Bull , Chiba Hygiene Col2 lege ,Chiba . J apa ;5 :27 - 30 [ 9 ] Kay - RA Micralgae as foo d and supplement . Crit Rev Foo d Sci ( ) Nut r . 1991 ;30 6: 557 - 736 ( )收稿日期 :1999 —01 —18 210 中 国 微 生 态 学 杂 志 第 11 卷 P ROMOTING EFFECT OF SPIRULI NA PL ATENSIS O N THE GROWTH OF BIFIDOBECTERIUM A ND L ACTOBACILLU S IN VITRO L i a n gB i n g , Y u X uej u n , W ul i ke . Hos pi t al 401 , Q i n g d ao , 266071 Ocea n U ni ve rsi t y Zha n g X uechen g . of Q i n g d ao , Col lege of M a ri ne Ii f e S ciences , 266003 Abstract In t he test ,t he spirulina co mbining wit h imp roved TP Y and GAM was used as medium. The effect o n stimulating to grow of bifido becterium and L acto bacillus was co nfir med in vit ro . The result showed t hat t he effect o n t he growt h of bifido becterium and lacto bacillus in t he test gro up was different significantly f ro m t hat in t he co nt rol gro up ,wich demo nst rated t hat t he spirulina platensis has an effect of imp roving t he animal ho st intest nal micro biota balance and enviro nment . Key words Spirulina Bifido becterium L acto bacillus Pro moting effect (),而对大肠杆菌 、脆 歧杆菌 、嗜酸乳杆菌有生长促进作用 上接第 199 页 [ 3 ] 弱类杆菌和艰难梭菌无显著促生长作用。据日本 T. 受试者的双歧杆菌数量在服用后第 7 、10 天有显著性提 KO HMO TO 等报导 ,无论年轻人还是老年人 ,每日服用 高 ,其中第 10 天达到最高值 ,而产气荚膜梭菌的数量无 215g,25g 异麦芽低聚糖人的体内双歧杆菌均有不同程 明显变化 ;10g 样品/ 天组受试者的双歧杆菌数量在服用 [ 4 ] 度的增殖。本文的实验结果再次证实异麦芽低聚糖 后第 7 、10 天及停服后第 7 天有显著提高 ,其中第 10 天 可以促进人体肠道菌群中的有益菌双歧杆菌的增殖 ,对 异麦芽低聚糖在不同服用剂量时对人体肠道菌群的综 达到最高值 ,产气荚膜梭菌在服用后第 7 、10 、14 天显著 下降 ,其中第 10 天达到最低值 ;15g 样品/ 天组受试者的 合作用提供了客观的评价 。 双歧杆菌数量在服用后第 3 、10 天数量显著提高 , 其中 第 10 天达到最高值 ,产气荚膜梭菌在服用后第 7 、10 天 数量显著下降 , 其中第 10 天达到最低值 。实验结果表 参考文献 明 ,各剂量组都有明显的调节正常菌群的作用 。服用受 试物 10 天调节肠道菌群作用达到最高值 ,服用至第 14 天各剂量组的肠道菌群值都略有反弹 ,原因有待进一步 [ 1 ]蒋 虹 , 胡 宏 1 益 生 元 及 其 作 用 概 述 1 中 国 微 生 态 学 杂 志 探讨 ,有专家建议可以逐渐增加受试物服用量来维持效 ( ) 11997 ;9 4: 54,55 [ 2 ]康白 1 与正常微生物群有关的新概念 1 中国微生态学杂志 果 。另据受试者自述 ,大剂量 、短时间服用时 ,便秘者症 ( ) 11992 ;4 4: 1,6 状迅速改善 。小剂量 、长时间服用各组 , 便秘者症状改 [ 3 ]张庆蕴 ,王文凤 1 麦芽寡糖对双歧杆菌生长促进作用的体外 善情况与双歧杆菌消长情况平行 , 即服用头 10 天有明 ( ) 试验 1 中国微生态学杂志 11998 ; 10 2:70,72 显改善 ,后又逐渐回复 。 [ 4 ] 尤新 1 功能食品配料 ———新型低聚糖 1 食品科学 11995 ; 16 张庆蕴等人所做的体外实验证明异麦芽寡糖对双 ( ) 11:41,44 ( )收稿日期 :1998 - 10 - 29 A STUDY O N THE REGUL ATIVE EFFECT OF D IFFERENT DOSE ISOMAL TOOL IGOSACC HA RID ES O N HUMA N INTESTINAL FLO RA Fu Pi n g , R a n L u , Zhao X i , et al . I nst i t u te of Food S af et y Con t rol a n d I ns pect ion , M i nist ry of Publ ic Heal t h , B ei j i n g 100021 Abstract One kind of iso maltooligo saccharides p ro duct s - ZON G H EN G Iso maltooligo saccharides was st udied. Experiment result s showed t hat t he intake of 5 - 30 grams of t his p ro duct co uld regulate t he in2 testinal flo ra ,imp rove t he rep ro ductio n of Bifido bacteria ,and inhibit t he growt h of Clo st ridium perf rien2 genes in human being. Key words Iso maltooligo saccharides Intestinal flo ra