聚乙二醇干扰素的研究和应用

聚乙二醇干扰素的研究和应用 第 , 卷 第 ,期 , 甘 肃 科 技 , (, ( ,,, , , , , , ,年 ,月 ,, ,, ; , , , ; , , , , , , , ,,; ,, ,, ,, , , ， ( ,, ,“ , , 聚 乙二醇 干扰 素 的研 究 和应 用 孙 王 一 欣 ， 雅 煊 深 广 , , , ( 圳科 兴生 物 工 程 有 限 公 司 ， 东 深 圳 ,, , ) 干扰素在 某些病毒性 疾病 的 临床 治疗 方 面显 示 了 巨大的 潜 力， , 干扰 素 系将 干扰 素 与 摘 要 : ,, , , , 共价结 合在一起 ， , 聚 改善 了干扰 素的 生物 活性 。本文 , , 干扰 素的长 效机制 、 乙二 醇修饰 的 ,, ,, , 方 法 、 , 干 扰 素 的 生 产 工 艺 、 , 干 扰 素 纯 品 质 量 控 制 和 我 国 , , 干扰 素 的 应 用 现 状 等 方 面综 述 了国 内外 聚 乙二 醇干扰素 的研 究和应用现状 和发展 前景 。 聚 研 发展 前景 关键词 : 乙二 醇干扰 素 ; 究现 状 ; , , ， 中图分类 号 : , , , 干扰素是 一种 人体 内 自然产生 的抵抗 细菌和病 最终 提 高 药 物 的治疗 指 数 和 临床 而 降低不 体对病 毒感染 的重要 防御 系统 ， 毒 的物 质 ， 它与 安良反应 ， 是机 全 性 。 共 人 体其他 免疫系统 一 起 ， 同 担负 着抵 御 病毒 感染 的任务 。干扰 素 可通过加 强人体 自然杀伤 细胞 的活 , , , , 干扰 素 的 长效 机 制 刺 增 性 ， 激巨噬 细胞产 生细胞 因子 ， 强人体 的细胞免 干扰 素 ,是 治疗慢性 乙 型肝炎或慢 性丙 型肝炎 杀死病毒 ; 可以诱导 细 疫功 能 ， 还 可 疗 的 首选治疗 ， 以 有效 地 抑 制 胞 内产生抗病毒 蛋 或 清 除病 毒 ， 效 持 抑 白， 制病 毒 的复制 。 阻 久 ， 止肝硬 化或 肝 癌 的发 生 。但 普通 干 扰 素治 疗 , ,年被 科学家发 现 ， 干扰 素于 , , 逐步 开始用 于 半 只 具 有 自身不 可 克 服 的 缺 点 ， 衰 期 短 ， 有 ,个小 丙型肝 炎及肝癌 的治疗 ， 乙型肝炎 、 并取得 了较好效 就是 说如果 今天 注射 了干扰素 ， 二天体 内的 干 时， 第果 。在发现 干扰素后 近 , 人们 只能从 ,年的时 间里 ， 干 扰 素就完 全清 除 了。所 以 ， 扰素 不 得不 每 隔一 天 大量人 血液 中提取 微 量 干扰 素 ，成本 非 常 高 。直 到 使用很 不方便 。另一 方面 ， 就注 射一 次 ， 当体 内的干 , ,年 ，,, 才 人们 采用 基 因工 程 的方 法 ， 实 现 了干扰 体 不能 持久地抑 扰 素清 除后 ， 内的病 毒又 重新复 制 ，素 的大批量 生产 。而我 国的基 因工 程干扰 素研究和 制 病毒 。普通 干扰 素半 衰 期 短 的原 因 ，一是 大 量 干 应用则 起步更 晚 ， 到 , , 直 , ,年才算正 式开始 。 通过 肾脏 ” 了出去 ， 扰 素 由于分子太 小 ， 漏” 通过 尿液 尽 管干扰 素在某些 病毒性 疾病 的临床 治疗 方面 另一个原 因是 被 免疫 系统 清 除 。, , 是 排 出体外 ， , 但显 示 了巨大的潜 力 ， 多 年来 干扰 素还 是 未能 发 挥 一 易 可 种惰 性 、 溶于水 、 以做 成 任意 大 小 的物 质 ，普 原其全 部作用 ， 因是 干 扰素 在 病毒 ” 被 重灾 区( 病毒 通 干扰 素经过 它 的” 后 分子 就会变 大 ， 改造 ” ， 不能 或 ” 必须保 持恒定 的浓度 ，感染 的器官 ) ， 只有浓 度恒定 漏 出， 很 少 由肾脏 ” ” 达 到 了延 长在 体 内存 在 时 间 的 才 如 了， 能确保 干扰素 在 被病 毒感 染 的器 官 ( 肝 脏 ) 目的 ， , 体 干扰 素上 所连 接 的 , , 分子 量越 大 ， 内半 内有效地 杀灭 和抑制病 毒 。但 是人体对 干扰素 的清 , ,干 扰 素又叫长 效干扰 素 。 衰期越 长 。因此 ， , 使其 不能 长期存 留于血液 中 ，除非 常迅速 ， 使之难 以 充 分发挥其 抗病 毒作用 。 , 聚 乙 二醇 修 饰 的 方 法 因此 聚乙 二 醇 ( , 干 扰 素 应 运 而 生 。, , , ,) , 为 了避 免在 修 饰过 程 中 发生交 联 和 团聚 ，常采 ,干扰 素系将 干扰素 与 , ,共 价结合 在一起 ， 以改善 ,, ,) 用单 甲氧基 聚 乙二醇 ( , 作 为修饰 剂 。聚 乙二 干扰 素的生 物 活 性 。, , 化 干扰 素 分子 量大 大 增 , 羧 醇通 过与 蛋 白质 分子 上 游离 的氨基 、 基 或巯 基 等 干扰 素从 肾脏排泄 的速率 大为减慢 ， 而延 长药 加， 从 实现 , ,化 修饰 。 基 团的反应 ， , 减 ,,物 体 内半衰 期 ， 少服 药 频 率 。另 外 ， , 化 干扰 ( , , 修饰氨 基 (素 可增 加药 物溶解 度 、 增加 药物 的酶水解稳 定性 、 减 , 蛋 白质分 子参 与 , ,化 反应的基 团常为 ,和 ,弱蛋 白质药物 的免疫 原性 ， 少血药 浓度 的波动 ， 减 从 用 ,, ,) 氨基 ， 于修 饰 氨基 的单 甲氧基 聚 乙二 醇 ( , 甘 肃 科 技 , 第 , 卷 烷基 化 ,, ,和 酰基化 ,, ,。 , ,, 可 分为两大类 ， , , , , , , 纵观 美 国 , , 和 我 国 , , 对 , , 干扰 素 , 烷基 化 ,, , 包 括 ,, ,一醛 、 , , ,, ,一三 氟 ,, 的质量 引，, 干 扰 素纯 品 的质 量 检 测 项 目 , , 乙磺酸及 ,, ,一环 氧化物 等 。,, ,一醛 的修 饰 及相应 的检测方 :调 节温和 ， , 在低 , 条件 下仅修饰 ,一末 端 氨基 ，对 法如 下所示 表 , , , 干扰 素纯 品 质 量检 测项 目及 方 法 活 性影响较 小 ，同时方便 产物 的纯化 和鉴定 ，已用于 项目 方 法 ,, , , ， ,等 的修饰 。 , , 、, 外 观 外 观 检 查 鉴 别 分 子 量 , — ,, ,, , , , , 酰基 化 ,, , 包 括 ,, , 琥 珀 酰 亚 胺 脂 和 等 电点 , ，, , 这,, ,一苯并 三唑 碳 酸 酯 ， 两 种修 饰 剂 可 优 先 与 单 体 纯 度 , , , —,, , 也 赖氨酸残 基反应 ， 可与组氨 酸和 酪氨酸残 基反应 。 纯度 二 聚 体 ,, , —,, , (, , 修饰 羧基 , 游 离 ，, — , ,, ,, , , ,) 一 在二环 已基碳 二亚 胺 ( , ， 或 , 乙基 一 ,一 其 他 聚体 , , , — ,, ,二 甲氨基丙基碳 二 亚 胺盐 酸 盐 ( , ) 在下 ， 基 , ,存 羧 , 游离 , , , , , — ,, , , , 值 , , 测 定 法 , 形 可与 ,, ,— ,,,中 的 氨 基 结 合 ， 成 酰 胺 键 。 细 菌 内 毒 素 ,,,法 ,,, , 酰肼 是 近 年 来 开发 的又 一种 可与 羧 基 特 异 含 量 , — , , , ,, , 性结合 的修饰剂 。 生 物学 活 性 , , ,法 (, , 修饰巯 基 比 活性 含 活 性, 量 , ,, ,一 目前 可用 于巯 基 修饰 的 ,, ,包 括 : ,马来 酰亚 胺 ( , , , ,—,,, , ) ,, ,一邻 吡 啶 一 , ,,, 、 , , , 我 国 , ,干扰 素 的应 用现 状 , ,, , , ,,, ,, ) ,, , ,二 硫 醚 ( ,,— , , , , ,, ,, , , 、 ,,一 乙 在我 国现 已批 准上市 的 , ,干 扰素药 物 目前 ， , , ,— ,, , , , ) ,, ,一碘 乙 酰胺 烯基砜 ( , ,, ,,, , , 及 , 罗 , 有 : 氏公 司 的聚 乙二 醇干 扰 素 , ,注射 液 和 先 灵 , ,—, , ;,,,, 等 。其 中 ,, ,一马 来酰 亚 (, , , ,,, , ) , , 葆 雅公司 的聚 乙二 醇干扰素 , ,注 射剂两 种 。前 者 反应 条件 温和 ， 巯基形 成 的硫 醚键较 胺制备 简单 ， 与 商 品名为 派罗欣 ， ,, , 由罗 氏公 司生 产 ， , ,年 ,月 , 应用 较多 【 。为稳定 ， 〕 , 日经 中国食 品药 品监 督 管 理局 于批 准进 口，正式 成 为我 国第 一个 长效 干 扰素 。后 者商 品 名 为佩 乐 能 ， ,, , , 干扰 素 的生 产 工艺 ,, 由先灵 葆雅公 司 进 口，, ,年 ,月 ,,日经 中 国食 , 干扰素发酵表达 : 构 建 的能够 表达 人 干扰 () 将 〕 品药 品监督管理 局于批准进 口, 。 ,干 发 素 的菌种发 酵并特异 诱 导表达 。() 扰 素纯化 : 据悉，目前 国 内多加 干扰 素生 产 厂家 也在 进 行 高压匀 浆破碎 ，酵液经离心收集细菌菌体 ， 离心 收集 ， , , , 干扰素 的研 发工作 。 再 获经粗纯去除大多数 杂质.