多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR4-NFκＢ信号通路的影响及地塞米松的干预实验研究_25475

多柔比星对乳鼠心肌细胞TLR4-NFκＢ信号通路的影响及地塞米松的干预实验研究_25475 ,,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4/NF,,,,,?,,?,,,???,,,,,,,??,,,,,,о, [,,,:4,] ,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,,? ,,,,, ?,?, ,??,,,,,,,(doxorubicin, DOX),,,,,,,?,,,,Toll,,,,,,4(toll,,like receptor 4,TLR4,,,,,,,,,,,,B,,NF,,,,B),,,,,,,,,,,,,,(TNF,,,,),,,,,????,,?,,,,,,,, ,?,,,,,,е?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,(dexamethasone,DXM),,,,,,,,,á,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,ö,,,,,,,,,,?,,,,,,,,?,,,,,,,?3,,:,,,,,,,,,?,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,δ,,,κ,,,DOX,??,,,,,,,?,м,,,,,,,,,1 mg/L,,DXM + DOX, ,,,,,,DOX 1 mg/L,30 min,,,,,,,,,,,32 mg/L,,,,,,6 h,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4,TNF,,,u,,??,,,?,,,,,2,6,24 h,,,,Western blot,,,,TLR4,NF,,,,B,TNF,,,,,,,?,,,,?,,,,,,,а?? ,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,ø,,LDH,,,?,,,,,,,? DOX,,,?,,,,TLR4,NF,,,,B,TNF,,,q,,,,,,,,,,,,,,,(P<0.01),,DXM+DOX,,,?,,,,TLR4,NF,,,,B,TNF,,,q,,,,,,,,DOX,,(P<0.01) ,,,,,,,,,,,,DOX,,,LDH,,,,,,,,,,,,P<0.01,6 h,,飩 ,,,DOX,,,,,DXM+DOX,,,LDH,,,,,,,,,,,,P<0.01,,6 h,,,,,,,,,,飩,,,DXM+DOX,,,LDH,,,,,, ,,P<0.05,,6 h,,,,,飩,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,?,,,,TLR4,,,,,,,,,,,,,,,,?,?,,,,,,,,,,,,,,,TNF,,,c,,,,,,?,,,,,,,,?,,?,,?,,DXM,,,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4,,,,,,,,,?,?,,NF,,,,B,,TNF,,,u?,,,,,,,,?,,,,,?,,,,,,,,á, ,,,,,, ,,,,,,,, ,?,,,,,, Toll,,,,,,4,, ,,,,,,,,B,, ,,,,,,,,,,,c, ,,,,,,,,??? ,,,,,,Abstract,,Objective: To observe the effect of doxorubicin(DOX) on the Toll,,like receptor 4,,TLR4,,,nuclear factor,,kappa B ,,NF,,,,B,,,tumor necrosis factor,,alpha ,,TNF,,,c,expression of cardiac cells in newborn rats,,and to discuss the possible effects of doxorubicin on myocardial damage and the intervention effects and possible mechanism of dexamethasone (DXM,,on doxorubicin,,injured cardiac cells. Methods,, Doxorubicin was administered to establish the injury model of primary cultured cardiomyocytes in newborn rats. Primary cultured cardiomyocytes were randomly divided into three groups, control group,myocardial cell suspension was continue cultivated with serum,,free medium and no drugs put into; DOX group, with doxorubicin 1 mg/L in cultured fluid; DXM+DOX group,with dexamethasone 32 mg/L and DOX 1 mg/L half an hour later in cultured fluid.The expression of TLR4,TNF,,,, protein in cardiac cells was checked with immunohistochemical after they were operated for 6 h . The semiquantitative analysis of TLR4,NF,,,,B,TNF,,,, protein was checked with Western blot after they were operated for 2 h, 6 h and 24 h respectively. The activity of LDH was checked in cultured fluid with colorimetry. Results,, The TLR4,NF,,,,B,TNF,,,, expression of the cardiac cells in DOX group were markedly increased when compared with control group(P<0.01). The TLR4,NF,,,,B,TNF,,,, expression of cardiac cells in DXM+DOX group were considerably decreased compared with DOX group(P<0.01). Activity of LDH: Compared with control group,the activity of LDH was increased significantly in DOX group,, P<0.01,6 h group,,.Compared with DOX group,the activity of LDH was decreased in DOX+DXM group significantly,,P<0.01,,6 h group,,. Compared with control group, the activity of LDH was increased slighty in DOX+DXM group,, P<0.05,,6 h group,,. Conclusion,, TLR4 of cardiac cells under DOX was over expressed and activating the downstream signal,,transduction system, making cytokine TNF,,,, expressed. This is one of the cardiac cells injuring mechanism. DXM could interfere the over expression of TLR4 in cardiac cells and its downstream signal,,transduction NF,,,,B and TNF,,,,, thus to protect the cardiac muscle invariably. ,,,,,,Key words,,doxorubicin; myocardial damage; toll,,like receptor 4; NF,,,,B; dexamethasone; TNF,,,, ,,,,,,,(doxorubicin, DOX),,,,,,?,,,,?,,,,,,? ,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,?,,,?,,,,,,?,,,,,,,,? ,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,?,,,,,,,?,,,(,,,,,,,,,,??,,,c,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,?,,? ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,??,,,,,л,,,,,,,,,,,,,,,е?,,,,,,,,,δ,,,,,,,,1,,,,,,,4,,?Щ,о,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,?,,,,,,,,?,2,3,,,,,,?,Toll,,,,,,,,,?,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,? ?,,,е,,,,,,ã,Toll,,,,,,,,,,??,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,?,?,,,,,,о,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,õ?,2,,6,,24С,,,,,,,Western blot,,,?,,,,,,?,,,,TLR4,,NF,,,,B,,TNF,,,u?,,,,,õ,,,,,,,,,,,,,,,TLR4,,,,,,,,,,,,? ,,,?,,,,,,,,?,,,,?,?,,;,,,,,,?,,,,,,,?,,,,,?,,,,,,,?,?,,,,,,,,,?,,,,,?,,,,,,,,,,,,, 1 ,,,,,,,? 1.1 ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,Forma,,,,,,,,,,,,,,,,?,Heraeus,,,,,,,,,,?,?,,,,?,,,?,(Bio,,Rad),,,,,,,,,,,,,,,,(Nikon,,,),,LeicaBMLB2,,,,,,,,,,,,,,,,,(Leica,????? ,,),, 1.2 ,,,,, ? ,?,,(,,,,,?,,,,,,,,,,,),,,,,,,ø(Gibco,,,),,,ÿ,С,,TLR4,,,?塢,ÿ,С,,TNF,,,,,?塢 HRp,,,,,,IgG(Boster,,,,,,,,),,,ÿ,С,,NF,,,,B,,,,(Bioscience,,,),,ABC,,,,,,,,黯 ,,zС,DAB,,,z,(Boster,,,,,,,,),,,,,,,,,,ø,,LDH,,,,,,,z,(,,,,,,,,,,,,,,о,,,),,? 1.3 ,,,,?,,,,?,,,,,,,, ,ο,Sadoshima,,,4,,,,,?,,,,,,,?,,,,,ø,,,,,,,?,,,,,,ò,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,?,,,0.25%,,,,,ø,,?,,,,1,,2,,SD,,,,,,,,,,,,,,,?10%,?,,,DMEM,,,,?,У,,,37,, 5%,,? CO2,,,,,,,,,,,,90 min,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,м,,,,,,,,,,,,,,,?5,,106 /ml,,,,,6,,,,,,,,壬,, ,,,,,,,,24 h,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,72 h,,,,?,,,, 1.4 ,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,DOX,?,DOX,,?,,?1 mg/L; DXM+DOX,,,,,,,,, ,м,,,DXM,,,,?,,?32 mg/L,,5,,, 30 min,,,,,DOX,,DOX,,?,,?1 mg/L,,,?,,,,,,,,2,,6,,24 h,, 1.5 ,,,,,,,,,,,?,,LDH,,,,, ,,,,,,,,ø,,,,,,,,,,,,,,,,2,4,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,???,,,,,,?,г,,?,,,,,,,,,,,,,ø?? ,,f,,,,,,,,z,,,,,,,,С,? ,,,,1.6 ,?,,,,TLR4,,TNF,,,,,,,,,,,,,,,,,, ?? ,,,,,,,?,,и,,,,, 96,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,6 h,,,4%,;,,,,,,,,0.3% trin,,X100+13% BSA,,,,,,,,,,,,,ø,,,?,μ,1,,100,?,С,,TLR4,,TNF (,,IgG),,,,з,,,2 h,,PBS,,,,,,μ,HRP,,,,,,IgG 37,, 30 min,,PBS,,,,,,μ,,,,SABC 37,, 60 min,,DAB,,,,,,,,?,?,,,,,,,,,?,,,,,,? ,,,,,ж,,TLR4,TNF,,,{,,,,,,,,,,,,,Leica,,,,,,,,???,,,,,,,,,,,,黯,,,,,?,,,,,,,,? ,,,,c,{,,,,,,,,,,,?,,,,,200X,,ÿ,,,,,,,,,,10,,λ,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,û?????,?,,,,,, ?,?,,,,,,,,?,,,,,,,?,?,,,,,,,,?,,,,,, ,,,,1.7 ,,,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4,,TNF,,,c,NF,,,,B,?,,??,, ,?,,,,,,?,,,,,,,,,,,,??,,,,,,,,,30? ,,g,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,(SDS,,PAGE),,,,,,,??,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,?,,PVDF,,?,,,,,,PVDF?,,PBS,,,,,,,5%?,,,,,,2 h,,?,?,,,,1,,1000,?,,?,,,?,?,,,,, 37,,,,2 h,,PBS,,,,,,?1,,,,,,,ø,,?,,,IgG,,1,,2000,,,,?,,,,,,,37,,,,1,,,,,,,,,,?? h,,PBS,,,,,,,??????,,,,,,,ECL,,1 min,,,,,,ж,,PVDF?,,TYTOOPH,,,,,,,,,,,,,??,, ,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,Φª,,,,,,,,,,,,,,,,?,,?,?,,,,,,,,,,,,, 1.8 ,,,,,, ,,,,SPSS 13.0,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,1,,,,4,,,,,,,,,,,,,?,,,õ,,,,?,,,,,,P<0.05?,,,,,,,,,,,,?, 2 ,, ,, ,,,,2.1 ,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,LDH,,,,,,,?? ,,,,,,,,,,DOX,,LDH,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,P<0.01,,,,DXM+DOX,,LDH,,,,,DOX,,,,,,, ,,,P<0.01,,,,,,,1,,,,1 ,?,,,,,,,,?LDH,,,, ,,,,, ,,,,2.2 ,,,,,,,,,,,黯?,,,,TLR4,,,,,,,,,,??,,,, ,,,,,,,,,,,,,,DOX,,TLR4,,,?,,,,,,,,,DXM +DOX,,TLR4,,,? ?,,,DOX,,,,,,,,?,,,,2,,,1,, ,,2 ,?,,,,TLR4,,TNF,,,u,,?,,,,,,,,,??,,,?,,, ,,,,2.3 ,,,,,,,,,,,黯?,,,,TNF,q,,,,,,,,,??,,,, ,,,,,,,,,,,,,,DOX,,TNF,,,u,,?,,,,,,,,, DXM +DOX,,TNF,,,u,,? ?,,,DOX,,,,?,,,,2,,,,3,, ,,,,2.4 ,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4,,NF,,,,B,,TNF,,,q,,,,,,,,,??,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,2 h,,,,TLR4,,NF,,,,B,,TNF,,,,,,,?嵰, ?,,,,,P<0.01,,,,,,6 h,,,,,,?,,P<0.01,,,,24 h,,,,6 h,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,? ,,P<0.05,,,,,,,3,,,,3,,,,3 ,,,,,,,,,,,,?,,,,TLR4,,NF,,,,B,,TNF,,,u,,?,,,,,,,, ,,,,???,,, 3 ,, ,, 1997,,Medzhitov,,,6,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,Toll,,,?,,,,,,,Toll,,,,,,,,,,,,?T? oll,,,,,,TLR4,,,,,,,??,1,,TLR,,?,,?,,,,,,,,,,(LPS,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,壬,,,,,?,,,,TLR4,,,,鵼?,?,,,,,,,,(,,,?,?,,,,,88 (MyD88),,5,,,,,,5,,},,;,,,,,,,?,TLRs,,,о,,,,,,,,,,,,,,,??,,,,,,,,,TLRs,й?,,,,,磺 ,,,,,,,,,,,,?,,,,,,TLR2,,,,NF,,,,B,,,,,,,,鵼,,,,,,,,,,,,,TLR4,,,,,,,,,,?,,,,,,,,7,,,TLR4,,,С,,,?,,/,??,,(I/R),, ,,,,,,,,,,,,?,,,,,,?,,,,,,,TLR4,,,,,eritoran (E,,5564) ,,,,I/R,,,?,,,,,,8,? ,,Nozaki,,,9,,?,,,,TLR2,ó,,С,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,, ,,?,,,У,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,?,,,,2,6,24 h,,2 h,,,,TLR4,,,,,,6 h,,,,,,,,,,24?? h,,TLR4,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,TLR4,?,,,,,й??,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,?,? ,,,,,,γ,,4,,,ɡ,,,,,,,,,,,,û,и,,,,,,,,,,,,,,,,,,??,,,,,,,,,?,,,,,,,,,?,,,,,,,TLRs,,,,,,,,,,,,?,,?,,,,,,,,,,,,,,??,,,,?,,Σ,,?,,,,,,,,,,,?,,,о,,,,,,,,,? ?,,,,,HSP,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,??? ,,,,,,,,,,,,?,,,,10,, ,,,,,,,,,,,,,?,TLR,,,,,,,??,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,й? ?,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,?,?,,,,,??,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,TLR4,,,,,,,,,,?? ,,TLRs,?,?,,,?,,,о,,,,,, NF,,,,B,,TLR4,?, ?,,MyD88;,,,,,,,?,j,?,,,,?,,?,,TLR4,,,,,,,弤,,,,,,??,,,,,,??,,,,NF,,,,B,AP,,1,ATF ,,,,,,,,,,TNF,,,,,IL,,1,IL,,6,,IL,,8 ,,,,,,,,,,γ,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,?,,,У,,,,,,,,,,NF,,,,B,TNF,,,u?,,,? ,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,NF,,,,B,TNF,,,u?,,,,й??,NF,,,,B,,?TLR4,?,?,,;,,,е,,,,?? ,?,,,,,,NF,,,,B,,,,,,,,,,,,,,,,?,,?,,,,TLR,,,,,,,,,,,,,,,?,???,,,,,,,,,?,,,,MyD88,,5,,,?,?,,;,,,,,,TNF,,,q,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,??,,С,?弤,,,,,?,NO,,,,,,,, ?,,,,,,,?,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,?,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,? ,,,,,,,,,,,,п,,?,?,,,,,,,,,,?,,,,,,á,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,, ,,,,,,,,,,??,,,,,,,,,,á,,,,,,,,,,,?Ч,?,,,,,,,,,?,,,,,,,??? ,,,,??,,,},,,,,,,,,,j,?,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,???,,, ,?,?,,,?,,,,, ,,,,,ARDS,,,,,,,,,,,,,,õ,,,,,,,,,и,,,,,???,,,,DOX 1 mg/L,30 min,,,,,,,,,,,32 mg/L,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,TLR,,,NF,,,,B,TNF,,,u,,?,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,NF,,,,B,TNF,,,u?,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?? ,,,,,,?,,,?,,,,,ã,,,,,TLR,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,? ,,,,,,,,,,,,,??, TLR4,?,,,,,,,NF,,,,B,,,,,?,,,TNF,,,u,??,,,,,,,,й? ,,,,,?,,,,,,,,?,,,,,,о,,,,,,б,,#,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,,?? ,,,,,,,,?,,,,,,?,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,,,,?,,,,,õ?,,,,к,,,,,,,,,,,,ã,,,?,,,,,,,,,??,,,,,,,,,,?,,,о,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,?,,к,,,,,,,,,,,,ã,,,,,Ч,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,? о,,?,,, ,,,ο,,,,?, ,,,,,,1,,Minotti G, Menna P, Salvatorelli E, et al. Anthracyclines : molecular advances and pharmacologic developments in antitumor activity and cardiotoxicity,,J,,. Pharmacol Rev, 2004,56 (2):185-229. ,,,,,,2,,Riad A,Bien S,Gratz M,et al.Toll,,like receptor,,4 deficiency attenuates doxorubicin,,induced cardiomyopathy in mice,,J,,. Eur J Heart Fail,2008, 10(3):233-243. ,,,,,,3,,Sacco G,Bigioni M,Lopez G,et al.ACE inhibition and protection from doxorubicin,,induced cardiotoxicity in the rat,,J,, .Vascul Pharmacol,2009, 50(5-6):166-170. ,,,,,,4,,Sadoshima J,Jahn L,Takahashi T,et al. Molecular characterization of the stretch,,induced adaptation of cultured cardiac cells. An in vitro model of load,,induced cardiac hypertrophy,,J,,.J Biol Chem, 1992,267,,15,,:10551-10560.,,,,,,5,,,,,?,,,,,,,,壬??,,,,.,,,,,,,,,,,,,,,,,?,,,,,,Coxsackie B,,2,,,,,,,,,ã,J,,. ,й,,,,,,,1989,10 (4),,346-349.?? ,,,,,,6,,Medzhitov R, Preston,,Hurlburt P, Janeway CA Jr. A human homologue of the Drosophila Toll protein signals activation of adaptive immunity,,J,,. Nature,1997,388(6640):394-397. ,,,,,,7,,Zhu X, Zhao H, Graveline AR,et al.MyD88 and,,NOS2 are essential for Toll,,Like receptor,,4 mediated survival effect in cardiomyocytes,,J,,. Am J Physiol Heart Circ Physiol, 2006,291(4):H1900-1909. ,,,,,,8,,Shimamoto A,Chong AJ,Yada M, et al. Inhibition of Toll,,like receptor 4 with eritoran attenuates myocardial ischemia,,reperfusion injury,,J,,.Circulation, 2006,114(1 Suppl): I270-274. ,,,,,,9,,Nozaki N, Shishido T, Takeishi Y, et al. Modulation of doxorubicin,,induced cardiac dysfunction in Toll,,like receptor,,2,,knockout mice,,J,,. Circulation,2004,110(18): 2869-2874. ,,,,,,10,,Gelman AE, Turka LA. Autoimmunity heats up,,J,,. Nat Med, 2003,9 (12) : 1465-1466.