黑玉米中黑色素和氨基酸研究（可编辑）

黑玉米中黑色素和氨基酸研究（可编辑） 江南大学 硕士学位论文 黑玉米中黑色素和氨基酸的研究 姓名:宋艳 学位级别:硕士 专业:分析化学 指导教师:汪云 20080701摘要 摘要 黑玉米是玉米的一个新品种,其籽粒角质层不同程度地沉淀黑色素,外观乌黑发亮。 黑玉米不仅色泽独特,而且营养丰富,富含水溶性黑色素、多种氨基酸和各种人体必需 的微量元素。本课题以黑玉米为研究对象,对黑玉米中黑色素的提取工艺、组成、抗氧 化性及营养成分氨基酸进行了研究。研究内容主要包括以下三个部分:.黑玉米中黑色 素的提取工艺及组成研究;.黑玉米和黄玉米提取物的抗氧化性研究;.毛细管电泳. 电化学法检测黑玉米皮中三种氨基酸的含量。 黑玉米色素属天然花青苷色素。通过正交实验确定了黑色素的最佳提取条 件:% 的乙醇溶液、料液比:、、提取时间 ;并采用液质联用.技术 对山东和山西两种黑玉米中花青苷的种类进行了确定,其中山东黑玉米中主要含有两种 花青苷,分别是矢车菊和天竺葵花青素;山西黑玉米中主要含有三种花青苷,分别是矢 车菊、天竺葵和芍药花青素。 为了研究其抗氧化活性和比较抗氧化效果,本实验以常见的黄玉米与黑玉米为原材 料,进行了一系列抗氧化性能实验。用不同极性的溶剂对玉米中的抗氧化性物质进行超 声提取,并对所得提取物进行清除?自由基实验,得出黄玉米和黑玉米各自的不 同溶剂提取物中抗氧化性最强的部分;以两种玉米提取物中抗氧化性最强的部分为材 料,进行邻苯三酚自氧化抑制实验和抑制猪油自氧化实验,并对两种玉米提取物中抗氧 化性最强的部分进行总黄酮含量的测定。结果表明:黄玉米和黑玉米各自的不同溶剂提 取物中抗氧化性最强的部分均为%乙醇提取物;黄玉米乙醇提取物中总黄酮含量为 .‖,黑玉米乙醇提取物中总黄酮含量为.‖,三种抗氧化实验均说明黑玉 米抗氧化性比黄玉米好,具有较好的清除自由基和抗氧化的能力。 采用为柱前衍生化试剂,用毛细管电泳.电化学检测.的方法测定了黑 玉米中亮氨酸、缬氨酸和丙氨酸的含量。以直径为“的碳圆盘电极为工作电 极, 研究了运行缓冲液值、检测电压、分离电压和进样时间对三种氨基酸分离和 检测的 影响,得到了最佳电泳条件:/硼砂.为运行缓冲液、检测电压 ..、分离电压、进样时间。在优化条件下,三组分可在 内完 全分离,检出限分别为.ב /、.× /、.×珥‖。该方法准确、简单 易行,样品处理简单,为氨基酸分离测定提供了一种快速灵敏的检测方法。 关键词:黑玉米色素:花青苷:正交实验;液质联用;抗氧化活性;毛细管电泳; 电化 学检测;柱前衍生;氨基酸 ’行 , , ..锄仃 , 撕 .?. ,,锄 ... :... .锄 ?. 髓 髋 ,. . ::,/ . , :, ? ?印旬 . 旬 : , : ,, . ,, . 巧 ’ 圩 . 姆 ,一一 行.、 , 莉.. 、 . 丘. 锄 ..‖ , 、 ,. ., , ? ?, 印 . 锄 砷 虢 “ , 仃, , , . 、:.., / , . 虢,巧 ” ; 巧; 舢 珈 ? 鬻印衙 唧跚 峥删 掣; 汕删妣 ? 盯 ? 曲.一 沁 ?叩 拟 址印 文” 咖畋 独创性声明 本人声明所呈交的学位论文是拳人在导师指导下进行的研究工作及取 得的研究成果。尽我所知,除了文中特别加以标注和致谢的地方外,论文 中不包含其他人已经发表或撰写过的研究成果,也不包含本人为获得江南 大学或其它教育机构的学位或证书而使用过的材料.与我一同工作的同志 对本研究所做的任何贡献均已在论文中作了明确的说明并表示谢意。 签 名: 日 期: 邃超 迎星:丑趁 关于论文使用的说明 本学位论文作者完全了解江南大学有关保留、使用学位论文的: 江南大学有权保留并向国家有关部门或机构送交论文的复印件和磁盘,允 许论文被查阅和借阅,可以将学位论文的全部或部分内容编入有关数据库 进行检索,可以采用影印、缩印或扫描等复制手段保存、汇编学位论文, 并且本人电子文档的内容和纸质论文的内容相一致. 保密的学位论文在解密后也遵守此规定. 签 名: 导师签名: 塞拯 日 期:绪论 绪论 .黑玉米概述 黑玉米适宜我国大部分玉米种植区种植,春、夏播均可,种植方式与普通玉米 基本 相同,栽培方法简单。近几年,辽宁、安徽、广东、四川、新疆等省已普遍推 广种植。 黑玉米是玉米的一个新品种,其籽粒角质层不同程度地沉淀黑色素,外观乌 黑发亮, 其穗呈紫黑色,香甜可口。黑玉米不仅色泽独特,而且营养丰富,富含多种氨基酸和各 种人体必需的微量元素。蛋白质、“生命元素”硒的含量都高于黄玉米【】。黑玉米脂肪含 量比黄玉米高.倍,且多为不饱和脂肪酸,这些不饱和脂肪酸具有降血压、促进平滑 肌收缩、扩张血管、阻碍血小板凝固和防止动脉硬化等功能。在黑玉米中还含有大量的 黑色素。研究表明,黑色素属花青苷类色素,是类黄酮化合物,有很强的清除自由基和 抗氧化的能力,并以高效、低毒、高生物利用率而著称。是一种具有药用价值的天然食 用色素资源,黑色素能有效地清除人体内的自由基.防止可见光和紫外光的辐射,具有 抗肿瘤、抗衰老、护肤养颜之功用【】。 .黄玉米概述 黄玉米属禾本科玉米属。全世界玉米播种面积仅次于小麦、水稻而居第三位。在我 国,玉米的播种面积很大,分布也很广,是我国北方和西南山区及其它旱谷地区人民的 主要粮食之一。 黄玉米可利用能量高,玉米的代谢能为. 瓜,高者可达. /,是谷 实类饲料中最高的。亚油酸含量较高,玉米的亚油酸含量达到%,是谷实类饲料中含 量最高者。维生素中脂溶性维生素较多,约为/。黄玉米中还含有较多的胡 萝卜素和类胡萝卜素,黄玉米中所含叶黄素平均为/,这是黄玉米的特点之一, 它对蛋黄、胫、爪等部位着色有重要意义。 黄玉米中的叶黄素,.二羟基.?.胡萝卜素和玉米黄质,一二羟基胡萝 卜素二者互为同分异构体,分子结构如图.和.所示,是自然界广泛存在的含氧类 胡萝卜素。黄体素和玉米黄质的分子中分别拥有个和个共轭双键且尾端基团上带 有羟基,这些共轭双键的存在使得叶黄素和玉米黄质成为阻断自由基链式传递型的抗氧 化剂,具有很强的抗氧化活性哺。 图.叶黄素结构江南大学硕士学位论文 图一玉米黄质结构 .花青苷概述 花青苷足一类广泛存在于自然界的花、果、种和叶中的水溶性天然色素,属于黄酮 多酚类化合物,是由花青素在自然状态下与各种糖形成的糖苷。其颜色有红色、紫色、 蓝色等,近年来主要是以食用天然色素的形式被不发利用。已知天然存在的花青苷有 多种。但尽管如此,花青苷仍未能广泛用于食品着色,其原因有三:首先,它们的化学 性质十分不稳定,而且难于提纯,因而不易作为商品大量获得。其次,花青苷与合成色 素相比,其色素在数量级上要低倍。再次,其颜色很容易受到食品中发生的大量化 学反应的影响。 现代医学证明,有些人工合成色素对人体有害并存在潜在的致癌作用。研究表明, 花青苷有很强的清除自由基和抗氧化、抗衰老、抗癌、增强免疫和预防肿瘤等保健功能。 因此,天然食用色素已成为世界食用色素工业的发展总趋势。特别是在和 等国际组织大规模禁止合成色素用于食用后,各国食品科学家对资源丰富的天然花青 苷的应用研究产生了极大的兴趣,并取得了许多突破性的进展。目前,虽然我国还处 于天然色素和合成色素共同发展时期,但是开发、推广天然色素也是我国色素行业发展 的主要方向。 最早使用花青苷名称的入是瑶,他首次从矢车菊花中提取一种蓝色色 素,故称此为花青素,最早获得花青苷结晶的是,此后许多人致力于这方 ’。 面的研究。其中贡献最大的要算是等人 。.花青苷类物质的结构和分类 花青苷是一类水溶性植物色素,目前,已知结构的花青苷及其衍生物种类有多 种。花青苷具有类黄酮典型的结构,花青苷的苷元一花青素是.苯基苯并吡哺盐 ..或黄烊盐的多羟基和甲氧基衍生物。以一为 基本骨架,花色基元的结构如下: 图花色基元的结构 大多数花青素的.,.,一碳位上有取代羟基。由于环各碳位上的取代基不同羟 基或甲氧基,形成了各种各样的花青素,现在已知的有多种。花青素溶于水和乙醇,绪论 不溶于乙醚、氯仿等有机溶剂,遇醋酸铅试剂会沉淀,并能被活性炭吸附。其颜色随 值不同而改变,在酸性条件下显色较好,呈红色,在中性、近中性条件下呈无色,在碱 性条件下呈蓝色。花青素的颜色随值不同而改变是由于在不同值条件下其分子 构型不同。 表.食品中常见的花青素 自然状态下游离的花青素极少见,而是常与一个或多个单糖如葡萄糖、鼠李糖、 半乳糖、木糖或阿拉伯糖等、二糖如接骨木糖、槐二糖、芸香糖等或三糖等通过 糖苷键形成花青苷。在溶液介质中花青苷的稳定性强于花青素。通常发生糖苷化的位置 在.位上,也可以是.或和.位。糖苷化还可以发生在’、’或和’ 位,但由于空间位阻效应,一般不会同时在’和’位糖苷化。花青苷中的糖苷基和 羟基还可以与一个或几个分子的对位香豆酸、阿魏酸、咖啡酸、丙二酸、对羟基苯甲酸 等通过酯键形成酰基化的花青苷。最常见的酰化形式是酰基与.位的糖苷键合。由于 每一种花青素都有可能被不同数目和种类的糖和酸在不同的位置上糖苷化和酰基化,使 得目前存在的花青苷有多种。 ..花青苷物质的初步分离鉴定 目前,经过鉴定结构的花青苷类色素有数百种,各种近现代分析仪器和方法提供了 快速可靠的手段,积累了大量的数据【。 纸层析法印 ,:纸色谱法是世纪年代发展起来的 ~种分离鉴定方法,通常是用 号或新华号层析纸,按照上行或是下行法, 经过溶剂展开后的样品,在纸上呈现带状,按带大小剪下,用溶剂沈脱,蒸去溶剂,即 可得到纯品。也可以采用上行法,通过在不同展开剂中展不得到的斑点的值,比对 标准数据初步判断主要成分。 柱层析法啪 ,:对于从植物的粗提取物中分离大量的 花青苷类物质仍足一种有效的方法。常用的吸附剂有:硅胶,纤维素,聚酰胺和离子交江南大学硕十学位论文 系,以甲醇为溶剂。 换树脂。为分离得到纯品还可使用葡聚糖凝胶 紫外一可见光谱法. :主要是通过花青苷 的.%甲醇溶液的紫外一可见光谱特性,以及添加其它试剂后,光谱的变化来对 花青苷的结构作出一定程度的分析。 红外光谱法矗. 仇 :早在世纪年代,国外的科学 家就开始应用红外光谱研究花青苷,目前也积累了较多的数据。将样品作出红外光谱与 标准图及数据对照,可以对花青苷的结构有进一步的了解。花青苷的红外光谱主要有苯 环,含氧杂环,糖和羟基,甲氧基四部分一。 高效液相色谱法 ,:高效液相 色谱法应用于花青苷物质的分离具有分析时间短、分辨率高、无热分解的危 险、需样量 少等优点。 柱 ,柱温 等人采用的是, ?,流速/,流动相为%和甲醇的线性混合物甲醇%一% 分离红酒复杂的花青苷。? 等人曾撰文介绍以反相/光二极管阵列检测 器 鉴定花青苷类物质。该法根据紫外可见光谱差异可将飞燕 草素、矢车菊素、天竺葵素的衍生物区别开来。在该文中详细介绍了多种果木含有花青 ,?。 苷的情况,各种花青苷的光谱特性,及波谱特性 .抗氧化活性 ..抗氧化剂 抗氧化剂是一类能延缓或减慢油脂氧化的物质,已报道的具有抗氧化活性的天然或 合成化合物有几百种。世纪年代,人们试验发现过量的人工合成的抗氧化剂 会引起动物肝脏增大,并有致癌的可能性,而天然抗氧化剂以其天然、安全性高、无毒 副作用、防腐保鲜等特点日益受到重视,其开发利用更成为食品添加剂的一大特点玉。 已知来源的天然抗氧化剂有甘草抗氧化剂、茶多酚、、、植酸及植酸钠、鞣 花酸、竹叶黄酮、芝麻酚等【”珈。黄酮类化合物在世纪年代即发现具有活性, 年代证实具有抗油脂氧化活性,作为一种抗氧化剂使用。世纪年代以后,对其 研究开始转向对活性自由基的清除以及对老年病的防治功能上。研究发现在生物体内它 们有预防心血管疾病、防癌抗癌、调节免疫、抗衰老、抗菌抗病毒、抗炎抗过敏、止血 镇痛等诸多功效,已列其为保健食品的一类功能因子。自由基可以导致食物中油脂的 过氧化,降低食物的营养价值,大量自由基的产生也会破坏生物体内的诸多物质,从而 引发心脏病、糖尿病甚至癌症等疾病【】。因此,在食品、医药工业中,抗氧化剂的应用 越来越普遍。人工合成的抗氧化剂叔丁基一一羟基茴香醚,,一二叔丁基一一羧基 甲苯广泛使用。但由于它们具有潜在的毒性和致癌作用,具有安全性高,抗氧 化性强的天然食品抗氧化剂日益受到重视。因此,研究开发高效和安全的天然抗氧化剂 已经成为当今食品添加剂研究领域的热点之一【】。 绪论 ..天然抗氧化成分提取的主要方法 ...有机溶剂提取法 溶剂提取是根据原料中被提取成分的极性、共存杂质的理化特性,遵循相似相溶的 原则,使有效成分从原料固体表面或组织内部向溶剂中转移的传质过程。常用的溶剂有: 甲醇、乙醇、乙酸乙酯、丙酮、三氯甲烷、二氯甲烷、正己烷、石油醚等。朱宏莉? 等采用正交实验设计确定了竹叶黄酮提取的最佳,以溶剂种类、溶剂浓度、料液比、 浸提时间,作为主要考虑因素,得出最佳提取条件:%丙酮,料液比为:的条件 下回流浸提 ,并采用.大孔吸附树脂与聚酰胺树脂联用的方法纯化竹叶提取物, 最终竹叶总黄酮含量可达.%。周才琼【】采用由低极性到高极性的系统溶剂提取法 浸提金银花花叶,通过纸斑反应,紫外灯观察颜色并用荧光检测,试验表明金银花及叶 中的黄酮类种类相似,但叶中黄酮类含量大大高于花中的含量,金银叶中的黄酮类化合 。 物最佳提取工艺为%乙醇,物料比:,?下温浸 ...超声波提取法 超声提取法是应用超声波强化提取植物的有效成分,是一种物理破碎过程,近年来 应用到中草药有效成分提取分离中的一种提取手段,其原理主要是利用超声空化等性质 增大物质分子运动频率和速度,增加溶剂穿透力,提高药物溶出速度和溶出次数,同时 超声波的热效应使水温基本在?左右,对原料有水浴作用,缩短了提取时间。与常规 提取法煎煮法、水蒸法、蒸馏法、渗浓法等相比,具有提取时问短,提出率高,低 温提取有利于保护有效成分等优点。目前超声波辅助提取和超卢波提取技术,主要应用 于人参皂贰、传统中药、花青素等高附加值天然产物的提取过程中,在欧洲大型的超声 设备已有应用。 郭青枝【】等人用超声波提取苦瓜黄酮,与传统提取法相比,具有省时、高效的优点。 张健【】等人用超声波提取技术提取山绿茶中的主要有效成分黄酮,采用『交实验法设计 试验工艺,获取提取的最佳工艺条件。 ...微渡提取法 微波辅助萃取是利用微波能来提高萃取率的一种新技术。微波的热效应足基于物质 的介电性质和物质的内部不同电荷极化不具备跟上交变电场的能力来实现的【】,此法在 黄酮类物质的提取上也取得了良好的效果,它在提取过程中,具有反应高效 性、选择性 强等特点,而且操作简单,副产物少,产率高,产物易提纯。王琪【州等对木兰属种药 用植物花蕾的总黄酮进行提取工艺研究,微波法较常规法平均高.%。 ...超临界萃取法 早在年,和砒就曾报道过有关超临界流体对液体和固体物质具 有显著溶解能力的这种现象【。近年来,随着超临界流体提取技术的迅速 发展,在天然药用植物有效成分提取中应用越来越广泛。它和上述提取工艺相比较,具 有提取效率高、无溶剂残留、天然植物中活性成分和热不稳定成分不易被分解破坏等优 点【】。同时还可以通过控制临界温度和压力的变化,来达到选择性提取和分离纯化的目 的。因此,在当今人们渴望回归大自然的潮流中,该提取方法倍受青睐,用超临界二氧江南大学硕十学位论文 化碳提取银杏叶黄酮类成分的方法,已受到人们的关注,在欧洲已有专利报道。孙婷副 利用超临界萃取法提取银杏叶中黄酮类物质及用高效液相色谱法测定其含量。 ..抗氧化能力测定方法 食品中各种抗氧化物质作用强弱,取决于其抗氧化的能力或称抗氧化活性, 觚 。抗氧化能力的测定方法有许多种,有直接的,也有间接的,还有简 便的总抗氧化能力试剂盒等。这些方法都有一定的优缺点或局限性或专用 性, 测定原理各不相同,因此,为获得确切的评价结论,有时还需要用两种或两种 以上的方 法进行测定,以获得满意的评价【。 ...油脂抗氧化法 包括亚油酸抗氧化法、猪油抗氧化法、硫氰酸盐抗氧化法。硫代巴比妥酸 法和诱发脂蛋白过氧化法等。其原理是在氧或氧化剂的化学作用下,不饱和 脂肪酸发生氧化作用,通过测定其过氧化值来评价抗氧化剂抗氧化效剁】。 ...自由基清除能力法 包括抗氧化能力指数法、,.二甲基.对苯二胺法、二苯代苦 味酰基自由基?法、总体抗氧化值 .法、铁离子还原/抗氧化能力 测定法、邻二氮菲化氧化法等。其原理是抗氧化剂与自由基发生反应, 通过测定一定波长下吸光值的变化,来评价抗氧化剂抗氧化效果。 ...抗氧化酶活性法 包括超氧化物歧化酶、过氧化氢酶、谷胱甘肽过氧化物酶、 谷胱甘肽还原酶等活性测定。其原理分别为根据。?或产生。?的歧化量, 来确定活性;根据把底物分解称和的量求得活性;以还原型谷 胱甘肽为还原剂,根据消耗量求得.活力;根据催化氧化型谷胱 甘肽与还原型辅酶反应使还原成来测得活性。 目前,广泛应用?法来测定抗氧化能力,?分析法是一种筛选自由基 清除剂的简便方法,在国外有着广泛的应用【.。该分析方法的分析原理是依 据 ?具有单电子而使其在 处有一强吸收呈深紫色,当存在自由基清除剂 时,由于与其单电子配对而使其吸收逐渐消失,其退色程度与其所接受的电子数成定量 关系,因而可用分光法进行定量分析‘,。实验表明,该法简便易行,灵敏可靠,不失 为筛选天然产物抗氧化剂的好方法之一引。 .毛细管电泳概述 ..高效毛细管电泳及其特点 使用自组装的.装置,如图.所示,电化学检测为三电极体系:碳圆盘电极 为工作电极,饱和甘汞电极为参比电极,铂丝为辅助电极。 绪论 图一 装置示意图 .高压电源;.进样池;毛细管;,检测器;.检测池;一参出电板;.铂对电极 .工作电极碳电极;.微机处理系统;.三雏调节器 高效毛细管电泳是离子或荷电粒子以电场为驱动力,在毛细管中按其淌度或分配系 数不同进行高效、快速分离的一种电泳新技术。在应用广泛的毛细管电泳区带电泳 哪 ,中,毛细管和电极槽内充有相同组分和相同浓度的 背景电介质溶液缓冲溶液。样品从毛细管的一端成为进样端导入,当毛细管两 端加上一定的电压后,荷电溶质便朝与其电荷极性相反的电极方向移动。由于样品组分 闻的淌度不同,它们的迁移速度不同,因而经过一定时闯后,各组分将按其速度或淌 度大小顺序,依次到达检测器被检出,得到按时间分布的电泳谱图。用谱峰的迁移时 间,或类似于色谱学的术语保留时问作定性分析,按其谱峰的高度或峰面积 作定量分析。 由于毛细管具有良好的散热效能,允许在毛细管两端加上高至的高电压,分 离毛细管的纵向电场强度可达到/以上,因而分离操作可以在很短的时间内多 数小于 ,最快可在几秒钟完成,达到非常高的分离效率理论塔板数达到 /以上,最高达 /数量级。因为毛细管内径很小一般小于”,对 内径..,长度为的毛细管,其容积不足肛,进样体积在级,样品 浓度可低于/。因此,达到了仪器分析技术所要求的高效、快速、样品用 量少等最基本和最优异的特点。此外,还有容易自动化,操作简便,溶剂消耗少, 环境污染小等优点。正因为技术具有如此诱人的优点,使它在短短的十几年中, 特别是在最近几年,受到分离分析科学家的极大关注,成为生物化学和分析化学中最受 瞩目、发展最快的一种分离分析新技术。 ..电化学检测法 电化学检测有三个基本模式:安培法、电导法和电位法。安培法测量化合物在 电极表面受到氧化或者还原反应时,失去或得到电子,产生与分析物浓度成正比的电极 电流。电导法和电位法是测量两电极问由于离子化合物的迁移引起的电导率或电位变 化。 安培法是三种模式中最容易实现,也是最普遍应用的一种电化学检测法,安培法检 测,可使用极细孔径的毛细管而不会造成灵敏度的损失,且进样量极少,因而适合进行 细胞分析和活体分析,该检测法已成为生物分析化学领域很有前景的新技术。安培检测 对于大多数易于氧化还原反应物质的浓度检测限可达到‘/质量检测限可达 江南大学硕士学位论文 ‘/。常用电极多为碳纤维电极、铂、金、银和铜等金属电极。安培检测法的缺 点在于它仅能检测具有电活性的物质,重现性尚不理想。 安培检测主要采用离柱安培检测和柱端安培检测,离柱型检测昏最简 单的接口设计是在端口处不作任何处理。但是通过毛细管的电流比在电极上 检测到的法 拉第电流高.,为了将高电场下分离电流与检测电流隔离开,通常在毛细管断口处 加上导电接口。接口材料通常用多孑玻璃、娟、、醋酸纤维素接口和毛细管 蚀刻等。离柱型检测虽然降低了检测噪音,但是接口制作繁琐,存在区带变宽现象,分 离电压和电流难以达到完全接地的状态。 柱端型检测.不采用任何接口,直接将工作电极置于毛细管出口位置 进行检测。有研究表明当毛细管的内径不大于岬时,高电压对毛细管柱端检测的背 景噪音影响可以忽略,柱端检测对于电极的要求不是很苛刻,有利于使用不同材料的电 极。叶建农等提出了用大直径的圆盘电极进行射壁式安培检测,改善了检测方法的稳定 性和重现性。近年来科研人员对柱端安培检测法进行了改进,对毛细管的出口端进行蚀 刻,扩大出口内径,从而使电极易于安装。 安培检测还可以分为固定安培检测和脉冲安培检测。固定安培检测是电化 学检测中使用最多的检测方式,使用不同的电极材料为工作电极,能对不同类型的无机 物和有机物进行检测,且有高的灵敏度和低的检测限。在恒电势检测条件下,贵金属 或的高催化活性常因电极表面中毒失活,脉冲安培检测通过施加一系列电压脉冲 来清洁电极表面,减少毒化,恢复活性。 ..毛细营电泳的应用 高效毛绌管电泳的分离效率高,速度快,样品用量少,在化学、生命科学、药物学、 临床医学、法医学、环境科学、农学、燃料及食品科学等领域有着十分广泛的应用。从 小无机离子到生物大分子,从荷电粒子到中性分子均能用技术进行分离分析。尤 其是对样品珍贵,取样极少,基体复杂的生物大分子,技术更展示出特有的分离 能力与极大的应用前景。 ...核酸的分离分析 包括生物大分子结构、转基因、重组在内的基因工程是生物技术的关键和核 心之一,与之密切相关的基因分析则是毛细管电泳最为重要的应用领域。其中包括测序、 点突变、基因指纹图等。汪洁等【】使用线性聚丙烯酰胺作为筛分介质,对片断长度为 ~ 地标准样品进行毛细管电泳,利用激光诱导荧光方法检测信号,荧光 燃料为溴化乙啶。提出一种修正地筛分理论,假定迁移的分子在电场强度 方向延展拉伸,如同小分子穿过凝胶筛孔。在修正模型中,的迁移率仅依赖于电 场强度、筛分介质浓度和片断长度,很好地解释了实验现象。 ...氨基酸 氨基酸是蛋白质组成的基本单位,因其本身缺乏用于检测的物理性质,如光吸收, 光发射或电化学活性,所以需要用各种衍生技术使其具有光活性或电化学活性。丁祥欢 等【】用毛细管电泳一电化学检测法检测了四种食醋和四种酱油样品中的精氨酸、组氨 绪论 酸、酪氨酸和色氨酸四种氨基酸的含量。 ...肽 / .. 黄颖等【】在未涂层的石英毛细管中,以. ?,的 .为运行缓冲液,采用紫外检测波长为啪,建立了果蔬中谷胱 混合体系 甘肽的毛细管电泳测定方法。结果表明:为.~ ‖时具有良好的 线性关系,相关系数.;最低检测质量浓度为. ‖/。 ...蛋白质 用分离肽或蛋白质,在方法上有许多共同之处,因为两者结构上仅仅是氨基 酸数目多少的差异。但是,蛋白质的管壁吸附严重,如何抑制和消除管壁对蛋 白质特 别是碱性蛋白质的吸附,往往是蛋白质分离成败的关键。张玉奎等【】研究 指出, 用强碱. 甩清洗管壁可使管壁处于完全解离状态,利于蛋白质的分析; 各组分之间的相对迁移时问不随电压变化,可作为中峰定性的可靠参数。 ...对映体 / 黄宝美等【以未涂层融硅石英毛细管 ד为分离柱, / . / ,实现了 十.作为电泳运行液,分离电压 苯丙氨酸对映体的分离检测。 ... 在药物及临床分析中的应用 孙汉文等?对快速分离和同时测定人体尿液中种氟喹诺酮的毛细管区带电 泳新方 .,法进行了研究。以×之/硼砂和. /磷酸作电泳缓冲溶液 压力和?条件下进样 ,在 电压下,以紫外检测器于 波长下检测,种氟 喹诺酮在 内得到良好的分离,检出限为.. /。 ...环境物质 ,、多氯联苯、农 环境污染物中的多环芳烃 药、有害金属化合物等,由于它们自身有毒害作用或具有致癌性而受到广泛重视。、? 等【运用磺丁基。一环糊精一甲基一一环糊精一硼砂体系在 内分离了土 壤中的种。年,等【】采用阳离子型表面活性剂溴代十六烷基吡啶的 醋酸缓冲液构成,在线分离了种。 .本课题的目的和意义 黑玉米是一种营养价值较高的玉米品种,黑玉米中含有大量的黑色素,黑色素有很 强的清除自由基和抗氧化的能力,能有效地清除人体内的自由基.防止可见光和紫外光 的辐射,具有抗肿瘤、抗衰老、护肤养颜之功用。目前对黑玉米研究的文献报导较少。 本论文的主要工作如下: 、以黑玉米为原料,对黑玉米中的黑色素的提取工艺进行了研究。选择溶剂用量、 提取时间、值、物料比个因素进行『交实验,采用紫外可见分光光度计测定,确 定黑玉米色素的最佳提取条件。并用液质联用技术.对玉米黑色素的组成进行了 分析。 江南大学硕士学位论文 、通过一系列抗氧化性能实验,研究了黑玉米的抗氧化活性。用不同极性的溶剂 对黑玉米的抗氧化性物质进行提取,然后进行清除?自由基的实验,得出抗氧化 性最强的一部,然后进行抑制邻苯三酚自氧化实验和抑制猪油白氧化实验,并进行黄酮 总量的测定。为了进一步说明黑玉米的抗氧化性效果,做了黑玉米与黄玉米的抗氧化性 比对实验,为黑玉米和黄玉米的不发利用提供了理论依据。 、用毛细管电泳一电化学检测法.对黑玉米皮中丙氨酸、缬氨酸和亮氨 酸的含量进行测定。由于这三种氨基酸无紫外吸收、荧光发射及电化学活性,常用的检 测方法是使氨基酸在硫醇类化合物存在下与邻苯二甲醛发生反应然后再进行检 测,但是硫醇试剂具有较大的毒性且有强烈的刺激气味。本试验用亚硫酸钠代替硫醇试 剂进行衍生化反应,然后再用.检测黑玉米皮中三种氨基酸的含量,和方 法相比,成本低、试剂用量小,该法用于实际样品的测定,结果令人满意。 黑玉米中黑色素的提取艺及组分研究 黑玉米中黑色素的提取工艺及组分研究 玉米是我国大部分地区的主要粮食作物之一,其中含丰富的蛋白质、氨基酸、粗纤 维和微量元素等。其皮中含有大量的黑色素,不仅因无毒、色质好,可广泛应用于食品 工业,如饮料、糖果、糕点、巧克力、果酱等,而且也可以用于其他领域。 黑玉米中含有大量的黑色素,黑色素属于花青苷类色素,是类黄酮化合物,有很强 的清除自由基和抗氧化的能力,是一种具有药用价值的天然食用色素资源。据日本报道, 从黑玉米中提取的黑色素具有抗癌效应,而且可以一并提取作为副产品的玉米油,因而 提高了黑玉米的使用价值。为了深入研究黑玉米中黑色素的药用保健与治疗效能,本文 对黑玉米中黑色素的提取方法进行了研究【?。 目前关于黑玉米中黑色素的提取已有较多报道【盯,但是分析黑色素中花青苷的组 成的文章报道很少。本文对山东和山西两种黑玉米中的黑色素进行了提取,利用正交实 验确定了黑色素的最佳提取条件,采用液质联用.技术对这两种黑色素花青苷 的种类进行了探讨。 .实验药品与仪器 ..材料与试剂 名称 规格 厂家 黑玉米 山东安丘,山西忻州 石油醚 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司 乙酸乙酯 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司 无水乙醇 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司 浓盐酸 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司 氢氧化钠 分析纯 中国医药集团上海化学试剂公司 甲醇 色谱纯 江苏汉邦科技有限公司 乙腈 色谱纯 江苏汉邦科技有限公司。 ..仪器与设备 名称 厂家 电子分析天平 上海分析天平仪器厂 , 瑚 液质联用仪 型双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 旋转蒸发器也. 巩义市英峪高科仪器厂 超声波清沈机 无锡市通超电子公司 循环水式多用真空泵 河南省巩义市站街光亚仪器厂江南大学硕士学位论文 .实验方法 ..黑玉米色素的脱脂 称取一定量的黑玉米,用粉碎机粉碎,加入石油醚~?用超声提取法提取, 除去玉米皮中的脂溶性成分,过滤,风干;然后用乙酸乙酯超声提取,除去玉 米皮中的 弱极性物质,过滤,吹干。 ..黑玉米色素漫提条件的正交实验 选择溶剂用量、提取时间、值、物料比个因素,采用紫外一可见分光光度计 测定,以是吸光度,是相对体积比倍数表示,确定黑玉米色素的最佳提取 条件。 ..黑玉米色素的紫外可见光谱分析 ,移入. 分别用移液管吸取山东和山西的黑玉米色素浓缩液. 容量瓶 中,用乙醇稀释至刻度,进行紫外一可见吸收光谱扫描。 ..黑玉米色素的纯化 称取经过处理的山东、山西黑玉米皮 ,加入 %乙醇一水溶液体积比, ;然后旋转蒸发除去乙醇, 加入浓盐酸,调至溶液的,然后在室温下超声 将浓缩后的色素加到已处理好的填充有弱酸性阳离子交换树脂的离子交换 柱中,停 留半个小时,待色素和交换树脂充分交换后,再先用去离子水洗涤,将色素中 的糖类等 杂质除去,再用%的乙醇溶液将色素洗脱下来,旋转蒸发后得到色素浓缩 液。 弱酸性阳离子交换树脂的处理:先用水浸泡一下,以便除去杂质。先用./ 的溶液洗柱,将柱洗至碱性;然后用水洗至中性;再用./的沈柱, 沈至酸性,然后再用去离子水洗至中性。 ..黑玉米色素的液质联用分析 . . 液相色谱的分析条件:分析柱: ;检测器:二极管阵列; 流动相:甲醇。.%甲酸,梯度洗脱;柱温:?;流速:. /;进样量:此。 质谱的分析条件:离子源温度:?;脱溶剂气温度:?;质量范围:. 州;光电倍增器电压: ;气体体积流量:. 哪:..;锥 /; 。 孔电压: ;毛细管电压:.:. ;:. .结果与讨论 ..黑玉米色素的紫外一可见光谱分析 花青苷类化合物分别在波长 附近和~姗各有一个特征吸收峰。将两 种黑玉米色素分别用乙醇溶解,进行紫外.可见光谱扫描,发现山东和山西两 种黑玉米 , 色素在紫外区和可见光区各有一个较强的特征吸收峰,其波长分别为 黑玉米中黑色素的提取工艺及组分研究 和衄, 。从而可初步推断黑玉米色素为花青苷类物质。 ..黑玉米色素的正交实验分析 表.正交实验方案的设定 表.正交实验方案及结果 注:表示以:为基准比例,其他比例下测得的换算成和它相同总体积下的 即,:,;:,。 用表示的原因如下: 吸光度为: ..,所以~ ., 黑玉米中黑色素的提取率州×%./×%. /×% ../.×%。 其中,:每次称取黑玉米粉木的质量定量;:每次提取黑色素的质量定量; :液池的厚度定量;:吸光系数,影响因素有:溶剂,乙醇的浓度有一定的影 响,值有一定的影响,吸光物质相同,波长相同。所以黑玉米提取率主 要与吸光度值和体积有关,而其他因素影响较小。 从表一、表.可以看出浸提液的吸光度随因素水平的变化而变化的范围。混 合江南大学硕十学位论文 浸提液中的值是主要影响因素,各因素对色素提取效果的影响程度依次为 。 。最佳提取工艺为:乙醇浓度%,物料比:,,浸提时间 ..黑玉米色素的液相色谱图分析 经纯化、旋转蒸发处理过的山东和山西的色素浓缩液分别进行高效液相色谱 法分 析,分别得到液相色谱图,如图..,.所示。从图.可以看出,山东黑玉米色素中 出峰的组分含量为.%和. 出峰的 主要含有两个组分,分别是. 组分含量为.%;从图.可以看出,山西黑玉米色素中主要含有个组分,分 别是. 出峰的组分含量为.%;. 出峰的有两个组分,两种色素的 保留时间基本相同,在色谱图上几乎不能分开,但在随后的质谱检测中可以 发现有两个 组分总含量为.%。 ... . ... . 了 儿. .一 . . 弧孤叭互 . 《.. . 季?埘耄嘶叫伽嗍 ?鸵强叭弛矗吼诅 的?惦钉他伯札昌吕 %??他鹑?阳%弧 . .. 旱 . 月 ..: , 图.山东黑玉米色素的液相图黑玉米中黑色素的提取上艺及组分研究 .% . . . . .. . . . . .. . .. . . . . .. . . . . . .. ... . . . . 图山西黑玉米色素的液相图 ..黑玉米色素的质谱图分析 为了进一步获得黑玉米中花青苷的种类和分子量组成,最好的方法是做核磁共振分 析,但是核磁共振需要的是纯品,尽管我们采取了一系列的手段对黑玉米色素进行分离, 但是仍旧很难得到花青苷纯品,由于花青苷的对照品也不易获得,所以仅采用高效液相 色谱法无法进行定性分析。质谱法与液相色谱法结合,既发挥了色谱法的高分离能力, 又发挥了质谱法的高鉴别能力,最适用于做多组分混合物中未知组分的定性鉴定。图. 是. 出峰的山东黑玉米组分的质谱图,从图中可知该色素的相对分子量为, 已知为花青苷,可推知其分子式为,是矢车菊花青苷;从图中还可以看出正 好失去的离子碎片峰,下好是一个六碳糖失去一个水之后的分子量,与花青素成苷 的五种糖中只有葡萄糖和半乳糖是六碳糖,所以成苷的糖可能是葡萄糖或半乳糖。同样 从图.中可知该花青苷的分子量为,分子式为,是天竺葵花青苷,同样 失去的离子碎片峰,成苷的糖也是葡萄糖或半乳糖;从而可知山东黑玉米中 主要含 有两种花青苷,分别为矢车菊花青苷和天竺葵花青苷。 江南大学硕士学何论文 婴步 气呵一三.三翟一.一下上一要辫黑一一.呷一 鼍???冬??一忽 . 图. 出峰的山东黑玉米组分的图 零 . 图. 出峰的山东黑玉米组分的图 图.是. 出峰的山西黑玉米的图,可知该色素的相对分子量为, 出峰的山西 同样是矢车菊花青苷,成苷的糖也是葡萄糖或半乳糖;图.是. 黑玉米的图,从图中可知色素的相对分子量为,为天竺葵花青苷,成舒的糖是 葡萄糖或半乳糖;图.是. 出峰的山西黑玉米的图,由图可知该色素的相 对分子量为,可推知分子式为,是芍药花青苷,失去的离子碎片峰, 所以成苷的糖也是六碳糖,是葡萄糖或半乳糖。从而呵知山西黑玉米色素中 主要含有三 种花青苷,分别为矢车菊花青苷,天竺葵花青苷和芍药花青苷。 黑玉米中黑色素的提取艺及组分研究 一 . . .僭,.罗 。 。.拿.。?,彳.芦. , ’. , : 能 . . 『 . . 忽 . 图. 出峰的山西黑玉米组分的图 附 . 硝一 . . .妒.?尹.叩严 .一工一一。一皇 忽图. .出峰的山西黑玉米组分的 陆 . , . ..‘上. . 孑一 耩一 . 皿驴二 ’叩’稍‘?. 一一? / 口 口 . 图. 出峰的山西黑玉米的图 江南人学硕士学位论文 .小结 、本实验采用超声浸提法,以提取剂的浓度、物料比、值、提取时间为考虑 因 素,对黑玉米中黑色素的提取条件进行了优化,通过下交实验得出了提取的 最佳条件为: 。 %的乙醇作为提取溶剂、物料比:,,提取时间 、利用液质联用技术对山东和山西两种黑玉米色素中的花色苷的种类进行了 分析, 得出山东黑玉米色素中主要含有两种花色苷,分别为矢车菊花色苷和天竺葵花色苷;山 西黑玉米色素中主要含有三种花色苷,分别为矢车菊花色苷,天竺葵花色苷和芍药花色 苷。两种黑玉米色素中成苷的糖都是六碳糖,为葡萄糖或半乳糖。 黑玉米和黄玉米中抗氧化提取物的试验研究 黑玉米和黄玉米中抗氧化提取物的试验研究 抗氧化剂是食品加工业中一种常用的食品添加剂,目前常用的合成抗氧化剂如叔丁 基一一羟基茴香醚,,一二叔丁基一一羟基甲苯等往往对人体产生不利的 影响,因此,研究开发高效和安全的天然抗氧化剂已经成为当今食品添加剂研究领域的 热点之一。 黑玉米是近几年来开发的一个新品种,其中含有大量的黑色素。研究表明,黑色素 属花青苷类色素,是类黄酮化合物,有很强的清除自由基和抗氧化的能力,并以高效、 低毒、高生物利用率而著称。是一种具有药用价值的天然食用色素资源,黑色素能有效 地清除人体内的自由基.防止可见光和紫外光的辐射,具有抗肿瘤、抗衰老、护肤养颜 之功用【刮。 近年来,自由基及自由基清除剂的研究越来越受到重视,已经将抗氧化检测 用于抗 衰老等保健食品的评价中吲,加。目『,有关玉米抗氧化性报道的文献很少, 为了进一步 说明黑玉米的抗氧化性‘,,本文做了黑玉米与黄玉米的抗氧化性比对实验, 为黑玉米 和黄玉米的开发利用提供了理论依据。 .实验药品与仪器 .实验药品 名称 规格 厂家 山西忻州 黑玉米棒 黄玉米粒 辽宁新民 猪油 市售 二苯代苦味酰基自由基分析纯 阿法埃莎天津化学有限公司 邻苯三酚 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 三羟甲基氨基甲烷碱 国药集团化学试剂有限公司 硫代硫酸钠 分析纯 碘化钾 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 石油醚 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 乙酸乙酯 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 无水乙醇 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 氯仿 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 正丁醇 分析纯 国药集团化学试剂有限公司 ..实验仪器 名称 厂家 ?型双光束紫外可见分光光度计 北京普析通用仪器有限责任公司 旋转蒸发器冱. 巩义市英峪高科仪器厂 江南大学硕士学位论文 无锡市通超电子公司 超声波清洗机 河南省巩义市站街光亚仪器厂 循环水式多用真空泵 .样品前处理和溶液的配制 将黑玉米脱粒和黄玉米粒一起分别用粉碲机粉碎,所得粉末于?的烘箱中干 燥 小时,冷却后装于密封袋中,至于干燥器中备用。 , ?溶液配制:准确称取?. 肛/ ,用无水乙醇定容至 避光保存。 / /邻苯三酚溶液配制:用称重法准确称取邻苯三酚. ,用. 溶液溶解定容至 ,再取 此溶液定容至 即可。?缓冲溶液的配制:称取三羟甲 基氨基甲烷. . ,至于 / 容量瓶中,加入. 溶液. ,最后用去离子水定容。 芦丁对照品溶液的配制:准确称取.芦丁对照品,加%乙醇溶解并定容于 容量瓶中。 .实验方法 ..玉米抗氧化性物质的提取 采用超声直接提取法,准确称取黄玉米粉术 左右于烧杯中,按料液比:‖, 加入石油醚 ,用保鲜膜密封烧杯,浸泡一昼夜,再超声提取小时,减压过滤。 滤渣再加等量溶剂超声提取小时,减压过滤,集中所得滤液。 取一空圆底烧瓶称重,集中滤液在?下旋转蒸发,所得黄色油状物即为产物。 将 圆底烧瓶再次称重,计算产率。 如以上方法,分别用正丁醇、乙酸乙酯、氯仿和%乙醇提取黄玉米和黑玉米粉 末, 最终所得产物分别用相应提取溶剂溶解,转移并定容至 容量瓶中,避光冷 藏。 ..玉米提取物清除咱由基实验 取个锥形瓶,分别加入提取液.、.、.、.、. 黑玉米%乙醇提取 物加入量则为.、.、.、.、. 和?溶液. ,用相应的提取溶剂定容 至 乙醇和. 相应溶剂混合 。摇匀后,静置分钟,做吸光度测量用. 相应溶剂和. ?溶液, 溶液凋零,所得值为;取一个锥形瓶,加入. 摇匀后,静置分钟,做吸光度测量,所得值为;取个锥形瓶,分别加入提取液 .、.、.、.、. 黑玉米%乙醇提取物加入量则为.、.、.、.、. 和无水乙醇. ,用相应溶剂稀释至 。摇匀后,静置分钟,做吸光度测量, 所得值为。按照下列公式计算清除率,清除率越大抗氧化能力越强。 清除率/%一?/×% ..玉米乙醇提取物抑制邻苯三酚自氧化实验 和去离子水. ,在?水浴中保温 ,取出 取“.缓冲溶液.黑玉米鞠焚玉米孛抗氧纯提取物麓试验磷究 艏立即加入在?预热过的 /邻苯三酚. ,迅速擂匀后倒入比色戚,四 下簿隔 测吸光发,计算线性藏圉舞吸竞度的增加。按主法分裂热入黄玉米提 毅扬和 黑玉米提取物.、.、.、.、.代替等量去离子水,在波长咖下每隔 秒溅吸光度,诗算线性范豳内吸光度的增加,默去离子水巍空爨。按照下燹公 式计算搦 制率,抑制率越大抗氧纯熊力越强。 抑制率一?/,?一?舭专/???×% ?焰专:邻苯三酚是氧化对瓣反应速率; ?必:加入抗氧化剂后邻苯三酚的反应速率 。。露玉拳乙醇提取物柳拳猪油鸯氯化羹验 分别称取. 以及黄玉米和黑玉米提取物,加入到猪油中,每 ,.篮 份猪油为 ,放入酾?憾溢培养箱中,以后每隔碡小时测定涟脂的过氧化蘧, 同时取 猪油在同样条件下做空白实验。 ..玉米乙醇提取耪中葸黄糯含量的溯定 总黄酮含量采用亚硝酸钠.硝酸锅比色法测定。以芦丁为标准样,先用芦丁对 照晶 滟铡标准溶液,予燃波长处进行毙色定量测定,绘出标准曲线,褥凄标准魏线 方 程,然蔚根据样晶的吸光度求出黄酮含量。 分别精密吸取芦丁对照燕溶液。?、。?、.、.、.栅,分裂加入亚鞘羧铺溶 液 。 ,摇匀,静鼍分钟,蒜热入硝酸铝添液.激,摇匀,静置分钟,然后拥入 氢氧化钠溶液。 ,摇匀,静置分钟,最后以%乙醇定蜜,摇匀,静霞分钟。 在四处溅定吸光瘦,驭吸光度值为缎坐标,加入的芦丁溶液体积为横坐标, 作标准曲线。 分别精密吸取黄玉米帮冀玉米姆鑫乙醇提取物?.蕊,按上法测箕啜光度值,并震 标准曲线计算其含量。 。蓬结果与讨论 ..玉米提取物清除咱由基实验结暴 ?潆糙?在有祝溶潮中是一种稳定的鸯蠡莲,其乙醚溶液呈深紫色,暴有单一电子,故髓 够接受一个电子或是氢离子,在波长为四下具有最大光吸收。有自由基清除剂存在 时,辫辩觞单毫子被播捉添蘧其颜色变浅,在最大光吸收波长处酶吸光值下降,盛下降程 度璺线糕关系,因此可借紫外/可见分光光度仪束检测?良由基被捕掇的情形,从而评 价试验样燕的抗氧化能力。 黄玉米和黑玉米提取物清除?童舞基实验结果如图。,.。从圈中可以看爨, 楚垂米和黑玉米不同溶剂的提取物对咱出基均具有~定的清除作用,且随着提取 物黧入量的增加清滁作用撩强,置不同溶剂靛提取物清除套崮基的能力不麓,黄 运米中不同溶剂提取物的清除作用的大小顺序依次为;%乙醇提取物正丁醇提取物 乙酸乙酯提取物氯僖提取物石潼醚提墩物;黑玉米中不圈溶剂提取物酶清除 薅用 江南大学硕士学位论文 的大小顺序依次为:%乙醇提取物正丁醇提取物乙酸乙酯提取物石油醚提取 物 氯仿提取物。因此,可以看出两种玉米中均为%乙醇提取物清除?自由基的能 力最强,说明这部分提取物的抗氧化能力较强,所以下面的抗氧化实验均采 用这两种提 取物进行。 .% 正丁醇部 石油醚部 .% 乙酸乙酯部 牛氯仿部 ?夸一%乙醇 ?% ; 篮 蜒 .% .% .% 体积/ . . . . 图.黄玉米不同溶剂提取物清除咱由基的结果图 .% ??一正丁酣部 ?一石油醚部 .% ??一乙酸乙酯部 ?一氯仍部 ?每一%乙醇郝 糌.% 篮 蜓.% .% .% 体积/ . . . . 图.黑玉米不同溶剂提取物清除?自由基的结果图黑玉米和黄玉米中抗氧化 提取物的试验研究 % % 帆 霉\瓣蜊蜒 册 帆 嘶 体积/ . 图.黑玉米%乙醇部清除?自由基结果图 ..玉米乙醇提取物抑制邻苯三酚自氧化实验结果 利用邻苯三酚自氧化反应测定自由基清除剂对其产生的超氧阴离子自由基的清除 作用。邻苯三酚在碱性条件下能够发生自氧化,释放出‘,在 处有光吸收;加 入一定量的样品溶液可对‘产生不同的抑制作用,从而导致光吸收值的变化。 黄玉米和黑玉米%乙醇提取物抑制邻苯三酚自氧化的实验结果如图.,.所 示,由邻苯三酚自氧化实验的抑制率公式求得抑制率,结果见表.。由表.可知, 两种提取物的抑制邻苯三酚自氧化能力随其加入量的增加而增强,且等量黑玉米提取物 的抑制能力高于黄玉米提取物。 厶 厶 ? 厶时间/ 图.黄玉米%乙醇提取物抑制邻苯三酚自氧化实验图江南大学硕学位论文 . . 司. . . .? ? ? 时间/ 图.黑玉米%乙醇提取物抑制邻苯三酚自氧化实验结果图 表.各样品抑制率测定结果黑玉米和黄玉米中抗氧化提取物的试验研究 ..玉米乙醇提取物抑制猪油自氧化实验结果 ,? ?‘??.??趔睾噼捌 时间/ 图抑制猪油自氧化实验结果图 从图中可以看出,加入黄玉米提取物和黑玉米提取物的猪油,其自氧化反应 均有一 定程度得到抑制,且