新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究

新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究 石河子大学 硕士学位论文新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究 姓名:张昕 申请学位级别:硕士 专业:植物病理学 指导教师:李国英孙福在 2002.5.20 新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究 植物病理学专业 ,,,,届硕士研究生 张听 指导教师 李国英教授 孙福在教授 中文摘要 哈密瓜细菌性斑点病是新疆哈密瓜产区最重要的病害之一，一般发病 率在,,一,,,，严重者达,,,，甚至造成全田绝收，为详细搞清引起该病害 的病原种群，作者于,,,,年,,,,,,年在新疆各主要哈密瓜产区及供种单 位采集分离病样,,,个，获得细菌菌株,,,个，选取其中具有代表性的,, 个菌株，经致病性测定、菌体形态学、培养特性、生理生化特性及分子生 物学的一系列测定，确定新疆哈密瓜细菌性斑点病的病原除丁香假单胞菌 黄瓜致病变种(,,,,,,,,,,,, ,,,,,够,, ,,(,,;,,,,,,, ,,,, ,, ,, ,,,,, ,,,,),,,,, ,, ,,(,,,,,)即黄瓜角斑病菌外，还有重要检疫性 病原菌燕麦噬酸菌西瓜亚种,【,;,,,,,,,,。矗,,,,, ,,,,,( ;,,,,,,, ,,;,,,, ,,正,(夕,, , ,,,,， ,, ,,〕)即西瓜果腐病菌。 ,这两种病原细菌寄主范围都较为广泛，能侵染葫芦科的所有供试植物， 均高度感染哈密瓜，中度感染丝瓜、香瓜，轻度感染南瓜、葫芦瓜，对黄 瓜和西瓜的感染程度和症状存在较大差异。该病以带菌的种子和田间病残 体作为初次侵染源，其发生与气候因子、尤其是,、,月份的降雨密切相 关，,月份的降雨决定了当年病菌再侵染的时间，,、,月份的雨量大小决』了病害的速煎壅度。匝呤密瓜生宦生塑些量蛰大、降雨持,咎(时(间越,,;,,,,,,,)为主，生育中期以西瓜果腐菌(,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,)为主。田间病害的这一消长动态与病菌对环境条件的要求、特别与温度的要求有关。 种子处理试验结果表明,,一,,的浓,;,、,,浓,:,,,、, ,,倍,,,的甲醛、,,,倍肛, ,(,,的升汞和,,,,,的次氯酸钙对种子带菌均有良好的防治效果。, 室内药效测定证明，农用链霉素和波尔多液对两类病原菌均有明显的抑制作用;田间药效试验表明，目前对黄瓜细菌性角斑病菌戒,,,,,,,,,,, ,,(,,;,,,,,,,,防效较好的药剂有农用链霉素、氯霉素和氧,,,,,,,,氯化铜，对西瓜果腐病菌,(,;,,,,,,,,占啪盘, ,,,,,( ,,,,,,,,努防效较好的药札与黄瓜角斑病菌((,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,(,,,,,,,,,,))基本相同。 品种抗性鉴定表明，品种间抗病性差异很大，但没有发现免疫品种。在供试品种中，以金龙花、,,、早熟金皇后和伽师瓜等感病性最强，早皇后、金玉和新密, ,号对两种病菌均有一定的抗性。可见种植抗病品种是防治哈密瓜细菌性病害的有效措施之一。关键词:哈密瓜细菌性斑点病 病原 鉴定综合防治 ，,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,;,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ，,?, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,,,,;, ,,,,, ,,;,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,，,, ;,,,,,,, ,;;,,, ,, ,,, ,,,,,—,,,,,,, ,,,, ,, ,,;,,, ,,,,,(,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,, ,, ;,,,,,,, ,,—,,,，,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,, , ,,,(，, ,,,,, ,, ,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,, , ,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,;, ,,,,,,,,, ;,,,,;,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,, ;,,,,;,,, ,,,, ,,,,, ,,,,,—,,,,,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,,—,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, , ,,, ,, ,,, ,，, ,, ,,;,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,, ,, ,,,, ,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,,,,;,,、;,,,,,,,、,,,,,,,,,,;,,、,,,;,,,,;,, ,, ,,,, ,, ,,,,, ;,,,,;,,,,,,,;,(,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,;,,,,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,(,,;,,,,,,,(,,,,, ,, ,,,,, , , , ,),,,,, ,, ,,(, ,,, ,,, ,;,,,,,,,, ,,,,,,,,,,,(;,,,,,,,(,;,,,,鲒,,(夕,,,,,,,，,,,( ,,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,,,;,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,(,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,;, ,, ,,,,,，,,,,,,,, ,,,,,,,;, ,, ,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,, ;,;,,,,, ,,, ,,,,,,,(，,,,;,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,;,,,, ,,,,;,,(,,, ,;;,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,, ,,;,,,,，,,,,;,,,,, ,,,,,,, ;,,,,,,,, ,, ,,,, ,,, ,,,,(,,,,,,,,,, ,,,, ,, ,,,, ,,;,,, ,,,, ,,, ,,,,,,, ,;;,,, ,,, ,,, ？,,,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,, ,,;,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,，,,,, ,, ,, ,,,，,,, ,,,, ,,,？,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,, ,,,,，,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,, ,;;,,,(,,,,, ,,,,,,?悖?,,,,;,,,, ,,,, ,,, ,,,,,,,;, ,, ,,,, ,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,;,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,,, ,,,,;,,,，,,, ,,, ,,,,,,, ,,, ,,,,,,，,,,,;, ,,,, ,,,,,,, ;,,, ,,, ,,;,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,(,,, ,,,,,,, ,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,,,,(,,,,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,, ,,, ;,,,,, ,,,,,,,,, ,,;,,,,，,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,(,,;,,,,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,,,(,,,, ,,,,,,,,,, ,,, ;,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,,，,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,,, ;,,,,,,,,( ,,,,—,,,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,, ,,;,,,,;,,,, ,,,;, ,,,, ,,,,,,,;,,,, ,,, ,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,;,、,,,,,,,、,(,,,,,,,,,,、,(,,,,,、,(,,,,,;,,,; 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,, ,, , , ,根据其寄主的不同将侵染黄 瓜和甜瓜的丁香假单胞菌分别划分为黄瓜及甜瓜致病变种【,】。我国王叶筠，黎彦等 (,,,,)也报道认为甜瓜细菌性斑点病由丁香假单胞菌甜瓜致病变种即,,,,,,,,,,,,?, ,,,,,,,,、，,,(,,,,,,(,,,,, ,, ,,,,,),,,,,(,,, 染黄瓜〔,,,,】和甜瓜〔,,,,,】的病原菌均为丁香假单胞菌甜瓜致病变种，不存在黄瓜和甜瓜 ,, ,,,,引起【,】?而后人的研究多认为侵 的致病力分化。西瓜果腐病菌(,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,)是危害葫芦科植物的 重要世界性检疫病菌。可侵染西瓜【,,,,,,、南瓜【,,】、棱瓜四、西葫芦【,,,、黄瓜〔,,,等作物。 互塑三查兰堡主兰堡堡苎一——该病菌首先在美国西瓜上发现，后在澳洲和韩国都有报道。,,之,,，其中在美匡【发(生最为严重。据资料记载，本世纪,,年代初，西瓜果腐病在佛洛里达已有发生，但直到,,,,年才首次报道并对其症状进行了描述【”,。,,,,年,,,,,,等,,,〕人在美国佐治亚州亦发现西瓜苗凋萎病，将病原菌鉴定为类产碱假单胞菌西瓜亚种(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,)，但没有报道此菌侵染果实。,副,和,,,,,,,,,,年弘“首次将西瓜果腐病菌鉴定为类产碱假单胞菌西瓜亚种(,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,;,,,,,,,,,,,,,(;,,,,,,,)，但直到,,,,年美国佛洛里达等州西瓜果腐病再度严重发生后，,,,,口… 才把病瓜和病苗联系起来，并指出病瓜和病苗均是西瓜果腐病病害的症状。作者根据 :一: 其病原细菌不产生荧光、,,,(聚,一羟基丁酸)积累、,,”,不生长、单极生一根鞭 毛及对碳源物质的利用等生理生化性状测定结果对其分类地位提出怀疑。,,,,,,,等人 ,,,,根据对西瓜果斑病病原菌的, ,,,…,,,和,,,…,,,分子杂交研究结果，将其 归入噬酸菌属，定名为,;,,,,,,,,,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,(,;,,,, ,, ,,(),,,,,,, ,, ,,(除感 染上述葫芦科植物外，,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,还侵染甜瓜【,,,,,,、哈密瓜【,,】。 使其叶片焦枯，果实上产生凹陷斑点。据报道，我国河北省、山西省【,,】和北京市【,,,等 地都有类似病害发生，但多数研究都认为是由黄瓜角斑病菌侵染引起，目前发表的许 多文献也都认为甜瓜细菌性病害是由黄瓜角斑病菌引起。张荣意、谭志琼等(,,,,)【,叫 对近年来海南省东乐、东方等县西瓜种植区的细菌性病害症状进行了描述，并将病原 菌鉴定为,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,(,;,,,, ,, ,,(),,,,,,, ,, ,,((燕麦噬酸茵西瓜 亚种)，这是,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,在我国发生的第一篇系统报道。新疆哈密 瓜产区目前严重发生的细菌性斑点病病原菌一直是人们有争议的问。金潜、徐兴国 等(,,,,)〔,,】曾将新疆的黄瓜角斑病病菌鉴定为丁香假单胞菌流泪(黄瓜)致病变种(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,(,,;,,,,,,,)，对哈密瓜细菌性病害经初步鉴定后认为也由该菌引起。赵廷昌，孙福在等【”,人对内蒙发生的哈密瓜细菌性病害的病原菌进行了研究，将其病原菌鉴定为燕麦噬酸菌属西瓜皿种(,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(,,,,,,,,)，并推测 ,,新疆普遍发生的哈密瓜细菌性病害也由该病原引起。总之，对于新疆哈密瓜产区广泛发生的哈密瓜细菌性病害的病原菌人们一直众说纷纭，尚缺乏深入、系统的研究。,(,种及种下分类研究现状,(,(,传统分类法 即常规的分类鉴定方法。其主要依据如下四点:其一形态特征，如:菌体形态、大小、细菌运动的观察、鞭毛数量和着生位置、革兰氏染色、芽孢染色; ,一————』～丝旦堕主堕窒生鲞堕～堑望堕童墨塑堕丝塑盛堕堕堕鳖塞墨基堡鱼堕塑塑堕窒其二培养性状，如:菌落形态、大小、颜色等;其三生理生化性状，如菌体生长、对碳素化合物的利用和分解、氮素化合物的分解等;其四生态特性，对植物病原细菌而言，主要是细菌与寄主的关系，是种、亚种和致病变种分类的重要依据口,,。,(,(,数值分类 数值分类是本世纪,,年代后期随着多元方差分析和电子计算机的发展而兴起的一种分类方法。最早由,,,,,,(,,,,年)引入细菌分类中。至今已形成一套完整的理论和技术体系，并获得大量的成果，已成为细菌分类的基本方法之一。目前在丝状真菌和酵母菌分类中亦有初步应用。细菌数值分类以电子计算机技术、多点接种技术和传统分类为基础。所以，可以说数值分类是传统分类方法的延续和发展，简单地说就是用统计学方法根据大量表型性状将有机体进行分群。该方法客观、准确，得到的结果是表观群。表观群的确切分类地位要依据,,,,,,,,杂交分析和,,,,,,,同源性分析来确定【, ,,。,(,(,核酸分子生物学分类 ,，,含量从病原细菌核酸的化学组成这一侧面反应遗传物质的特性，是细菌分类研究中必须测定的项目之一，同一细菌种内菌系间,，,含量变化范围在,,,,,,,,，超过,,,,,,的应视为不同属。,,,(,,,杂交测定菌体间同源性，,,,(,,,,杂交用于测定亲缘关系较远的细菌间的相关性。如,,,,,,,,,依据,,,—,,,杂交及,,,(,,,杂交结果将众多而复杂的,,,,,,,,,,,区分为,组，这,个组近年来进一步被重新命名安排在不同的属中,,,,。如将，，组的洋葱假单胞菌(尸(;,,,;,,)更名为伯克氏菌属(,,,,,,,,,,,)、青枯假单胞菌(,(,,,,,,;,,,,,)更名为青枯伯克氏菌(,(,,,,,,;,,,,,)，将，，，组的燕麦假单胞菌(,(,,,,,,)改为噬酸菌属(,;,,,,,,,,),,,,,,】。,,, ,,,,寡聚核苷酸编目分析，当前在细菌所有的分类单元都已经采用,,,,基因分析，确定其系统发育关系。通用的分析方法有,,,,,,,,的杂交和,,,,,,、,,,,,,,和,,,,,,,的基因序列的比较。用,,,,,,,同源性可构划出真细菌的进化树，然而目前的技术难以测定大量的,,,,,,,序列。,(,(,化学分类例如细胞壁成分分析、脂类分析、细胞蛋白质分析。在细胞蛋白质分析中,,,(聚丙烯酰氨凝胶电泳是目前运用较多的方法，适于种和种下单位的分类鉴定。其次还有,,,梯度凝胶电泳、等密度凝胶电泳等。,(,瓜类细菌性病害发病规律研究现状 国内外研究表明，瓜类细菌性病原菌如黄瓜角斑菌【,,】和西瓜果腐菌【,,川,均可在种子或随病残体在土壤中越冬，以种子带菌为主，且种内、种表均可带菌。土壤中的细 ,一 互塑王查兰堕圭堂生堡兰一——菌不能通过植物的维管束进行系统侵染，靠灌水时流水飞溅传播【,,】。新产生的细菌由风雨、农事操作、昆虫等传播，故发生与雨水的关系密切。大水漫灌有利病害的发展，而控制灌水、降低田间湿度能使病害略有减轻【,鲥。除侵染葫芦科植物外，瓜类病原细菌如,,,,,,,,,,口,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,还侵染茄科的许多植物，将其作为越冬寄主，成为来年病害的初次侵染来源【, ,,，因此，及早发现并剔除田间自生瓜苗和茄科植物的杂草对病害的防治具有一定的作用,,”。,(,瓜类细菌性病害防治现状 目前对瓜类细菌性病害主要采取种植抗病品种、种子处理和农业防病措施，并辅之以化学防治的综防措施。如以广泛发生的黄瓜细菌性角斑菌为例，人们通常采用种子处理(所用药剂一般为甲醛和次氯酸钠等)、加强田管、清除田园以及生育期采用药剂预防保护【,,】等。对于西瓜果腐病菌叫;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,， ,,,,年,,,,,,,等对其进行了抗性品种选育，发现供试所有品种均发病，但感病程度有所不同，因此选用抗性较好的品种进行田间栽培是抑制病害发生的有利手段【,,】。,,,,,,,，,,;,,,,(和,,,,,,,,,(,,,,)的试验证明:种瓜经过,,(,,,的发酵可将种子带菌率由,,,减少到,,以下。之后用，,,,,或，,,,,,,,处理，然后再水洗干燥是消除种子细菌污染的最有效方法，且这种方法不影响种子的发芽【,“。除,,,和,,,,,,外，其它的种子处理药剂还有:,,,,,,,,，，农用链霉素„,们、科博、升汞、抗菌剂“,,,”、新植霉素等【,,,。生育期常采用化学防治与农业手段相结合的措施，所用杀菌剂主要有农用链霉素、新植霉素【,引、琥珀肥酸 铜、,,、甲霜铜、络氨铜等铜制剂。此外据报道加收米【,,,、科博【,,,对抑制病害的发生也有明显作用。目前，通用的农业防治措施均采取避免大水漫灌，降低田间湿度，增加通风透光等手段〔,,,，创造不利病害发生的环境以减轻危害。另据报道土壤紧密度对甜瓜根表微生物种群有较大影响，土壤越紧实，荧光假单胞菌的数量就越高，而细菌总量并不随土壤紧密度的改变而改变(，,,,,，,,,,,, ,,,,,,,,,)(,“，这为运用农业措施防治哈密瓜细菌病害开辟了新途径。当前生防及分子生物学技术广泛用于病害的防治。,,,、,,,,,,,,和,,,,,(,,,,)报道，培植促进生长的根瘤菌，能向黄瓜引入抗细菌性角斑病的系统抗性【,,,，这方面的工作也可在哈密瓜上试验。,,,,,,,,,，,,,,,,等(,,,,)运用,,,(,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,;,,,,)技术找出了能测定,;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,存在的特异性引物和基本实验模板,,,〕。,,,,年,,,;,,,和,,,,,,,采用免疫磁性分离法和,,,技术检测出西瓜种子中的,;,,,,,,船 ,,,,属硕士研究生张昕:新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究,,,,,, ,,,,, ,,护,,,,„, ,,，这为迅速而准确地检测种子是否带菌、并及早防除侵染源，防止其在田间定植作出了贡献。,(与方法,(,菌株的采集与病原细菌的分离培养,(,(,菌株的采集:,,,,年—,,,,年在新疆主要哈密瓜产区及主要供种单位采集具典型症状的病样,,,个，经用平板划线法分离、纯化，共获得,,,个细菌菌株供鉴定用。标准菌株丁香假单胞菌黄瓜致病变种(黄瓜角斑菌),?螅椋 福ǎ校螅濉埃洌铮恚铮睿幔?,,,,,,,,,, ,,,;,,,,,,,)及燕麦噬酸菌西瓜亚种(西瓜果腐菌),,;,,翻;,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(;,,,,,,,)均由中国农科院植保所赠送。,(,(,所用培养基:,,,(肉汁胨)、,,,、,,(酵母无机盐)、, ,(金氏,)、,,,,,,,和,,,,,,,培养基，均按方中达,,,,、任欣正【,,】、,,,,,,,,,,】等所提供的方法配制。,(,(,菌株的分离:采用平板划线法，将采集病样(叶片、茎蔓、果实及种子)用,,升汞表面消毒后无菌水洗三次，放入含少量无菌水的灭菌研钵，将病样研成汁液，取其汁液采用平板划线法分离〔,,,,,】。待有单个菌落长出即转管并于,”,冰箱保存备用。,(,供试菌株的致，胄性测定:选用,,个代表性菌株采用喷雾接菌法进行。将哈密瓜(皇后二号)瓜种经,(,,,,,浸泡,,分钟，清水冲洗后按常规方法催芽播种。待植株长出两片真叶后分别用喷雾法接菌。即将供试菌株于,,平板培养基上,,”,下培养,,小时后，用无菌水稀释至约,, ,,,;,,,,,，用小型塑料喷壶接种到健康哈密瓜幼苗上，直至叶片上有水滴落下为止，待水滴未干迅速用塑料布保湿，使其相对湿度保持在,,,,,,,、平均温度控制在,, ,,左右，,,小时后掀开。观察记录发病情况，每,天一次，,,天结束。,(,病原菌的鉴定:首?雀 菥 湫翁 ?廾 考把趸 富性将其分为两类，然后在每类中各选,,个代表性菌株供,(,(,(,(,(,的各项观察和测定。,(,(,细菌形态观察、革兰氏染色、银盐染色及醋酸铀负染、光镜及电镜观察均按常规方法进行。,(,(,培养性状观察:菌株在,,平板上于,,”,培养,,,(观察菌落形态、颜色和大小。,(,(,最适、最高生长温度测定:将菌株接于酵母无机盐(,,) 培养液中，于,,,,,。, 范围内，每隔,”,,个处理，在恒温水浴锅中通过观察其浑浊度测定最适生长温度，并 一,一 石河子大学硕士学位论文于,,。,:,,,,,定其最高生长温度，以不接菌为对照。,(,(,耐盐性测定:在,,培养液中分别加入灭菌的,,;,溶液，使其浓度分别为,,、,,、,,、,,、,,、,,、,,、,,、,,、,,,,,个浓度，接菌后振荡培养，以不加,,;,为对照。,(,(,葡萄糖氧化发酵测定:用,,,,,,,培养基每菌株针刺接菌,管，两管用,,琼脂封管，两管不用琼脂封管，以不接菌作对照，在,,。,培养,,内，观察试管内培养基的颜色变化。,(,(,烟草过敏反应:采用注射法。将供试菌株在未开花的普通烟真叶上进行过敏性测定，菌液浓度为,,,;,,,,,，并以无菌水为对照，置于,,。,、湿度,,,的人工气候箱中，于,,,后观察结果。,(,(,冰核活性测定:按常规方法，将上样的铝纸盒先后放入(,(,?和一,。,的,,高精度恒温水浴槽中，以无菌水做对照，三分钟后观察其结冰情况。,(,(,马铃薯软腐试验:将无病新鲜马铃薯片经灭菌在凹槽内接种新鲜培养物，每个菌株,个重复，以无菌水作对照，,,,检查结果。,(,(,病原细菌的生化性状【,,】,(,(,(,果聚糖形成试验:以蔗糖加入普通培养基(,,,)，以加葡萄糖为对照，接菌后比较观察菌株的生长状况。,(,(,(,氧化酶测定:用,,四甲基对苯二胺盐酸盐滴湿滤纸，用玻棒接菌苔于纸上观察反应。,(,(,(,精氨酸双水解试验:,,,,,,,培养基针刺接种细菌后，用,,琼脂封管，同时以不接菌为对照，,,,培养观察颜色变化【,,】。,(,(,(,七叶苷水解试验:采用培养基斜面接菌，观察培养基颜色变化。,(,(,(,接触酶与明胶液化试验:将,,,,,，氧水滴在菌苔上，观察气泡产生情况;针刺接种含,,,明胶的肉汁胨培养基，适温下观察其液化情况，以未接菌作对照。,?,(,(,硝酸盐还原反应及脱氮作用:在半固体培养基试管中针刺接菌,管，,管在培养基上加,,琼脂,,,封管，,,”,,培养两周，观察脱氮作用。另外,管未用琼脂封管的分别于,、,、,,后加入,,,,,,(,,,,,,,,试剂，观察硝酸盐的还原。,(,(,(,聚一,一多羟基丁酸盐积累试验(,,,积累试验):供试样品经苏丹黑染色后，采用相差显微镜技术检测“聚,,”颗粒。具体参见,,,,,,,,,,,等人采用方法。 ,,,,届硕士研究生张昕:新疆哈密瓜细菌性斑点病病原鉴定及其综合防治的研究,(,(,(,对碳源的利用:将经,,,。,，,,分钟灭菌的,,,的,一酒石酸钠、,(,酒石酸钠、乳酸钠及抽滤灭菌的甘露醇、山梨醇、赤藓醇、肌醇、高丝氨酸、海藻糖、葫芦巴碱、,一丙氨酸、甜菜碱、邻氨基苯甲酸母液分别加入无菌的,,,培养液中，使其最终浓度为,,，,,。,下培养,,一,,证明无杂菌后接种细菌，每个菌株接,管，对照不接菌，观察培养液颜色变化情况。,(,(,,寄主范围测定,(,(,,(,供试植物共,,种:哈密瓜(皇后二号)、西瓜(红优二号)、黄瓜(新泰密刺)、南瓜(日本南瓜)、丝瓜(春喜香丝瓜)、苦瓜(新穗一号)、葫芦瓜(早青,,,,)、西红柿(西粉三号)、辣椒(四平头)、打瓜、香瓜、瓠瓜(四川省绵阳市绿川蔬菜研究所)。,(,(,,(,供试菌株:病原鉴定后，从两类供试菌株中各选出,个代表性菌株,,,、,,,及,,,,、,,分别进行寄.