蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的治疗作用

蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的治疗作用 蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小 鼠的治疗作用 ? l64?中国寄生虫学与寄生虫病杂志2004年6月第22卷第3期 ChinJParasitolParasitDisJun.2004,Vo1.22,No.3:164—166 文章编号:1000.7423(2004)-03-0164-03 蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏 疟原虫小鼠的治疗作用 郭俭,倪奕昌,吴嘉彤,王琴美 【论着】 【摘要】目的研究蒿甲醚与瑞香素伍用(A+D)对感染伯氏疟原虫ANKA株小鼠的疗效及其 联合作用方式: 方法按”四天抑制法”d感染,d,d给药,每天1次,d涂薄血膜检查,并计算d减虫率及各药丰 数有效置(ED), 用等效应图解法A+D的合并作用:结果蒿甲醚0,4mg/(kg?d)×4d的d减虫率与对照组相 比差异无显着 性;[A0,4mg/(kg?d)+D7.7mg/(kg?d)]×4d的抗疟效果提高,与对照组相比差异有显着性 (P<0.05)A+D各 组的ED均低于单用药组;不同配伍比例的R值皆大于0.4,小于2.7(0.4<R<2.7).结论蒿 甲醚与瑞香素伍用 治疗感染伯氏疟原虫小鼠能提高抗疟疗效,且两药合并呈相加作用. 【关键词】蒿甲醚;瑞香素;伯氏疟原虫;药物疗法,联合 中图分类号:R382.3I文献标识码:A AdditiveTherapeuticEffect0faCombinationofArtemether andDaphnetinagainstP/asmodiumbergheiinMice GUOJian.NIYi—chang,WUJia—tong,WANGQin—mei (InstituteofParasiticD~eases,ChineseCenterforDiseaseControlandPrevention,Shanghai200025,C hina) 【Abstract】 ObjectiveToinvestigatethetherapeuticeffectofacombinationofartemetheranddaphnetinagainstPlasm odi- UmbergheiANKAstraininmice.MethodsGroupsofP.bergheiinfectedmiceweretreatedwithvariouso raldosesofartemether anddaphnetinaccordingto”4-daysuppressassay”.Thinbloodsmearsweremadeonthefifthdayafterino culationofparasitesand theparasitemiareductionratewascalculated.TheEDnvaluesobtainedwereplottedonisobolograms.A combinedactionofar— temetheranddaphnetinWasassessed,ResultsArtemether0.4mg/(kg?d)×4dexhibitednodetectableant imalarialeffect, whileartemether0.4mg/(kg?d)×4dcombinedwithdaphnetin7.7mg/kg.d×4dshowedpotentantiparasi leefficacy.TheED50s ofartemetherincombinationwithdaphnetinwerelowerthanthatofsingleartemetherordaphnetin.The R—valueswerehigherthan 0.4.butlowerthan2.7.ConclusionThecombinationofartemetherwithdaphnetinshowedanadditiveant iparasileeffect. 【Keywords】Artemether;Daphnetin;P.berghei;DrugTherapy,Combination Supposedb.ytheArtemisininScienceFoundationofChina(200210) WHOCollaboratingCentreforMalaria.Sc’histosomiasisandFilariasis 近年来恶性疟原虫对青蒿素类药物的敏感性在缓 慢下降.为保护现有青蒿素类药物,延缓其抗药 性的产生,研究开发蒿甲醚复方是一条有效途径. 瑞香素来源于中草药,是一类新抗疟药,研究明瑞香 素在体内,体外均具有一定的杀裂殖体活性.瑞香 素与小剂量伯氨喹合用具有抗红外期疟原虫作用. 本文旨在了解蒿甲醚与瑞香素伍用的治疗效果,为进 一 步的复方研究提供线索. 与方法 1药物 蒿甲醚(A)由云南昆明制药厂提供.瑞香素(D) 由吉林省长春市春城制药厂生产,经重结晶提纯后使 用两药均用1%西黄蓍胶配成混悬液. 基金项目:青蒿素科技基金资助课题(200210) 作者单位:中国疾病预防控制中心寄生虫病预防控制所,世界卫生组织 疟疾,血吸虫病和丝虫病合作中心,上海200025 2疟原虫种 对氯喹敏感的伯氏疟原虫ANKA株由英国伦敦 卫生与热带医学院赠送,本所保种. 3实验动物 清洁级昆明小鼠,体重20?2g,雌雄各半,购自上 海西普尔一必凯实验动物有限公司(沪动合证字153 号). 4感染方法和给药途径 由感染伯氏疟原虫ANKA株的传代鼠中以每鼠 0.2ml的0.5%感染血(含4.5X10.感染红细胞)腹 腔转种,按世界卫生组织(WHO)规定的”四天抑制性 试验”l6,即感染后当天(d.)灌胃给药,连续4d.停 药后取尾静脉血作薄血膜,吉氏染色后镜检. 5药物配伍时ED.的测定和联合作用特征的评价 实验小鼠每组8只,随机分成溶剂对照组,单药组 中国寄生虫学与寄生虫病杂志2004年6月第22卷第3期 ChinJParasitolParasitDisJun.2004,Vo1.22,No.3:164,166?l65? 及伍用药组.各处理组d每1000个红细胞中感染 疟原虫的红细胞数与对照组比较,采用样本均数比较 的双侧t检验分析.用Finney法计算各药的半数有效 量(ED.)及其95%可信限,用等效应图解法和比值 法::分析药物的联合作用特征. 结果 1蒿甲醚与瑞香素伍用(A+D)对感染伯氏疟原虫 ANKA株小鼠的疗效 蒿甲醚0.4rng/(kg?d)×4d对感染伯氏疟原虫 小鼠无明显治疗效果,d减虫率与对照组比较差异无 显着性(P>0.05).蒿甲醚0.4rng/(kg?d)×4d与 瑞香素7.7rng/(kg?d)×4d伍用,d减虫率与对照 组比较差异有显着性(P<0.05).蒿甲醚2.4rng/(kg ? d)×4d+瑞香素7.7rng/(kg?d)×4d组与对照 组比较,d减虫率明显提高,其差异有显着性(P<0. 01);与单用蒿甲醚2.4rng/(kg?d)×4d组比较,d 减虫率略有增加,差异无显着性(P>0.05)(表1)? 2蒿甲醚和瑞香素配伍ED.的测定和作用特征评价 A+D给药后d血检,测得的ED及其95%可信 限,伍用组小鼠的减虫率普遍高于同样剂量的单药组, 且随着剂量加大,这种差异更为突出.两药伍用后的 ED?均低于单药组(表2).伍用组的ED都分布在等 效线的95%可信区间内(图1).另用比值法求得蒿甲 醚与瑞香素伍用比例的R值(预期ED/实测ED)皆 大于0.4,小于2.7(0.4<R<2.7),属相加作用范围(表 3),因此,蒿甲醚与瑞香素伍用呈相加作用 表1蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的疗效 Table1ThetherapeuticeffectofcombinationofartemetheranddaphnetinagainstPlasmodiumbergheii nmice 注:与对照组比较,P<0.05,与对照组比较,P<0.005 Note:P<005:P<0.005.comparedwithcontrol 表2蒿甲醚与瑞香素伍用对感染伯氏疟原虫小鼠的d减虫率和ED5.(%) Table2ThereductionrateofparasitemiaandED50ofartemetherincombinationwithdaphnetinagainstP lasmodiumbergheiinmice(%) ? 166?中国寄生虫学与寄生虫病杂志2004年6月第22卷第3期ChinJParasitolParasitDisJun.2004,Vo1.22,No.3:164—166 配伍比例(蒿甲醚:瑞香素)混合物实测.合并作用评价一 Ratio-Artemether:DaphnetinEDso(ms/kg)”Combinedaction 两药合并为相加作用 Note:}R:AnticipatedED5o/ActualED50 standardofSmithH.F 一 4 3 9t-. 茸 尝1《 0 键O51Ol52O 瑞香素Daphnetx~(~g/kg) 系列1(——)为两药单用时的ED50系列2(……一),3(一??一)为两 药单用时ED.的95%可信区间系列4(O)为瑞香素与不同剂量 的蒿甲是何时的EDso系列5(})为蒿甲醚与不同剂量的瑞香素 配伍时的ED Series1(——)ED50ofsingleartemetheranddaphnetinseries2 (……一)3(一’’一)95%confidencelimitsofED50ofsinglear- temetheranddaphnetinseries4(O)ED50ofdaphnetinincorn— binationwithvariousdosesofartemetherseries5(})EDsoof artemetherincombinationwithvariousdosesofdaphnetin 图1蒿甲醚,瑞香素配伍对感染伯氏疟原虫小鼠的作用 Fig.1Thecombinedeffectofartemetheranddaphnetin againstbergheiinmice 讨论 低剂量的A+D对伯氏疟原虫疗效优于单药组, 表明A+D可适当减少蒿甲醚的用量,从而有利于延 缓其抗性的产生.当蒿甲醚剂量增至6.0rag/(kg?d) ×4d或瑞香素增至19.2m(kg?d)×4d时,A+D 的减虫效果与单药组相当.结果提示,在A+D 时,恰当的配比对于提高蒿甲醚疗效并延缓其抗性产 生具有十分重要的意义. 等效应图解法是国内外抗疟药联合应用研究常用 的方法.在等效应图中,对感染伯氏疟原虫ANKA株 的小鼠,配伍组的ED如全部落在等效线的95%可信区 间内,故判定两药配伍时对伯氏疟原虫ANKA株的抑 制作用为相加作用.比值法也是确定两药联合作用效 果的方法之一.本实验中A+D比例不同,计算所 得的R值随瑞香素所占比例的增多而增大,表明两药 配伍时瑞香素的比例对疗效影响较大.至于瑞香素的 比例与R值的相关关系以及两药配伍时的最佳配比 尚有待深入研究. WHO在2001年11月的”研发抗疟新药上海会 议”建议,”采用不同作用机制的抗疟新药联用或复方 治疗,是抗疟化疗中达到提高疗效和延缓抗性产生的 有效途径.”目前认为蒿甲醚的抗疟作用机制与铁离 子或血红素催化的内过氧桥的断裂及其随后的自由基 反应有关.而瑞香素是一种温和的铁螯合刺,在治 疗感染伯氏疟原虫小鼠时对小鼠血清铁离子水平无明 显影响.进一步的研究显示,瑞香素很可能是通过螯 合疟原虫过氧化物歧化酶(SOD)活性中心的铁离子来 抑制SOD的活性,从而影响疟原虫的生存.SOD与 DNA合成的关键酶之一,核糖核苷酸还原酶等含铁生 物大分子很可能是瑞香素抗疟作用的靶分子.因 此,蒿甲醚与瑞香素的抗疟作用机制完全不同,理论上 可以组合成配伍或复方.本实验结果证实二者配伍具 有相加作用,研制成复方是切实可行的. 参考文献 [1]杨恒林,刘德全,黄开国,等.云南省恶性疟原虫对青蒿素类药物 及咯萘啶与氯喹敏感性的体外测定[J],中国寄生虫学与寄生虫病杂 志,1997,15:292. 2IYangHL,LiuDQ,HuangKG.eta1.InvitroresponseofPmodi一 “mfalciparumontheChina—Vietnambordertonineantimalarials[J]. SoutheastAsianJTropMedPubHlth,1995,26:397. [3]孙志伟,单承启,李国富,等.复方蒿甲醚和本芴醇胶丸治疗恶性 疟疗效对比[J].实用寄生虫病杂志,1999,7:49—51. [4]WangQM,NiYC,XuYQ,eta1.Theschizontccidalactivityof daphnetinagainstmalariaparasitesinvitroandinvivo[J].ChinJParaasitol &ParasitDis.2000.18:204—206. [5]刘云光,王琴美,徐月琴,等.瑞香素抗红外期疟原虫作用的研究 【J].中国寄生虫学与寄生虫病杂志,2001,19:30-32. [6]PetersW,PortusJH,RobinsonBL.Thechemotherapyofrodentma— laria[J].AnnTropMedParasitParasit,1975,69:155-160. 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