卫生毒理学专业优秀论文 喹诺酮类药物氧氟沙星致关节软骨细胞损伤的机制研究

卫生毒理学专业优秀论文 喹诺酮类药物氧氟沙星致关节软骨细胞损伤的机制研究 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 卫生毒理学专业优秀论文 喹诺酮类药物氧氟沙星致关节软骨细胞 损伤的机制研究 关键词:氧氟沙星 关节软骨细胞 损伤机制 线粒体凋亡 摘要:本研究以喹诺酮类代药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保 型胶原，而?持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶 (Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 正文内容 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨 以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细细胞相似。 胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶 (Poly(ADP分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段-ribose)polymerase，PARP) 形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2) bound protein 2，Grb 2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生 型胶原，而?型胶原和理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的? 蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓 -ribose)polymerase，度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADPPARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节 -PCR、软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RTWestern blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且态和功能; 存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的 -8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明软骨细胞凋亡主要是通过Caspase 了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响 8的募了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及 -8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，线粒体膜电位降低，而Caspase 氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明 -8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase 而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激 8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、活;Caspase- Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的 -8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明软骨细胞凋亡主要是通过Caspase 了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨 、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对细胞凋亡; 4 Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、 、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑Caspase-8 制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外， -2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl 而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而? 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phospho-extracellular signal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小 促分裂原活化蛋白时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨细胞凋亡; 4、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对 pho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phos 达的影响。 Caspase-9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激 8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、活;Caspase- Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑 -9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙制Caspase 星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 本研究以喹诺酮类代表药物氧氟沙星为研究对象，以藻酸微囊包被立体培养的幼龄兔关节软骨细胞为试验模型，从细胞凋亡、β1整合素功能、ERK/MAPK信号通路以及凋亡发生所涉及的信号通路等几个方面来深入探讨QNs致幼龄动物关节软骨损伤的可能机制。通过利用MTT试验、荧光双染凋亡定量试验、RT-PCR、Western blot、免疫共沉淀试验、DMB试验以及凋亡酶活性试验等，得到如下结果: 1、单层培养和三维微囊培养软骨细胞的形态和功能比较。单层培养的软 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 骨细胞呈现扁平、伸长的纤维状形态;而三维微囊培养的软骨细胞则保持正常生理状态下的球形形态。单层培养软骨细胞表达高水平的?型胶原，而?型胶原和蛋白多糖则表达很少;三维微囊培养软骨细胞的这些特征性产物表达则正好与单层培养相反，这些立体培养的软骨细胞表达高水平的?型胶原和蛋白多糖，而?型胶原表达量低。其表达模式与代表生理状态下软骨状态的组织块软骨细胞相似。以上数据表明，三维微囊培养的软骨细胞更能体现生理状态下软骨细胞的形态和功能; 2、氧氟沙星以时间和浓度依赖的方式使软骨细胞存活率下降，且存活率的下降主要是由凋亡所致。此外，10μg/ml的氧氟沙星(与临床相关的浓度)可以明显诱导多聚二磷酸腺苷核糖酸多聚酶(Poly(ADP-ribose)polymerase，PARP)分解，caspase-3激活以及DNA梯度片段形成，这些凋亡特征性指标进一步确证了凋亡的发生。因此，以上结果表明，氧氟沙星主要是通过凋亡的方式致关节软骨细胞损伤; 3、10 μg/ml的氧氟沙星在作用软骨细胞48时后使β1 -extracellular 整合素受体、磷酸化的细胞外信号调控激酶1/2(phosphosignal-regulatedkinase 1/2，phospho-ERK1/2)以及生长因子受体结合蛋白2(Growth factotreceptot-bound protein 2，Grb 2)表达显著降低。但是却没有引起β1整合素的mRNA表达改变。此外，氧氟沙星使β1整合素受体不与激活的细胞内信号蛋白相互作用。在补充足够镁离子的条件下，氧氟沙星不能诱导软骨细胞凋亡以及使β1整合素受体表达下降。以上结果表明，从给药后48小时开始，氧氟沙星通过影响β1整合素受体功能，抑制ERK/促分裂原活化蛋白激酶(ERK/Mitogen-activated protein kinase，ERK/MAPK)信号通路而引起软骨 、10 μg/ml的氧氟沙星可以激活凋亡酶caspase-8，但是对细胞凋亡; 4 Caspase-8的抑制不影响氧氟沙星对phospho-ERK1/2和β1整合素受体蛋白表 9特异性抑制剂zLEHD-fmk和Caspase-8特异性抑制剂达的影响。 Caspase- zIETD-fmk以浓度依赖的方式减弱氧氟沙星诱导的软骨细胞凋亡和Caspase-3激活;Caspase-8特异性抑制剂zIETD-fmk明显抑制氧氟沙星诱导的Caspase-9、Caspase-8、Caspase-3活化，而Caspase-9特异性抑制剂zLEHF-fmk则仅仅抑制Caspase-9和Caspase-3的活化。以上结果表明，在作用48小时后，氧氟沙星通过影响β 1整合素受体功能而激活Caspase-8，诱导软骨细胞凋亡; 5、10 μg/ml氧氟沙星也以浓度依赖的方式使细胞色素c从线粒体转移到胞浆以及线粒体膜电位降低，而Caspase-8特异性抑制剂则可以完全抑制以上效应。此外，氧氟沙星以浓度和时间依赖的方式使Bcl-2家族蛋白Bax、tBid和p53表达增加，而VDAC、Bcl-2和Bcl-xL的表达则不受影响。以上结果表明，氧氟沙星引起的软骨细胞凋亡主要是通过Caspase-8依赖的线粒体通路。 本研究的结果表明了氧氟沙星主要是通过依赖于Caspase-8的线粒体凋亡通路诱导软骨细胞凋亡而致关节软骨损伤;而凋亡的发生是由于β1整合素的功能改变所致，与β1整合素的表达无关。初步推测其机制可能为:在氧氟沙星作用48小时后，由于氧氟沙星使β1整合素受体的构象改变，不能与胞外相应的配体结合，从而影响了其正常功能。因此，未结合配体的整合素受体聚集，随后引起Caspase-8的募集以及ERK/MAPK信号通路的抑制，最后诱导软骨细胞凋亡。以上这些结论为首次报道，它初步阐明了QNs软骨毒性不良反应的根源，将有助于对其他QNs的软骨毒性研究提供理论基础，在对正确评价其在儿童中的应用、指导对此类药物的结构改造以及防治其临床毒性等方面匀具有重要意义。 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 《《《特别提醒》》》:正文内容由PDF文件转码生成，如您电脑未有相应转换码，则无法显示正文内容，请您下载相应软件，下载地址为 。如还不能显示，可以联系我q q 1627550258 ，提供原格式文档。我们还可提供代笔服务，价格优惠，服务周到，包您通过。 " 垐垯櫃 换烫梯葺铑? endstream endobj 2 x滌甸??*U躆? 跦??ǜ?l, 墀VGi?o嫅#^4K錶c&伣嘰呐q 虻U節鉡c姥 ? ?BL偤7.X 哖?]驳疗" g讍` l/<5蔍`7sQ\I vs疖 ?S [J%J v I雓1傀 7鑥 伍妰遠Y 魥 靤 /W鐼E 霯q聊湝 ECu?knb?.:?澍羈 7?坋:;俐hEan[2 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 P6?!八帊/=櫕貵`Wp?U脞姦%?qj ?颬 儼噃I V 壂 G邊??Vг忣鏕裚?靈模? ?慞 擭昄X?;萕屄P,' 枍U霩R嚵蝆RC`珵墂锬襵")焟滫?ob#噡滴覇羘幥d Peブt?Pf臕?m稅盠?恁 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 v_關lm ,OMK?^'vOp牯V睟艶頛4. ?鮠4l 【精品】毕业论文 优秀毕业论文 本科论文 专业学术论文 参考文献资料 O??鼎? #濔%滷?腵鳐 #C?另 v|j'珬 i|葙K 羇胞Tt?"1鱳忞1? ?#1? ?# 谺? 豣? 豅? 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