HIV筛查实验室标准操作程序(模板)

HIV筛查实验室标准操作程序(模板) HIV筛查实验室作业指导书 ***医院 文件编号:SXX**YY- 01-0 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:目录 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 标题 所在页面 HIV样品接收、登记和处理 P3 HIV抗体筛查检测和步骤 P4 雷勃 MK3酶标仪使用 P5,P6 雷勃 MK3酶标仪维护 P7 雷勃 MK2洗板机使用 P8,P10 雷勃 MK2洗板机维护 P11 HIV筛查实验室质量控制 P12,P17 HIV抗体结果解释与报告 P18 HIV筛查实验室保密程序 P19 HIV检测数据的记录与保存 P20,P21 HIV追踪与处理 P22,P23 废弃物处理和消毒 P24 HIV筛查实验室安全防护 P25 420X电热恒温培养箱 P26 低速离心机 P27,P28 HIV筛查检测操作规程及安全防护制度 P29,P40 附件:样品登记本作业指导书 血清库登记本作业指导书 废弃物处理登记本作业指导书 仪器设备使用登记本作业指导书 检测人员健康档案 意外事故登记本作业指导书 设备(冰箱、恒温箱)温度登记本作业指导书 差错登记本作业指导书 文件编号:SXX**YY- 01,0 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:前言 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1 为加强艾滋病检测工作的规范化、科学化管理和质量控制，确保检测结果的准确性和可靠性，保证艾滋病检测实验室安全，及时有效地发现HIV感染者和上报疫情，参照《全国艾滋病检测技术规范》【2009】版，结合我县疾病控制中心的实际情况，特制定本作业指导书。 本作业指导书包括以下内容:样品的采集、接收、登记和处理;HIV抗体检测的方法和程序;仪器的操作维护和校正;结果的解释与报告;实验室的清理与消毒;保密制度;追踪与处理;HIV抗体筛查实验室检测原始记录;HIV抗体筛查报告;HIV抗体复检化验单;HIV抗体检测数季报表等。 本作业指导书由院办公室张**起草、检验科主任卢**签发之日起执行。 本作业指导书为HIV抗体筛查实验室作业指导书，仅供本中心内部使用。 ***医院 2008,07,01 文件编号:SXX**YY- 01,01 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV样品接收、登记和处理 2 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的 确保HIV样品安全有效地到达实验室。 2. 适用范围 本作业指导书适用于HIV实验室安全地接收样品。 3. 职责 HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。 4. 步骤 4.1 HIV样品的包裹必须在具有处理感染源设备的实验室内由经过培训的、穿戴防护衣的工作人员打开，用后的包裹应进行消毒。 4.2 核对样品与送检单，检查样品管有无破损和溢漏。如发现溢漏应立即将尚存留的样品移出，对样品管和盛器消毒，同时报告有关领导和专家。 4.3 检查样品的状况，记录有无严重溶血、微生物污染、血脂过多以及黄疸等情况。如果污染过重或者认为样品不能被接受，则应将样品安全废弃。并要将样品情况立即通知送样人。 4.4 打开标本容器时要小心，以防内容物泼溅。样品处理时若内容物有可能溅出，则应在生物安全柜中戴手套进行。同时应戴口罩、防护眼镜，以防皮肤或粘膜污染。 4.5 接收样品时应对样品进行登记。 4.6 用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20?以下，短期(1 周)内进行检测的样品可存放于2-8? 文件编号:SXX**YY- 01,02 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV抗体筛查检测方法和步骤 3 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的 规范HIV抗体筛查检测方法和步骤，确保检测结果准确。 2. 适用范围 本作业指导书适用于HIV抗体检测。 3. 职责 HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。 2. 内容: 4.1 试验前仪器、材料的准备 4.1.1 恒温培养箱 酶标仪 微量振荡器 洗板机 定时钟 4.1.2 HIV抗体检测ELISA试剂盒 4.1.3 0,50ul，50,250ul移液器各一把，配备相应干燥洁净吸嘴1个/人份 4.1.4 500ml烧杯1只，500ml量筒一个 4.2 试验开始前将试剂和样品放置在室温(18,23?) 4.3 试验步骤: 4.3.1 检查培养箱温度是否调至37 ?(见培养箱使用 ) 4.3.2检查试剂盒是否在有效期内使用,检查试剂文号、批号、有无卫生部批检合格封签。 4.3.3 烧杯内装5000mg/l次氯酸钠消毒液。 4.3.4 从试剂盒中取出反应板，按试剂盒内说明书操作及判断结果。洗板用洗板机操作具体见洗板机操作 注意事项:结果判断用酶标仪操作具体见酶标仪操作 。 文件编号:SXX**YY- 01,03 ***医院 第 1 页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK3酶标仪使用 编制依据:雷勃 MK3酶标仪使用说明书 4 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的:维护酶标仪的正常工作，规范酶标仪的使用与保养。 2. 适用范围:适用于雷勃 MK2酶标仪 3. 职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行。 4. 仪器操作: 4.1 开机:将酶标仪后部的电源开关打开，仪器自检完毕显示“准备就绪„”，如果联机电脑是开机状态，此时酶标仪显示“正在由计算机控制”，酶标仪开机完毕。 4.2 点击电脑桌面上“酶免”图标选择用户名，输入密码，进入酶标仪控制软件。 4.3 酶标仪软件操作 4.3.1 首次使用应在“工具” ?“测试项目”?“增加”中填写相应的“代码”和“名称”均为“HIV”，“处理方法”设置为“定性计算1”，然后按“确认”。并在“工具” ?“试剂”?“增加”中填写相应的试剂信息(批号等信息)，然后按“确认”。 4.3.2 依次选择“常用设置”?“测量规划” ?“样本设置”中选择需要的参数，在“测量试剂”中选择合适的试剂，最后点设置，依次类推。并在“测量1”对波长进行设置，选“450NM”。 4.3.3 需要插入步骤的选“选项” ?“插入步骤”?“震动步骤”，根据需要选择。 4.3.4 板子布局 根据试验中板子的布局,先选定所要确定的标本类型，然后在对应的板孔位置左键点击，例如A1孔是空白，先选择标本类型为空白，再左键点击A1孔就可以了，定好的布局在试剂盒不变的情况下可以存为模版，以后可以在模版的下拉框直接选择就可以使用了，确定板子的布局与实际情况相符，将板子放在样品盘上，可以点击“测量” 文件编号:SXX**YY- 01,03 ***医院 第 2 页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK3酶标仪使用 编制依据:雷勃 MK3酶标仪使用说明书 5 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 酶标仪会自动测量各孔的SOD值并判断结果。 4.3.5 样品的录入 在“常用设置” ?“测试样本”可以录入对应标本的性别、年龄、送检科室、样品来源、送检医生、标本等。 结果查询及打印 在“文件” ?“打开”中可以根据日期和酶标板号批量打印报告。 4.5 质量控制 5.1 质控血清的设定 在工具?质控维护中输入质控血清的靶值、SD值、批号、浓度、测量方法等信息。 6 注意事项 6.1 保养 6.1.21 为保证仪器持续的稳定性和准确性，应避免干扰光学系统的任何部件。光路调校错误会影响测量结果。 6.1.2保持光学系统的清洁，以确保正常功能和结果的准确，应避免任何液体流入仪器内部，并防尘、防止其它外源性物资，不要用手指摸透镜表面、虑光镜、光电监测器。 6.1.3仪器的常规清洁应该关闭仪器并拔掉插头，使用一次性手套，用一次性擦布沾水或温和去污剂，清洁仪器外部、导轨和板架。 6.1.4 仪器的工作环境温度应在10,30?，相对湿度不超过80,，存储环境温度应该在0,40?，仪器应放在没有让阳光直晒、表面平坦且空间足够的工作台上。 6.2 仪器使用完毕要及时关机。 文件编号:SXX**YY- 01,04 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK3酶标仪维护 编制依据:雷勃 MK3酶标仪使用说明书 6 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 文件编号:SXX**YY- 01,05 ***医院 第 1 页 共 3 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK2洗板机使用 编制依据:仪器使用说明书 7 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的:维护洗板机的正常工作，规范洗板机的使用与保养。 2. 适用范围:雷勃 MK2洗板机 3. 职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4. 操作步骤 4.1设置 在关机状态下，按照试剂盒说明书设置洗涤卡程序，并将设置好程序的卡插入卡位。 4.2开机 打开仪器电源开关，等仪器初始化结束后仪器显示就绪，可以进行下一步操作。 4.3 冲洗 第一次按“Prime”键等待仪器自检完成。 4.4 运行 根据酶标板的数量设置洗板的行数(数字键代表酶标板的行数) ，放置好酶标板后，按“Start”按钮开始洗板。 4.5 关机 4.5.1 日常关机 最后一次洗板结束后将电源开关置于OFF位。 文件编号:SXX**YY- 01,05 ***医院 第 1 页 共 3 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK2洗板机使用 编制依据:仪器使用说明书 8 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 4.5.2 长期关机 将长时间不使用洗板机时，先用蒸馏水冲洗一遍整个系统，再进行日常关机;保持液体瓶干燥，以免清洗液中的缓冲盐类结晶而堵塞清洗头。 3. 仪器使用注意事项 6.1 操作前 必须严格按照仪器安装说明安装仪器，保证正确连接管路，以免出现渗漏。洗板机长期不用后再度使用时，需要预洗整个系统四次。 6.2操作中 6.2.1 按下运行键前，需确认: ? 已经装上正确清洗头。 ? 酶标板已正确放置 ? 已选择适当的程序及参数值。 6.2.2 应及时倾倒废液。 6.2.3 如果仪器表面有生物危险物资污染，用中性消毒液清洁。 6.2.4 保持滑道的清洁干燥，避免堵塞;若有液体溅出，及时擦干。 文件编号:SXX**YY- 01,05 ***医院 第 1 页 共 3 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK2洗板机使用 编制依据:仪器使用说明书 9 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 6.2.5 在洗板过程中，如需仪器停止运行，请按键盘上的复位键，不要用手或物体强制仪器停止运行。 4. 仪器的保养 安放和运行仪器时避免阳光直射，且避开热源，以免影响仪器寿命。 经常用软布和中性清洗液擦洗仪器;仪器使用时及时擦去泼在滑道上的液体，以免造成机械堵塞。 文件编号:SXX**YY- 01,06 ***医院 第 1 页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 标题:雷勃 MK2洗板机维护 编制依据:洗板机规程 10 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** ? 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第 1 页 共 6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 11 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的: 建立艾滋病实验室质量控制,保证HIV实验室检验结果的准确性。 2(适用范围:HIV实验室所有样品筛查和复查的质量控制。 3. HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4 质量控制(QC) 4.1 质控血清的制备和保存(以ELISA 试验检测HIV 抗体为例) 在每次实验中必须包含有内部对照质控血清和外部对照质控血清。 内部对照质控血清指试剂盒内提供的阳性和阴性对照血清。内部对照是质量控制的基础。每一次检测必须使用内部对照，而且只能在同批号的试剂盒中使用。 外部对照质控血清是为了监控检测的重复性和稳定性以及试剂盒批间或孔间差异而由实验室设置的一套对照血清，包括强阳性、弱阳性和阴性对照血清。也可以只设置一个弱阳性对照，以该试剂盒临界值(Cut-off)的2-3 倍为宜。 4.1.1 外部对照质控血清的制备 HIV 抗体阳性和阴性血清，56? 30min 灭活，3000r/min，离心15min。弱阳性对照可以用HIV 抗体阴性血清梯度稀释HIV 抗体强阳性血清并标定后得到。按一年使用量配制(可加入不影响检测结果的防腐剂)用0.2μm 滤膜过滤除菌。 4.1.2 外部对照质控血清的保存 4.1.2.1 按一周实验用量分装、分类、标记、封口、-20?冻存于非自动除霜冰箱中。 4.1.2.2 外部对照血清不可反复冻融，一旦融化后应该存放28?，供一周内使用。 4.1.3 外部对照质控血清的使用 每一次实验必须使用外部对照质控血清，以便监控实验的重复性和稳定性。同时可以了解各批试剂盒的批间或孔间差异，绘制质量控制图。 4.1.4 外部对照质控物的质量要求 质控物的管间或瓶间变异必须小于监测系统预期的变异(cv,20%,，并且质控物的成分应在稳定状态中。质控物应无菌，并不含有影响ELISA 反应的防腐剂。 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第2 页 共6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 12 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 4.2 质控图的建立及应用(以ELISA 试验检测HIV 抗体为例) 最常用的质控图是Levey-Jennings 质控图，使用累计和技术或趋势技术的图形可提供系统偏移和漂移的状况。 4.2.1 建立质控图参数 外部对照质控物的平均值和标准差应建立在实验室常规使用方法对质控物重复测定的基础上。一般采用在不同批次检测取得至少20 个数据;如果仅做少量批次的检测，也至少做5 个批次的检测，每个批次中不少于4 个质控物测定结果，以建立一个临时性的平均值和标准差，当达到20 批次数据后，替代临时性的平均值和标准差。 4.2.1.1 算术平均值(): 代表一组S/CO 值的平均值。为了统计学上有显著性意义，应该采用至少20 次(天)所测得的外部对照质控血清S/CO 值结果计算出平均值。 4.2.1.2 标准差(s):是描述样品与均数之间离散程度的一个指标，是与对照质控血清S/CO 值均值有关的预期范围。一组S/CO 值的标准差以s 表示。 4.2.1.3 变异系数(cv):是反映各次S/CO 值相对于均值离散程度的一个指标，可以用来衡量检测的重复性或精密度。 4.2.1.4 控制限:由实验室根据对质控物检测结果的平均值和标准差来确定。例如12S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减2 个标准差;13S 质控规则的控制限为外部对照S/CO 平均值加减3 个标准差。 4.2.2 绘制质控图 质控图是把检测数据与已确定的(计算出的)“控制限”进行比较的图，包含一条中心横线和其上、下两条平行的控制线，并按时间顺序点入本实验室每次试验质控血清的测定值。 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第 3 页 共 6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 13 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 质控图的绘制步骤: 4.2.2.1 在常规条件下，对同一批血清连续测定20 次(天)或以上，获得一组S/CO 值，求均数()和标准差(), 超出2或3的数据不应删除。 ss s 4.2.2.2 将均值()和标准差()分别在质控框架图中标示出来。以S/CO 值作纵座标 s (Y 轴)，每一次(天)试验作横座标(x 轴)，绘制质控图。 4.2.2.3 从第21 次起，将每次质控血清的检测结果依次点入该质控框架图中，检验进入质控状态。 4.2.3 质控规则及使用 实验室在报告实验结果之前必须质控数据，可通过图形记录的检查或由计算机审核结果来决定。目前许多质控规则已被采用，常用的是12S 和13S 规则。 4.2.3.1 告警(12S):当外部对照的S/CO 值超出x +2s 范围时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。若将12S 做失控标准，有较高的假失控概率，所以一般不采用。 4.2.3.2 失控(13S):当外部对照的S/CO 值超出x +3s 范围时，系统处于失控状态，本次实验结果不能被接受，可能是系统误差、随机误差或外部对照滴度下降造成。 4.2.3.3 位移:连续几次(3,5 次)外部对照S/CO 值都落在均值的一侧则称为位移，提示实验条件发生了较大的变化。 4.2.3.4 趋势:连续几次(5,7 次)外部对照S/CO 值几乎按一个方向分布时称为趋势，通常由参数的缓慢改变引起。 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第 4 页 共 6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 14 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 质控规则的使用应检出随机误差和系统误差，即具有高的检出分析误差的能力，同时应具有较低的假失控概率。考察试验系统的可靠性应采用多标准质控方案，多规则质控方法能提高误差检出，并具有低的假失控概率。 其要点为: 出现一次2s 范围的变化时，系统处于告警状态，应予注意，是否可以继续检测需要进一步观察。 出现下列情况时，应暂停检测查找原因:出现一次3s 范围的变化、连续两次出现同一方向2s 范围的变化、连续四次出现同一方向的1s 范围的变化、连续10 次结果都在1s 范围内，但落在均值线的同一侧。 4.2.4 质控图的分析及失控处理 实验室应建立质控图分析及失控情况处理程序。 当质控已有并恰当地执行时，要求可靠的平均值和标准差用于计算质控限，将假失控概率降到最低。当出现失控时进行如重复质控测定或重新分析新的质控物不是最有效的方法，必须找出问题原因，找出解除故障的方法，并消除原因，防止将来出现同样的问题。 4.2.5 绘制和分析质控图的要点 4.2.5.1 要在常规条件下建立质控图参数，用S/CO 比值绘制质控图。对同一批质控物连续测定得到20 个数据，求均值( )和标准差(s), 超出2s 或3s 的数据不应删除。 4.2.5.2 由专人负责建立质控图，每月定期召开质控分析会，讨论本月的质量控制情况。 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第 5页 共 6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 15 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 4.2.5.3 建议长期和稳定地使用一种质量好的试剂盒，更换不同厂家的试剂盒后，必须重新绘制质控图。改用新批号试剂盒也应重新制作质控图。使用新批号或不同厂家的试剂盒必须在质控图上注明使用日期。 4.2.5.4 发现质控结果失控，应填写报告单，上交质量负责人，分析原因并决定是否发出检测报告。 4.2.5.5 使用新批次的外部对照质控物时，必须重新绘制质控图。变异系数(cv)小于20,，表示外部对照处于稳定状态。 4.3 “即刻法”质控 “即刻法”质控方法是在对同一批外部质控血清连续测定3 次后，即可对第3 次检验结果进行质控。具体计算方法如下: 4.3.1 将质控血清的测定值从小到大排列:x1，x2，x3((xn(x1 为最小值，xn 为最大值)。 文件编号:SXX**YY- 01,08 ***医院 第 6页 共 6 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV筛查实验室质量控制 16 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 4.3.4 将.. SI上限、SI下限与.. SI值表中的数字比较。 SI值表 (1)当SI上限和SI下限 n 3s值时说明该值已在3s范围之外，属“失控”。数值处于“告警”和“失控”状态应舍去，需重新测定该质控血清和病人样品。舍去的只是失控的这次数值，其它测定值仍可继续使用。.. 文件编号:SXX**YY- 01,09 ***医院 第 1页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV抗体检测结果解释和报告 17 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1.目的:及时准确的报告HIV检测结果、追踪和处理HIV抗体阳性者，做好医学、法律、生活等各方面的解释工作。 2. 适用范围: HIV实验室对检测结果的报告与解释。 3. 职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4.内容 ? 筛查试验阳性不能出阳性报告，可出具“HIV 抗体待复查”报告。 ? 对呈阴性反应的样品，可由实施检测的实验室在10个工作日内出具HIV 抗体阴性 报告。 ? 对筛查呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂 重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV 抗体阴性;如均呈阳性反 应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。 ? 如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV 抗体复测送检单”，经1 名 检验人员和1 名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查中心 实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。 ? 对筛查阴性和阳性者，均需做好检测后咨询。 文件编号:SXX**YY- 01,10 ***医院 第 1页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV抗体检测筛查实验室保密制度 18 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的:检测人员做好保密工作 2. 适用范围:HIV处筛实验室检测过程和结果 3. 职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4. ***医院HIV抗体检测筛查实验室由专人负责妥善保存各种实验记录、感染者档案， 不得擅自修改和销毁;严格遵守保密制度，未经***医院主任本人书面通知不得向 本中心任何与HIV抗体检测筛查实验室无关人员及领导提供任何情况;未经省级 卫生行政主管部门许可，***医院不得向无关人员或单位提供任何情况。 5. ***医院HIV抗体检测筛查实验室检测的阳性结果不是最终结果，应及时作出进一 步确认，本筛查实验室不能出具HIV抗体阳性的结果报告，更不能告知受检者本 人。 6. ***医院HIV抗体检测筛查实验室得到浙江省HIV抗体检测确认实验室确认的以机 密级向本筛查实验室出具的阳性结果后，应立即报告绍兴县卫生局，在对阳性者 告知检测结果时要先做好法律、医学、生活等方面的咨询。 7. 所有经确认的阳性标本，包括在实验室内留存的标本，应送浙江省疾病预防控制 中心HIV抗体确认中心保存，不得擅自处理。标本保存时间最少5年。 检验原始记录与保存 文件编号:SXX**YY- 01,11 ***医院HIV抗体筛查实验室 检 验 原 始 记 录 [HIV抗体筛查] 19 第 页 共 页 编号: 一、 准备 实验日期: 样品来源: 样品名称: 样品性状: 样品编号: 检验依据: 所用试剂: 试剂厂家: 产品批号: 有效期至: 实验室温度: 培养箱温度: 洗板机型号: 雷勃 MK2 洗板机产地: 酶标仪型号: 雷勃 MK3 酶标仪产地:: 将试剂盒从冰箱中取出，置室温平衡30分钟。将所需数量的反应条孔 排列于反应板上。 二、 操作 1. 反应板每孔加稀释液 ul。 本次实验待测标本作业指导书 个，每孔加标本血清 ul 2. 设阴性对照 孔，每孔加阴性对照血清 ul。 设阳性对照 孔，每孔加阳性对照血清 ul。 孔 ，每孔加质控血清 ul。 设外部质控 用胶纸封板后放培养箱 分钟。 3. 将浓缩洗涤液稀释 倍:取浓缩洗涤液 ml，加蒸溜水至 ml 混匀。开启洗板机电源预热。 4. 反应板从培养箱中取出，用洗板机洗板:每孔加洗涤液400ul，浸泡 秒后吸出，如此洗涤 遍,将反应板在吸水纸上拍干。 5. 每孔加显色剂A、B各50ul，轻拍混匀，胶纸封板后放培养箱 分 钟。开启酶标仪预热。 6. 取出反应板，每孔加终止液 ul混匀，中止反应。 7. 用酶标仪比色:比色波长450nm,参比波长620nm。比色结果见附表。 (样品排列及实验结果见背面) ***医院HIV抗体筛查实验室 检 验 原 始 记 录 [HIV抗体筛查] 20 第 页 共 页 编号: 三、 实验结果 1 2 3 4 5 6 7 8 9 10 11 12 A B C D E F G H NC: NC: x PC: PC: 1x Cutoff: 结论: 检测者: 复核者: 年 月 日 年 月 日 文件编号:SXX**YY- 01,12 ***医院 第 1页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 21 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV追踪与处理 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的:规范相关样品的处理 2. 适用范围: HIV抗体阴性而近期有过高危行为者的样品、灰区的样品、不确定的样品、HIV抗体阳性的样品、 3. 职责: 3.1 实验室操作人员按照本规则进行样品的追踪与处理 3.2 科室负责人负责综合管理。 4. 操作程序 4.1样品的范围: 4.1.1HIV抗体阴性而近期有过高危行为者，为排除窗口期感染的可能，报告中必须注明每三个月复查一次，连续两次，并做好记录通知样品来源单位。 HIV抗体灰区的样品为排除窗口期感染可能，报告中每三个月复查一次，连续两次，并做好记录通知样品来源单位。 收到不确定报告单，做好记录并复印一份报告单送流调人员。 收到阳性报告单，做好记录并复印一份报告单送流调人员。 文件编号:SXX**YY- 01,09 ***医院 第 2页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 22 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV追踪与处理 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 对发现并报告的HIV感染者和AIDS病人，由疾病控制科进行首次流行病学调查。 对既往的HIV感染者和AIDS病人，定期进行随访。 对HIV感染者和AIDS病人密切接触者进行调查随访，劝其采样检查，并做好记录。 严格保密制度，不得向无关人员泄露有关信息。 耐心沟通，树立良好的医德和职业道德。 细心随访，加强宣传教育，让他们全面了解HIV预防知识及传播途径，树立对己、对家庭、对社会的高度责任感。 HIV阳性标本的记录按规定妥善保存(标本类型、数量、存储温度、时间、保管人等)。 试验原始记录、检测记录、标本登记等各种文件记录应妥善保存5年以上。同时使用计算机保存各种文件和记录。 文件编号:SXX**YY- 01,13 ***医院 第 1页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 23 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV抗体检测筛查实验室废弃物品消 毒处理 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 目的:防止试验后废弃物污染环境 适用范围: 适用于HIV试验后废弃物 安全操作

指南

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消毒隔离过程中要严格注意自身保护和防止污染。 1. 血液标本置于合适容器内，加盖盖紧后运送，切勿污染盛器外部。如果盛器被污染，要用消 毒液消毒。也可将血样置于有盖的塑料管内，外面套上塑料袋，封口，连同送检单一并运送， 有血液外溢时，立即用消毒液消毒; 2. 各种试剂和化学品均应贴有标签，放置于合适的位置，实验台上不放置不必要的物品。任何 测试用的样品和试剂不宜置于桌面或架子的边沿，以防滑落打破，污染环境。一旦污染，先 在污染区外周围倒入消毒液，逐渐向中心消毒处理; 3. 实验室所有垃圾，包括用过的一次性手套和工作衣，置于专门污物袋内，经焚烧或有效消毒 处理后丢弃，污染的非一次性工作衣应先消毒后再洗涤; 4. 所有用过的实验用品，尤其是血样管和血液标本先在实验室内消毒，再移出清洗，待消毒后 再用; 5. 所有尖锐物品应置于不宜刺破的容器内，消毒后用合适的方法处理; 6. 常用的消毒剂和消毒方法与病毒性肝炎消毒法相同。 文件编号:SXX**YY- 01,14 ***医院 第 1页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 24 编制依据:《全国艾滋病检测技术规范》【2009年版】 标题:HIV实验室生物安全防护 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1. 目的:保护HIV检测人员的身体健康，控制传染源的交叉污染。 2. 适用范围: HIV实验室的生物安全防护 3. 职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4. 内容: ? 建立生物安全制度及相关的 (包括:废弃物处置和消毒 、职业暴露 ) ? HIV检测人员按规定接种乙肝、甲肝等相关疫苗。 ? HIV检测人员进入实验室前在清洁区穿好隔离衣、戴好手套、防护眼镜。 ? 实验室中用移液器操作所有的液体。 ? 操作中如有标本、检测试剂外溅，及时用浸有1,次氯酸钠溶液的抹布擦拭干净， 如溅出的液体量大、浓度高先用1,次氯酸钠溶液浸泡半小时以后再戴上手套擦 净。 ? 试验完毕后，脱去手套后洗手，再脱去防护眼镜、隔离衣，用肥皂和流动水洗手。 文件编号:SXX**YY- 01,15 ***医院 第 1页 共 1 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 25 编制依据:420X电热恒温培养箱使用说明书 标题:420X电热恒温培养箱 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1.目的:规范培养箱的操作，维护其正常工作。 2.适用范围:420X电热恒温培养箱 3.职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4.步骤 4.1按电源开关，电源按钮按向“ON”表示电源接通。 4.2 指针显示器:显示测量温度。 4.3 如需改变温度旋转温度控制，旋转至所需要的温度。 文件编号:SXX**YY- 01,16 ***医院 第 1页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 26 编制依据:低速离心机使用说明书 标题:低速离心机 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 1.目的:维护离心机的正常工作，规范离心机的使用与保养。 2.适用范围:低速离心机 3.职责:HIV检测人员负责本作业指导书的执行，院办公室负责监督执行 4.内容 4.1低速离心机的控制面板: 序号 名称 功能说明 1 显示窗口 显示相关数据 2 定时设定键 用于样品离心所需时间的设定 3 转速设定键 用于样品离心过程中所需转速的设定 4 设定确认键 用于在每次设定参数后的确认 5 R 键 此为功能预留键，按此键无任何作用 6 M 键 此为功能预留键，按此键无任何作用 7 离心力显示键 按此键，显示当前转速下的离心力 8 数字键 用于对设定参数的修改 9 启动键 按此键离心机开始运转 10 停机键 按此键离心机停止运转 设定说明:打开电源开关后，离心机显示出厂前的设定值，如果需要重新设定按如下操作: 定时设定:按定时设定键，然后输入所需的时间。 转速设定: 文件编号:SXX**YY- 01,16 ***医院 第 2页 共 2 页 第1版 第 1 次修订 作业指导书 颁布时间:2008,07,01 27 编制依据:低速离心机使用说明书 标题:低速离心机 文件编制人:张** 文件审核发人:卢** 按动控制面板上的“转速设定”键一次，并将所需的转速输入，然后按“设定确认”键以示确认。 5. 维修与保养 ? 不可用坚硬的物体碰撞转子，在搬运和拆装中要防止碰撞，要防止因划痕或外伤而 导致转子在使用中产生裂纹。 ? 应定期检查转子是否有腐蚀斑点、凹槽、细小裂纹等，如发现有上述任何一种情况， 请立即停止使用改转子，并与生产单位联系。 ? 通常情况下转子和离心杯每周应清洗一次，如发现在使用中离心样品溅出、浸、滴 在转子上，应立即吸干并局部清洗。 ? 清洗转子时为防止表面氧化层破坏，请用清洁剂沾湿海绵清洗，然后用蒸馏水洗调 清洁剂或用70,酒精擦洗，清洗后允许将其倒置晾干。 ? 离心机不使用时应切断电源。 绍兴县HIV筛查检测操作规程及安全防护 一、 样品的采集和处理 艾滋病检测最常用的样品是血液，包括血清、血浆和全血。唾液或尿液有时也可作为测试样品。常用的血液样品的采集和处理方法如下: 28 1. 血清样品采集和处理 2.用一次性注射器(或真空采血管)抽取一定量静脉血，室温下自然放置1-2h，待血液凝固、血块收缩后再用3000r/min 离心15min，吸出血清备用。 3. 如用滤纸片采样，则手指或耳垂局部严格按常规进行消毒，在刺破皮肤后，迅速把滤纸片沾上，切勿让血液滴落在其它物体表面造成污染。采血后要待血样干燥后再包装送检。 4. 采集样品注意事项 5.采集样品原则上应按临床采血技术规范操作(试剂盒说明书有特殊要求除外)。 6. 采集样品时应注意安全，建议采用真空采血管及蝶形针具，以避免直接接触血液;直接接触HIV 感染者/艾滋病(AIDS)病人血液/体液的操作,应戴双层手套。 7.样品的保存:用于抗体检测的血清或血浆样品，应存放于-20?以下，短期(1 周)内进行检测的样品可存放于2-8?。 7.2. 样品的运送 7.2.1 实验室间传递的样品应为血清或血浆，除特殊情况外一般不运送全血。 7.2.2 应采用WHO 提出的三级包装系统 7.2.3 第一层容器:装样品，要求防渗漏。样品应置于带盖的试管内，试管上应有明显的标记，标明样品的编号或受检者姓名、种类和采集时间。在试管的周围应垫有缓冲吸水材料，以免碰碎。随样品应附有送检单，送检单应与样品分开放置。 7.2.4 第二层容器:要求耐受性好、防渗漏、容纳并保护第一层容器，可以装若干个第一层容器。将试管装入专用带盖的容器内，容器的材料要易于消毒处理。 7.2.5 第三层容器:放在一个运输用外层包装内，应易于消毒。在第三层容器外面要贴标签(数量，收、发件人)。 7.2.6 血清和血浆样品应在2-8?条件下由专人运送。用于CD4+/CD8+T 淋巴细胞测定的样品应在室温下18-23?运送。每一包装的体积以不超过50ml 为宜。 7.2.7 运送感染性材料必须有记录。 二、 HIV抗体检测程序 1. 实验室质量控制的基本要求 29 1.1.必须使用经卫生部批准或注册，经过中国药品生物制品检定所批批检定合格的国产或进口HIV抗体筛查和确认检测试剂。筛查用的HIV检测试剂必须是HIV一1/2混合型。在选用试剂时应优先选择经过临床评估质量优良的试剂盒。 1.2.必须使用在有效期内且保存条件符合要求的诊断试剂。 1.3.必须按照 中规定的要求进行操作，包括进行检测的实验条件如阳性对照和阴性对照的设置、试剂、标本加样量、孵育时间、反应温度、洗涤程序和次数等。 1.4.在实验前必须检查所有待检标本的质量，如有脂血、溶血或污染的标本原则上不能使用，必须重新采集标本。若无法重新采集标本，必须在室主管批准下使 用，在检测结果中应该注明该份标本的情况。 1.5.冰冻的标本待全部融化后必须充分摇匀。 2. HIV抗体检测程序及其流程图 血液标本验收合格后，用筛查检测试剂进行检测，如呈阴性反应，出具HIV抗体阴性报告。 对呈阳性反应的样品，须进行复检，不能出阳性报告。 复检试验:对筛查呈阳性反应的样品用原有试剂和另外一种不同原理或不同厂家的筛查试剂重复检测。如两种试剂复测均呈阴性反应，则报告HIV 抗体阴性;如均呈阳性反应，或一阴一阳，需送艾滋病确认实验室进行确认。(见图1) 30 3. 筛查试验结果的报告 3.1 对HIV 抗体筛查试验，呈阴性反应者可出具“HIV 抗体阴性<->”报告;对筛查试验呈阳性反应者不能出阳性报告，可出具“HIV 抗体待复查”报告。 3.2 筛查试验呈阳性反应样品的转送 如需送上级实验室进行复测或确认，需要填写“HIV 抗体复测送检单”，经 名具有中级以上技术职称的人员审核签字。送当地艾滋病筛查1 名检验人员和1 中心实验室，再转送艾滋病确认实验室，或在本实验室复检后直接送确认实验室。 三、安全防护 1.个人防护及保健 艾滋病实验室所用的个人防护装备均应符合国家有关标准的要求。 1.2 防护服 艾滋病实验室应为每个工作人员配备足够的防护服，包括白大衣、隔离衣或一次性工作服。平时应将清洁的防护服置于实验室清洁区内专用存放处。离开实 31 验室时，应脱去防护服。每次穿过的污染的防护服应及时放入污衣袋中，待消毒后方可洗涤或废弃。 1.3 当含有HIV 的液体(样品或病毒培养液)及有可能溅到工作人员时，应使用防渗透性的(如塑料)围裙。 1.4 当发现防护服已被污染时，应立即更换。 1.5 艾滋病实验室应配备一次性手套、一次性口罩、安全防护眼镜及冲洗眼睛的装置。 1.6 艾滋病实验室应配备实验室专用的工作鞋，鞋面覆盖足背，鞋底防滑。 1.7 个人保健 1.7.1 高标准的个人保健对于减少感染的危险性很重要。皮肤受损、患病都会增加感染的危险。皮肤的任何伤口和擦伤都应以防水敷料覆盖。 1.7.2 进实验室前要摘除首饰，修剪长的带刺的指甲，以免刺破手套。 1.7.3 进入实验室应穿隔离衣，戴手套。如果接触物传染危险性大，则应戴双层手套和防护眼镜。 1.7.4 离开实验室前必须脱去隔离衣，并洗手。 1.7.5 严禁在艾滋病实验室内进食、饮水、吸烟和化妆。 2.实验室管理要求 2.1 建立安全制度 2.1.1 实验室的仪器设备、建筑和设施的安全性应符合《实验室生物安全通用要求》GB19489-2004 和《规范》要求。 2.1.2 根据《规范》制订本实验室的安全工作制度或安全标准操作程序( )，该制度或程序应适用于现有的实验条件，并与实验室其它规定相一致。 2.1.3 无论是否发生意外事故，每年都要对安全工作制度或安全标准操作程序及其实施情况进行检查和修订，并有记录。 2.1.4 制定意外事故处理预案。建立意外事故的登记和报告制度。 2.1.5 实验室主任负责组织对突发事件和职业暴露事故进行调查、登记、处理和报告。 2.2 人员培训和管理 2.2.1 向管理人员和所有检测人员提供并完成与工作相关的充足有效的技术培 32 训。强化全员安全培训和“普遍性防护原则”安全意识。所有工作人员必须经过HIV 检测技术和省级以上艾滋病实验室安全培训，包括上岗培训和复训，并接受实验室管理人员的监督。实验室的安全责任人要对工作和环境的安全负责，所有工作人员都有责任保护自己和他人的安全。 2.2.2 必须告知新上岗人员实验室工作的潜在危险，进行安全教育，直至有能力后方可单独工作。 2.2.3 实验室主任应了解所有工作人员。在安排工作区域时，要根据人员的工作种类和所涉及的生物材料，对实验室环境做好安全检查。 2.2.4 新调入人员、外来合作、进修和学习的人员在进入实验室之前必须经过实验室主任的批准。非实验室人员和非实验室物品不得进入实验室。 2.2.5 严格执行实验室工作人员年度采血检测HIV 抗体和备案制度，工作人员血清应长期保留。实验室工作人员从事工作前必须进行HIV 抗体和乙肝、丙肝等肝炎病毒标记物的检测;注射乙肝疫苗;每半年至1 年进行1 次HIV 抗体检测，并保留血清样品。 2.3 建立严格的保密制度并定期检查 2.3.1 与HIV/AIDS 相关检测项目的所有资料均应严格保密，包括送检单与检测记录的保管、报告单的发放和工作人员年度采血检测等。 2.3.2 艾滋病检测实验室所有人员应具有高度的保密意识。不可对无关人员透露检测结果。 2.3.3 保密制度纳入年度考核，发现问题及时处理并根据情况修订保密制度。 2.4 严格质量管理 2.4.1 按要求做好安全操作的管理以及检测试剂的选择、检测工作的室内质控和室间质评。 2.4.2 对所有检测报告严格把关，杜绝漏报、误报现象的发生。 2.5 对存放试剂和有毒物区域的监控 2.5.1 冷藏柜、冰箱、培养箱和存放生物试剂、化学危险品、放射性物质的容器置于工作人员视线之外的地点时应上锁。 2.5.2 应设有专门储存阳性血清、质控品的低温冰柜和/或血清库毒种库，并应上锁，专人管理。 33 2.6 建立应付突发事件的措施 2.6.1 在紧急预案中要包括在紧急事件发生时通知实验室主任、设备管理员、实验室工作人员和设备安全员。 2.6.2 实验室主任和设备安全员要遵循有关规定，报告、调查和处理突发事件以及可能发生的意外职业暴露。 3 实验室的安全操作 3.1 在安排工作人员的实验室区域时，要根据其工作的种类和所涉及的生物试剂，对实验室环境做好安全检查。 3.2 进入实验室应穿隔离衣、戴手套，必要时(如对筛查阳性标本进行复测或确认时，或直接对HIV 毒种进行操作时)戴防护眼镜，以防污染暴露的皮肤和衣物。不用戴手套的手触摸暴露的皮肤、口唇、眼睛、耳朵和头发等。 3.3 如接触物传染性危险大，可戴双层(两付)手套以增加保护。操作时手套破损，应立即丢弃、洗手并戴上新手套。 3.4 禁止采用口腔吸液管，必须使用移液器来操作实验室的所有液体。 3.5 操作中有标本、检测试剂外溅时应及时消毒。对大量溅出的浓度高的传染物在清洁之前应先用1%次氯酸钠溶液浸泡，然后戴上手套擦净。 3.6 工作完毕，要对工作台面消毒。工作台面应当用0.1%0.2%次氯酸溶液消毒;用消毒液清洗后要干燥20min 以上; 3.7工作完毕，脱去手套后洗手，再脱去工作衣，用肥皂和流动水洗手。 3.8 血清及其它体液样品均应严格按要求妥善保存，HIV 抗体阳性样品应做好标记单独保存。 4 避免利器的使用 4.1 尽量避免在实验室使用针头、刀片、玻璃器皿等利器，以防刺伤。如果必须使用，在处理或清洗时应采取措施防止刺伤或划伤，并应对用过的物品进行消毒处理。 4.2 尽量使用安全针具采血，如蝶形真空针，自毁性针具等，以降低直接接触血液和刺伤的危险性。 4.3 应将用过的锐器直接放入耐刺、防渗漏的利器盒，针头直接放入坚固的容器内，消毒后废弃。禁止将使用后的一次性针头重新套上针头套。禁止用手直接接 34 触使用后的针头、刀片等锐器。 四、废弃物处置和消毒 1 废弃物处置 1.1 废弃物处置应符合《实验室生物安全通用要求》(GB 19489-2004)和《消毒技术规范(2002年版)》。 1.2 从艾滋病实验室出来的所有废弃物，包括不再需要的样品、培养物和其它物品，均应视为感染性废弃物，应置于专用的密封防漏容器中，安全运至消毒室，并在高压消毒后再进行处理或废弃。 2 HIV 常用的消毒方法 2.1 物理消毒方法 2.1.1 高压蒸汽消毒，121?，保持1520min; 2.1.2 干燥空气烘箱消毒(干烤消毒)，140?，保持23h。 2.2 HIV 常用的化学消毒方法 HIV 最常用的化学消毒剂是含氯消毒剂(次氯酸钠，含有效氯2000-5000mg/L)、75%乙醇和2%戊二醛，保持1030 min。 2.2.1 废弃物缸:5000mg/L 次氯酸钠。 2.2.2 生物安全柜工作台面和仪器表面:75%乙醇。 2.2.3 溢出物:5000mg/L 次氯酸钠。 2.2.5 污染的台面和器具:2000mg/L 次氯酸钠,也可以用过氧化氢或过氧乙酸。器械可用2%戊二醛消毒。 五、实验室意外和事故处理 1 意外和事故 1.1 意外是指发生了未导致个人伤害偶然发生的危险，但也可能已经发生了伤害。 1.2 事故是指发生了人身伤害。意外和事故都可被分为小型的和重大的。 1.3 小型意外:少量潜在传染性物质漏到椅子上，常用于这种情况的有效处理措施是消毒污染处。 1.4 重大意外:任何情况下，如果怀疑有严重性的意外，都将被视为重要的，实验室必须被清空，锁上，并且实验室管理者要请教安全专家，听从他们的意见。 35 2 意外和事故的紧急处理措施 发生意外事故时，应立即进行紧急处理，并报告实验室负责人。 2.1 皮肤针刺伤或切割伤:立即用肥皂和大量流水冲洗，尽可能挤出损伤处的血液，用70%乙醇或其它消毒剂消毒伤口。 2.2 皮肤污染:用水和肥皂冲洗污染部位，并用适当的消毒剂浸泡，如70%乙醇或其它皮肤消毒剂。 2.3 粘膜污染:用大量流水或生理盐水彻底冲洗污染部位。 2.4 衣物污染:尽快脱掉污染的衣物，进行消毒处理。 2.5 污染物泼溅:发生小范围污染物泼溅事故时，应立即进行消毒处理。发生大范围污染物泼溅事故时，应立即通知实验室主管领导和安全负责人到达事故现场查清情况，确定消毒的程序。 2.6 低温蒸汽甲醛气体消毒 2.6.1 由于甲醛有致癌作用，不宜用于生物安全柜和实验室的常规空气消毒。 2.6.2 如果实验室一旦发生了重大泼溅事故，应按严重情况处理，并采取以下措施: (1)从污染处疏散人员，但要防止污染扩散; (2)控制污染——锁门并防止进一步进入; (3)通知实验室主管领导、安全负责人等，以便查清情况，确定消毒处理的程序; (4)如果认为合适，可进行生物安全柜和/或实验室的低温蒸汽甲醛气体消毒，但生物安全柜和/或实验室必须有可靠的密闭性能，人员必须完全离开。【生物安全柜:25ml 福尔马林和等量水混合后放在一个蒸发皿中使其在密封的生物安全柜中蒸发，保持至少6h，最好过夜。实验室:福尔马林和水的体积根据实验室大小而定】。具体操作可按说明书执行。 (5)发生溢出后应离开房间约30 分钟。 穿防护服，被溅的地方用经消毒剂浸泡的吸水物质覆盖;消毒剂起作用10,15 分钟后清理该地方。移走吸水性物质，用消毒剂冲洗该地方。 3 意外和事故登记、报告和检测 36 3.1 重大意外和事故必须进行登记，内容包括: 3.1.1 意外和，事故发生的时间、地点及详细经过。 3.1.2 处理方法和经过，包括专家或领导赴现场指导和处理的情况。 3.1.3 随访检测的日期、项目和结果。 3.2 意外和事故的报告和检测 3.2.1 发生重大事故时，在紧急处理的同时要立即向主管领导和专家报告。同时抽血检测HIV抗体，暴露后4 周、8 周、12 周、6 个月要定期检测。 3.2.2 发生小型事故时可在紧急处理后立即将事故情况和处理方法报告主管领导和专家。 六、 艾滋病的职业暴露后预防 1 职业暴露 艾滋病的职业暴露是指医务工作者、实验室工作人员及有关监管人员在从事HIV/AIDS 诊断、治疗、护理、预防、检验、管理工作过程中，暴露于含有HIV 的血液、体液和实验室培养液，即暴露于含有HIV 的液体等引起的危害。 2 HIV/AIDS 的职业暴露后预防 HIV/AIDS 的职业暴露后预防(Postexposure Prophylaxis，PEP)应包括急救、对暴露级别的评估、暴露源严重程度的评估、预防性用药的推荐处理方案、报告与保密。 2.1 急救处理 全国艾滋病检测技术规范 2.1.1 刺激出血:职业暴露的紧急处理，只要情况允许，应实行急救。如皮肤有伤口，应当反复轻轻挤压，尽可能挤出损伤处的血液。 2.1.2 肥皂和清水冲洗伤口或沾污的皮肤。如果是粘膜暴露，应用生理盐水(或清水)反复冲洗。 2.1.3 受伤部位的消毒与包扎:伤口应用消毒液(如75%酒精、2000mg/L 次氯酸钠、0.2%0.5%过氧乙酸、0.5%碘伏等)浸泡或涂抹消毒，并包扎伤口。 2.1.4 由于暴露后有无采取急救措施对职业暴露后HIV 感染有一定影响，故应尽量为受伤者寻找医疗机构，以求正确护理伤口和暴露后急救处理。 2.1.5 可介绍已发生职业暴露的人员到艾滋病防治机构进一步咨询和处理。 37 2.2 暴露级别(Exposure Code)的评估，分为1、2、3 级。 确定HIV 暴露源头严重程度，分为轻度、重度和不明 38 根据暴露级别和暴露源病毒载量水平预防性用药的推荐处理方案 注:(1)基本用药程序:两种逆转录酶制剂，使用常规治疗剂量，AZT(每次200mg，每日3次，或每次300mg，每日2次)+拉米夫定(每次150mg每日2次)，连续使用28d。或双汰芝(AZT与3TC联合制剂)300mg/次，每日2次。 (2)强化用药程序:基本用药程序加一种蛋白酶抑制剂，茚地那韦(800mg，tid，饭前1h 服用)，均使用常规治疗剂量。 及饭后2h 2.5 用药注意事项 2.5.1 在暴露后预防性用药应立即开始，最好在暴露后12h 之内。虽然动物研究显示2436h之后再进行预防性用药可能已无效，但是还不确定对人类无效。对于感染危险性很高的暴露者，即使间隔时间很长(比如12 周)，也应考虑使用预防性治疗;因为即使不能防止感染，早期治疗对HIV 急性感染也有好处。由于服用4 周AZT 才有一定保护作用，如果无很大的副作用，预防性治疗用药时间应持续4 周。 2.5.2 有关HIV 暴露后预防的一些具体建议:美国PEP 失败至少21 例，其原因包括:?大剂量病毒接种;?开始治疗过晚;?用药疗程过短;?用药剂量不足;?暴露源患者是否已用抗病毒药物治疗。因此具体建议如下: (1)如果存在用药指征，则应当在暴露后尽快开始PEP。 (2)暴露后72h 内应当考虑对暴露者进行重新评估，尤其是获得了新的暴露情况或源患者资料时。 (3)在患者可耐受的前提下，给予4 周的PEP。 (4)如果证实源患者未感染HIV，则应当立即中断PEP。 39 2.5.3 如果出现主观的或客观的毒副作用，应在专家的指导下，减少剂量或换用药物，并详细记录药物毒副作用情况。 2.5.4 育龄妇女使用AZT 作为预防用药期间，应避免或终止妊娠。 2.6 登记、监测、报告与保密 2.6.1 建立职业暴露登记和监测制度 (1)职业暴露登记制度:职业暴露事故的事故发生单位应建立“艾滋病职业暴露人员个案登记表”，对职业暴露情况进行登记、保存和上报。详细记录职业暴露发生的时间、地点及经过;暴露方式;损伤的具体部位、程度;暴露物种类(培 的情况;处理方法及处理经过(包括赴现场养液、血液或其它体液)和含有HIV 专家或领导活动);是否采用暴露后预防药物，并详细记录用药情况、首次用药时间(暴露后几小时或几天)、药物毒副作用情况(包括肝肾功能化验结果)、用药的依从性状况。 (2)当地疾病控制部门为职业暴露处理单位，重大职业暴露发生单位应及时与当地疾控中心取得联系。当地疾控中心应与当地有关专家联系根据情况共同进行风险的评估，确定用药的必要性、确定预防药物和用药程序，并将处理情况向主管行政部门报告。 (3)监测暴露源:如果暴露源没有阳性或阴性的血清学化验结果应立即检测，最好做快速试验，因其结果可在几十分钟内得到。如果暴露源有急性HIV 综合征的症状，应同时检测病毒载量。 (4)使用预防性用药，应注意监测药物的毒副作用，包括使用预防性治疗时和服药两周后的全血检测、肾功能和肝功检测。小型事故可在紧急处理后，立即将事故情况和处理措施报告主管领导和有关专家，以及时发现处理中的疏漏之处，使处理尽量完善妥当。不采取暴露后预防用药者，也要定期检测HIV 抗体，检测时间同前。 2.6.2 保密和报告制度 (1)保密:无论职业暴露、重大事故或小型事故，对涉及的职业暴露者，均应注意做好保密工作。每一个得到信息的机构或个人均应做好保密工作。 (2)报告制度:各职业暴露处理单位及时将填报的“艾滋病职业暴露人员个案登记表”报至省疾病预防控制中心(简称省疾控中心)。 40