BCA蛋白定量试剂盒

BCA蛋白定量试剂盒 BCA蛋白质定量试剂盒 BCA Protein Assay Kit Cat. No.: C3001 Size: 50~500次 (1)吸取0.1 ml的各品和待测样品置于合适的管中。 描述:BCA蛋白质定量试剂盒(BCA Protein Assay Kit)是根 据目前世界上最常用的蛋白浓度检测方法之一,BCA(2)加入2 ml BCA工作液，充分混匀。 (bicinchoninic acid)法改良研制而成，该试剂盒具有蛋白(3)37?孵育30 min，然后室温静置10 min。 浓度测定的简单性，高稳定性，高灵敏度和高兼容性。本试(4)紫外分光光度计于562 nm处检测吸光度。 剂盒的原理是蛋白质分子中的肽键结构在碱性环境下能与(5)绘制标准曲线。 2+2++Cu络合生成络合物，将 Cu还原成Cu，而BCA试剂可(6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。 +敏感特异地与Cu结合，形成稳定的有颜色的复合物，并在4. 微管测定方法 562nm处有最大光吸收值，该复合物颜色深浅与蛋白质浓度(1)分别取25 μl新鲜配制的BSA标准液和待测样品，加入成正比，可根据吸收值的大小来测定蛋白的含量，1小时内到ELISA反应板中。 即可完成蛋白定量检测。本试剂盒含有牛血清白蛋白(BSA)(2)每孔加入200 μl BCA工作液，充分混匀。 溶液作为蛋白质标准溶液，测定范围为25,2000 μg/ml。该(3)37?孵育30 min，然后室温静置10 min。 试剂盒可用于50次试管检测或500次ELISA板检测。 (4)酶标仪于562nm处检测吸光度。 (5)绘制标准曲线。 组分 (6)根据标准曲线计算出样品的蛋白浓度。 组分 数量 保存 BCA Reagent A 100 ml 室温 注意事项 BCA Reagent B 1 ml × 2 室温 1. 待测样品浓度在25~2000 μg/ml的范围内具有良好的线BSA 标准品(2 mg/ml) 1 ml × 2 -20? 性关系。 操作方法 2. BCA工作液配制后24小时内使用效果稳定。 1. 标准品的稀释:按下表将BSA进行稀释。 3. BCA法测定蛋白浓度时，吸光度会随着时间的延长不断加 BSA体积 BSA终浓度深。并且显色反应会因温度升高而加快。如果浓度较低，适管号 PBS (来源) (μg/ml) 合在较高温度孵育，或延长孵育时间。 A 0 300 μl (母液) 2000 4. 使用普通的分光光度计测定时，需根据比色皿的最小检测B 125 μl 375 μl (母液) 1500 C 325 μl 325 μl (母液) 1000 体积，适当加大BCA工作液的用量，使其不小于最小检测D 175 μl 175 μl (B管) 750 体积，样品和标准品的用量可相应按比例调整。 E 325 μl 325 μl (C管) 500 5. 适用范围 F 325 μl 325 μl (E管) 250 G 325 μl 325 μl (F管) 125 H 400 μl 100 μl (G管) 25 I 400 μl 0 0 2. BCA工作液的配置:根据样品数量及测定方法， 将BCA Reagent A和BCA Reagent B按体积比50:1 充分混匀即可。 注意:配制BCA工作液前请将BCA Reagent A混匀。 3. 标准比色杯测定方法 BCA蛋白质定量试剂盒 BSA标准工作曲线 BCA Protein Assay Kit 0.25y = 0.0001x2Cat. No.: C3001 Size: 50~500次 0.2R = 0.9992 0.15 OD5620.1盐/缓冲液类干扰耐受浓度 去垢剂类干扰耐受浓度 物质 物质 0.05HEPES (pH 7.9) ?100 NP-40 ?5% 0025050075010001250150017502000PIPES (pH 6.8) mM Triton X-100 ?4% 蛋白浓度(μg/ml) NaCl ?100 SDS ?4% HCl mM Tween-20 ?4% NaOH ?1 混合物&极性耐受浓度 Sodium citrate M 化合物 TRICINE (pH ?100 8.0) mM Sodium Acetate ?100 Guanidine.HCl mM Tris ?100 Sucrose mM PMSF ?1 mM EDTA ?Acetone ?10% DTT 20 mM Ethanol ?10% ?200 Glycerol ?10% mM Urea ?3 M ?4 DMSO ?10% M ?50 mM ?40% ?10 mM ?0.2 mM 实例操作 按上述操作方法可得到如下标准工作曲线，该线性方程经过 2多次绘制，系数均为0.0001，且R值均在0.99~1之间，重复性好，在计算蛋白浓度时可直接用该标准工作曲线进行计算。例如:在562 nm处检测吸光值为0.1，则此时y值为0.1，代入方程y=0.0001x中，可得蛋白浓度为1000 μg/ml。