HPLC测定�痹颗粒中淫羊藿苷的含量

HPLC测定�痹颗粒中淫羊藿苷的含量 HPLC测定,痹颗粒中淫羊藿苷的含量 [摘要] 目的:建立HPLC测定,痹颗粒中淫羊藿苷含量的方法。方法:流动相为甲醇- 水-冰醋酸(55?44?1);流速1.0 ml/min;柱温25?;进样量:10 μl;波长为270 nm。 结果:淫羊藿苷在0.057 4~0.574 0 μg线性关系良好，r=0.999 7，方法的平均回收率为 99.68% (RSD = 0.77%)。 结论:本法操作简便、准确、重现性好，能够控制,痹颗粒的质量。 [关键词] ,痹颗粒;高效液相色谱法;淫羊藿苷 [中图分类号]R917 [文献标识码]A [文章编号]1673-7210(2008)06(b)-034-02 Determination of icariine in Wangbi Granules by HPLC JIN Feng-huan1，ZHOU Xue-mei2 (1. Liaoning Herbapex Group Benxi Pharmaceutical Co. LTD., Benxi 117000, China; 2. NERC for the Pharmaceutics of Traditional Chinese Medicines, Benxi 117000, China) [Abstract] Objective: To establish a HPLC method to determine icariine in Wangbi Granules. Methods: The mobile phase was methanol -water-glacial acetic acid (55?44?1); the flow rate was 1.0 ml/min; the column temperature was 25?; the sample volume was 10 μl; the detective wavelength was 270 nm. Results: The linear range of icariine was 0.057 4~0.574 0 μg(r=0.999 7); the average recovery was 99.68% (RSD=0.77%). Conclusion: The method reported in this paper is easy to operate, and can provide accurate and reproducible results , thus are able to control the quality of Wangbi Granules. [Key words] Wangbi Granules;HPLC; Icariine ,痹颗粒由淫羊藿、知母、白芍、独活、附子(制)、桂枝等10多种中药材组成，具有 补肝肾、强筋骨、祛风湿、通经络的功效。用于久痹体虚，关节疼痛，局部肿大、僵硬畸形， 伸曲不利及类风湿性关节炎。其中淫羊藿具有补肾阳、强筋骨、祛风湿作用，为方中主药， 因此对淫羊藿苷进行了含量测定。 1 仪器与试药 Agilent 1100高效液相色谱仪(包括G1379A在线脱气机、G1313A 自动进样器、G1311A 四元梯度泵、G1316A柱温箱、G1314A 紫外检测器)，UV-2401型紫外分光光度计，恒温水浴 锅，PW型超纯水制备器，超声波(功率150 W，频率20 kHz)。 淫羊藿苷对照品(中国药品生物制品检定所提供，批号:0737-200011，供含量测定用)。 甲醇为色谱纯，水为超纯水，其他试剂均为分析纯。,痹颗粒(辽宁好护士集团本溪制药有 限公司生产)。 2 方法与结果 2.1色谱条件及系统适用性试验 2.1.1 检测波长的选择以甲醇溶液作为空白对照，用紫外分光光度计对淫羊藿苷对照品甲醇溶液进行全波段扫描(200~400 nm)，淫羊藿苷在270 nm附近处有最大吸收，故选用270 nm为检测波长，供试品中无干扰组分，而且供试品中待测组分与相邻组分分离度良好。 2.1.2 流动相的选择采用高效液相法测定淫羊藿苷的含量[1]，参考强阳保肾丸[2]中淫羊藿含量测定项下的甲醇-水-冰醋酸(60?39?1)流动相，其淫羊藿苷出峰时间较早，故将流动相改为甲醇-水-冰醋酸(55?44?1)。流速:1.0 ml/min;柱温:25?;进样量:10 μl。 2.1.3系统适用性试验色谱柱最低理论塔板数试验中，我们采用不同色谱柱加以实验，在各自条件下，供试品溶液中淫羊藿苷与其他组分分离良好，其保留时间(tR)、理论塔板数(n)、分离度(R)见表1。 根据测定结果，这三种色谱柱均可应用于本实验，暂定本实验中理论塔板数按淫羊藿苷峰计算不得低于4 000。 2.2 线性范围的考察 精密称取淫羊藿苷对照品14.35 mg，用甲醇转移至50 ml量瓶中并定容至刻度，摇匀。精密吸取1 ml，转移至10 ml容量瓶中，加甲醇稀释至刻度，摇匀，制成每1 ml含淫羊藿苷 0.028 7 mg的对照品溶液。 分别精密吸取对照品溶液 2，5，10，15，20 μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱峰面积，以对照品量为横坐标，色谱峰面积为纵坐标绘制标准曲线，经线性回归，得回归方程为:Y=2 685.1X-1.019 5，r=0.999 7，表明淫羊藿苷进样量在0.057 4~0.574 0 μg范围内具有良好的线性关系。 2.3 供试品溶液的制备 取本品(批号:20060502)混匀，研细，取2.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇30 ml，称定重量，加热回流1 h，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。 2.4 阴性干扰试验 按方法制备缺淫羊藿的阴性样品，并按“2.3”项下制成阴性对照溶液。精密吸取对照品溶液，供试品溶液及阴性对照溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，绘制色谱图(图1~3)。从图1~3可见，在与对照品色谱峰相应的位置上，供试品溶液具有相同保留时间的色谱峰，而阴性液在此峰处无干扰。 2.5 稳定性试验 取“2.3”项下供试品(批号:20060502)溶液，在室温下放置，于 0，4，8，12，16，24 h分别精密吸取10 μl，注入液相色谱仪，记录峰面积。结果表明，淫羊藿苷峰面积积分值的RSD<2%，色谱峰面积无明显变化，供试品溶液制备后24 h内测定，待测组分化学性质稳定。 2.6 精密度实验 取“2.3”项下供试品溶液，重复进样6次，每次10 μl，记录淫羊藿苷色谱峰面积。结果表明，淫羊藿苷峰面积积分值的RSD<2,，色谱峰面积无明显变化，精密度符合要求。 2.7 重复性试验 取本品(批号:20060502)适量，分成6份，分别按“2.3”项下方法提取，精密吸取样品溶液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。结果表明，该方法对于本品中淫羊藿苷含量测定的重复性较好(RSD<2%)。 2.8 回收率试验 取已知准确含量(0.38 mg/g)的本品(批号:20060502)6份，分别混匀，研细，各取样品1.0 g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入稀乙醇27 ml，向各个锥形瓶中准确加入 对照品3 ml(C标=0.095 5 mg/ml)，称定重量，加热回流1 h，取出，放冷，再称定重量，用稀乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。精密吸取本品续滤液各10 μl，分别注入液相色谱仪，记录峰面积。测定结果见表2。 2.9 ,痹颗粒中淫羊藿苷的含量测定 按“2.3”项下方法制备供试品溶液，测定3批,痹颗粒中淫羊藿苷的含量，测定结果见表3。 综上所述，本方法简便、灵敏、准确，重复性好，可用于,痹颗粒中淫羊藿苷的含量测定。 [参考文献] [1]国家药典委员会.中国药典[S].北京:化学工业出版社，2005. [2]赵大成.高效液相色谱法测定强阳保肾丸中淫羊藿苷的含量[J].医药导报，2006，25(2):150-151. (收稿日期:2008-04-10) 注:本文中所涉及到的图表、注解、公式等请以PDF格式阅读原文