丙酮酸乙酯对脓毒症凝血功能紊乱的保护作用及

丙酮酸乙酯对脓毒症凝血功能紊乱的保护作用及 丙酮酸乙酯对脓毒症凝血功能紊乱的保护作用及 丙酮酸乙酯对脓毒症凝血功能紊乱的保护作用及 目的 1.利用脓毒症的经典盲肠结扎穿孔术(cecal ligation puncture，CLP)探讨丙酮酸乙酯(ethyl pyruvate EP)对于脓毒症凝血功能紊乱中的保护作用。 2.动态观察CLP模型小鼠血液中高迁移率族蛋白Bl(high mobility group boxlportein，HMGBl)的含量变化及小鼠肺组织蛋白表达水平，探讨丙酮酸乙酯(ethylpyruvate EP)对脓毒症凝血功能紊乱中的作用机制，为临床脓毒症器官功能保护提供新的理论研究依据。方法将选择的SPF级昆明(KM)雄性小鼠共135只随机分为假手术组(sham组)、手术组(CLP组)、治疗组(EP组)，每组45只，然后观察小鼠术后各时间点反应、个体活动、睡眠、进食、呕吐、眼球凹陷、呼吸，分泌物、竖毛、腹泻、粪便、尿量等生存情况，应用夹心酶联免疫吸附测定法(ELISA)检测技术术后即刻、4小时、8小时、12小时、24小时、48小时、72小时总共7个时间点的外周血中肌酐(Cr)指标、血小板(PLT)计数指标、凝血酶原时间(PT)指标、谷丙转氨酶(ALT)指标、活化部分凝血酶时间(APTT)指标、纤维蛋白原(FIB)指标、高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)指标、D-二聚体指标、蛋白C(PC)指标，在活杀前进行脓毒症评分，并观察脓毒症小鼠严重程度的评分、生存的时间，应用Western blot法检测肺组织中高迁移率族蛋白Bl(HMGB1)的表达水平，随后进行肺组织病理切片HE后观察结果。结果 1.观察术后72h小鼠假手术组(sham组)存活率均为100%，丙酮酸乙酯治疗组(EP组)存活率约为60%，手术组(CLP组)存活率约为10%(其P0.05)。与假手术组(sham组)相比，丙酮酸乙酯治疗组(EP组)和手术组(CLP组)的小鼠在8小时后血小板(PLT)逐渐下降，但丙酮酸乙酯治疗组(EP组)显著高于同时间点手术组(CLP组)(P0.05);与假手术组(sham组)相比活化部分凝血酶时间(APTT)、凝血酶原时间(PT)延长，但丙酮酸乙酯治疗组(EP组)较手术组(CLP组)明显延长时间较短(其P0.05);与假手术组(sham组)相比谷 丙转氨酶(ALT)、肌酐(Cr)明显升高，但丙酮酸乙酯治疗组(EP组)显著低于同时间点手术组(CLP组)(其P0.05)。光镜下手术组(CLP组)、丙酮酸乙酯治疗组(EP组)肺组织可见明显急性肺损伤改变表现:水肿、充血、炎症细胞浸润、间质变窄、大小不同程度形成微血栓，丙酮酸乙酯治疗组(EP组)较手术组(CLP组)病理损伤明显减轻，且肺组织损伤病理的评分明显降低(其P0.05)。 2.丙酮酸乙酯治疗组(EP组)和手术组(CLP组)观察8小时后纤维蛋白原(FIB)明显下降，到24小时时达到峰值，但EP组显著高于同时间点CLP组(其P0.05)。EP组和CLP组观察8小时后D-Dimer明显升高，到12小时时达到峰值，随后逐渐降低，但丙酮酸乙酯治疗组显著低于同时间点手术组(其P0.05)。CLP组术后12小时血清PC开始明显升高，48小时达到峰值并持续至72小时，而EP组在12小时PC明显升高，且显著高于同时间点手术组(其P0.05)。CLP组在血清中发现HMGB1在观察8小时后显著升高，12小时出现峰值，随后开始降低，效应可持续超过72小时，但EP组显著低于同时间点CLP组(P0.05)。sham组不同时间点小鼠HMGBl蛋白均有微量表达，而CLP组、EP组HMGBl蛋白从8小时开始表达明显增多，以12~24小时为显著，48小时开始下降但仍高于假手术组，丙酮酸乙酯治疗组同时间点蛋白水平显著低于手术组(其P0.05)，但仍高于假手术组且有显著性差异(其P0.05)。结论 1. EP能够显著减轻CLP诱导的脓毒症凝血功能障碍程度，提高脓毒症凝血功能紊乱小鼠的生存率。 2.EP能够显著抑制脓毒症小鼠HMGBl水平，通过抑制HMGBl来调节纤溶和凝血系统从而有效减轻CLP诱导的脓毒症凝血功能紊乱。 中文摘要5-7ABSTRACT7-10缩略词表10-12前言12-16 一、材料及方法16-23 二、结果23-31 三、讨论31-34 四、结论34-35 参考文献 35-41综述41-49 参考文献 45-49攻读学位期间发表学术论文49-50致谢50