【doc】孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高征中的变化

【doc】孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高征中的变化 孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高 征中的变化 第31卷第6期第677页 2002年12月 华中科技大学(医学版) JHuazhongUnivSciTech[Healthsd] VoI.31No.6P.677 Dec.2002 孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量 在妊高征中的变化 邹丽陈莉娟朱剑文 * 华中科技大学同济医学院附属协和医院妇产科,武汉430022 摘要比较妊高征与正常孕妇外周血及胎盘组织绒毛内胎儿有核红细胞(NRBC)的数量,探讨NRBC出现频率在 妊高征中的变化对28名孕龄27,41周,年龄2O,39岁(包括l8名妊高征)的孕妇外周血进行不连续密度梯度离心. 对分离后的细胞进行制片,染色.显微镜下进行NRBC计数,比较组问差异;终止妊娠时,对胎盘组织进行病理切片, 显微镜下进行NRBC计数.比较组间差异.结果发现18名妊高征孕妇外周血中NRBC数目为(25.28?10.97)个/7ml; 同孕龄正常妊娠妇女外周血中NRBC数目为(12.50?5.44)个/7m1.两者问有显着性差异(P<O.01).妊高征孕妇胎 盘绒毛内NRBC数目为(3.83?3.20)个/4OHP;同孕龄正常孕妇胎盘绒毛内NRBC数目为(O.6O?0.70)个/40HP, 两者问有显着性差异(P<O.01).提示孕高征孕妇外周血与胎盘组织绒毛内NRBC数目明显升高.为妊高征的早期预 测和病情评估提供新思路. 关键词孕妇外周血;有核红细胞;胎盘;妊娠高血压综合征 中图法分类号R714.5,R714.25 ChangeofFetalNucleatedRed Pregnancy—induced BloodCellSinMaternalBloodwith HypertensionSyndrome ZouI.i,ChenIijuan,ZhuJianwen DepartmentofObstetricsandGynecology,XieheHospital,TongjiMedicalCollege, HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430022 AbstractFetalnucleatedredbloodeell(NRBC)numbersofmaternalbloodandvilluswerecomparedbe— tweenthewomenwithpregnancy--inducedhypertensionsyndrome(PIH)andthosewithnormalpregnancyto investigatethechangesofNRBCfrequencyinPIH.28womenof27— 41weeks'gestationatageof2O一39years (including18casesofPIH)werestudied.Thefetalcellswereisolatedfrommaternalbloodwithdiscontinuous densitygradientcentrifugation.Theisolatedcellsweremadesmearandcountedunderthemicroscope.Aher delivery.theplacentaltissuesweremadeintosectionsandalsocountedunderthemicroscope.Itwasfoundthat themeannumberofNRBCinperipheralbloodwas25.28? 10.97/7mlin18PIHpregnantwomenand12.50 ? 5.44/7mlinnormalpregnantwomenwithdifferencebeingsignificantbetweenthetwogroups(P<O.01). ThemeannumberofNRBCinvillusof18PIHpregnantwomenwassignificantlyhigherthaninthe10normal pregnantwomen(3.83?3.20/40HPVS0.60?0.70/40HP,P<0.01).ItiSsuggestedthatthenumberof NRBCissignificantlyincreasedinperipheralbloodandvillusofpregnantwomencomplicate dwithPIH.which canbeusedinthepredictionandevaluationofPIH. Keywordsmaternalperipheralblood;nucleatedredbloodcell;placenta;pregnancy--induce dhy— pertensionsyndrome 自发现母体外周血中存在少量胎儿有核红细胞 (nucleatedredbloodcell,NRBC)以来,许多学者对 .国家教委留学回国人员启动基金资助项目(教外司留 [1996]644号)和卫生部回国人员课基金资助项目(32科 教交发[1996]第024号) 邹丽,女,1961年生.教授 其投入了大量的研究.从富集,分离到临床应用都 取得了较大成效,现已有许多研究成功地利用有核 红细胞诊断各种单基因疾病和染色体疾病[】].另有 报道称在某些病理妊娠状态下,母体外周血中的胎 儿有核红细胞有增多的情况[2门].已发现在胎儿缺氧 或早期胎盘损伤的情况下,母血中胎儿有核红细胞 明显增多.这为某些病理妊娠的诊断及预测提供了 ?678?华中科技大学(医学版)2002年12月第31卷第6期 新思路,但目前尚无系统的定量.本研究通过 对正常孕妇与妊娠高血压综合征(妊高征)患者外 周血及胎盘组织中NRBC数量的比较,探讨其差 异,以期为妊高征的诊断及预测提供一条新思路. 1与方法 1,1标本来源 1.1.1研究对象:研究对象共28例.均来自华中 科技大学同济医学院附属协和医院妇产科2001年 l1月,2002年2月的住院患者.其中妊高征组18 例(轻度3例,中度5例,重度10例),年龄2O, 39岁,孕周27,41周,妊高征诊断参照全国统 编教材《妇产科学》第5版;对照组10例,正常妊 娠孕妇,年龄22,31岁,孕周29,4O周,无高血 压,贫血,糖尿病等疾病史. 1.1.2标本收集:?孕妇外周血,每次采血7m1, 置于盛有EDTA抗凝剂的无菌试管中,生理盐水等 倍稀释后备用;?胎盘组织,对同一患者追踪至分 娩时,在距胎盘边缘5cm处,避开梗死及钙化部位, 取约3cm×3cm的胎盘组织1块,立即置于10 中性甲醛溶液中固定,同上分组备用. 1.1.3主要试剂和仪器:Percoll细胞分离液(Phar— maci公司产品),LD5—2A型台式离心机(北京医用 离心机厂制造),XSP一2C型生物显微镜(上海光学 仪器厂制造). 1.2方法 不连续密度梯度离心富集胎儿NRBC,具体步 骤为:用密度为1.085g/ml和1.075g/ml的Percoll 细胞分离液在离心管中制成密度梯度,将7m1外周 血用生理盐水等倍稀释后缓慢加入.以3000r/min 离心30min,收集中层分离界面细胞,以生理盐水 洗涤后,4lC保存备用_4]. 将分离后的细胞制成涂片,每例样本制片2,4 张,以May—Giemsa复合染色法染色.在光学显微镜 下识别有核红细胞(NRBC)并进行计数. 将固定24h后的胎盘组织进行常规石蜡包埋, 切片,HE染色.光学显微镜下仔细观察绒毛结构, 同时进行绒毛内NRBC计数(40个高倍视野/例). 1.3统计学处理 数据采用?S表示,统计采用t检验. 2结果 2.1孕妇外周血及胎盘组织绒毛内NRBC出现频率的比 较 比较两组孕妇外周血及胎盘组织绒毛内检出 NRBC频率发现,妊高征组为[(25.3?l1.0)个/ 7ml,(3.8+--3.2)个/40HP]较对照组[(12.5? 5.4)个/7ml,(0.6?0.7)个/40HP]有明显升高 (P<O.01)(图1,2,见封4).妊高征孕妇胎盘组 织病理切片显示细胞滋养细胞增生,合体滋养细胞 结节增多,绒毛血管减少,基底膜增厚(图3,见封 4). 2.2妊高征组中孕妇外周血及胎盘组织绒毛内NRBC出 现频率的比较 不同程度妊高征,外周血及胎盘组织绒毛内 NRBC的数量亦有不同,见表1.?检验显示中,重 度妊高征与正常妊娠外周血及胎盘组织绒毛内 NRBC数量有显着性差异(P<0.05),轻度妊高征 与正常妊娠外周血及胎盘组织绒毛内NRBC数量 无显着差异(P>0.05). 表1不同程度妊高征孕妇外周血及胎盘组织绒毛 内NRBC的数量比较(j?s) 与对照组比较'P<0.05 3讨论 3.1母血中胎儿有核红细胞来源及变化 有学者发现,孕11周时胎儿循环中的NRBC 约占红细胞的10,而孕19周时降为0.5_5].正 常情况下,胎儿血液与母体血液不发生直接接触.但 胎盘绒毛浸泡在母血池中,极易损伤,胎儿成份从 而进入母体循环.研究认为,母血中胎儿NRBC,以 ll,2O周检出率最高_6].但实际发现,在某些病理 妊娠状态下,如发热,缺氧,感染等,NRBC的出现 可以突破这一时限,并且其数量有所升高. 3.2胎盘绒毛内有核红细胞的变化趋势及影响因素 病理学认为,妊娠第8周,绒毛血管管腔内可 见原始有核红细胞和晚幼有核红细胞;妊娠超过10 周,绒毛血管内仍有幼稚红细胞,则属不正常现 象_7].但又有学者认为,NRBC的出现并非如此罕 见,在胎盘屏障损伤的情况下,NRBC的出现频率升 高.因此推测妊高征妊娠中也将存在NRBC升高的 情况,而这一点与本研究结果相符. 邹丽等.孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高征中的变化'679' 3.3妊高征与NRBC数量变化 正常妊娠从孕10周左右开始,绒毛滋养叶细胞 沿螺旋小动脉逆行浸润,血管内皮逐渐被取代,血 管肌肉弹性层则被纤维样物质取代,管腔扩大,阻 力下降,血流量增加;浸润可达子宫肌层内1/3深 度.而在妊高征妊娠中.浸润仅达蜕膜段.甚至不 发生此种生理变化,胎盘血流量不足导致缺血,目 前称为胎盘缺陷(placentaldefect)l_8].胎盘缺陷导致 胎儿缺氧,胎儿循环中NRBC数量代偿性增多.母 体外周血中NRBC量也相应上升.另一方面,妊高 征的血管内皮损伤.进入母体的胎儿细胞亦相应增 加.这与本研究结果一致.因本研究样本较少,故 未对妊高征的孕周与NRBC的关系作比较. 3.4本方法的优势及缺点 将母体外周血NRBC计数用于妊高征的临床 监测有其不可替代的优势.本方法简便,易于掌握, 仪器简单,更有利于临床工作的开展.当然本方法 尚存在着NRBC丢失的问题,但这一点随着操作技 术熟练亦可解决. 妊高征孕妇外周血中NRBC数量增多这一事 实,为我们诊断和预测妊高征提供了又一新思路.在 孕早期,当孕妇外周血中NRBC数量超过正常范围 时,可以作为预测妊高征的一项辅助指标;孕中晚 期,孕妇外周血中NRBC计数可以衡量病情严重程 度.总而言之,妊高征妊娠母体外周血中NRBC数 量增多这一事实将为我们诊断,预测妊高征的临床 工作提供帮助. 参考文献 1WatanabeA,SekizawaA.Prenataldiagnosisofor— nithinetranscarbamylase(0TC)deficiencybyusinga singlenucleatederythrocytefrommaternalblood.Hum Genet.】998,】O2:611 2MuftiR.HambleyH,AlbaigesGela1.Increasedfe— talerythroblastsinwomenwhosubsequentlydeveloppre— eclampsia.HumReprod,2000,15:】62-I 3HolzgreveW.GhezziF,DiNaroEeta1.Disturbedfeto— maternalcelltrafficinpreeclampsia.ObstetGyneco1. 1998.91:669 4TakabayashiH,KuwabaraS,UkitaTeta1.Develop— mentofnoninvasivefetalDNAdiagnosisfrommaternal blood.PrenatDiagn,1995,15:74 5SimpsonJL.EliasS.Isolatingfetalcellsfrommaternal blood.advancesinprenataldiagnosisthroughmolecular technology.JAMA,1993,270:2357 6邹丽,朱剑文.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的出现 频率及其与孕周的关系.中华围产医学杂志,2000,3 (3):199 7BruxJ,AnclaM.Arias—Stellaendometrialatypias.Case studywithelectronmicroscope.AmJObstetGynecol, 1964,89:661 8林其德.妊高征病因学研究的进展.中华妇产科杂志, 1997,32(1):3 (2002—05—18收稿) (上接第676页) 过程,因而对孕早期快速诊断有着重要的意义, 在无创性产前诊断中有广阔的运用前景.但由于我 们的病例较少,因此还需要大样本实验和重复实验 确定其可靠性.另外还要尽量控制实验污染,采用 女性实验员和盲法操作等,以降低假阳性率. 参考文献 1BianchiDW.Clinicaltrialsandexperience:Boston.Ann NYAcadSci,1994,7:92 2KimuraT,SekizawaA.TagutiAeta1.Prenataldiagnosis ofDuchennemusculardystrophyusingsinglefetalcellin maternalblood.NipponRinsho,1997,55:3137 3SekizawaA.SamuraO.ZhenDK.eta1.Fetalcellrecy— cling:diagnosisofgenderandRhDgenotypeinthesame fetalcellretrievedfrommaternalblood.AmJ0bstet Gynecol,1999,181:1237 4高林晴夫,桑原物隆,浮田俊彦等.母体血中有核 赤血球出.日本科人科学会蘼志,1997,49:149 5TroegerC.ZhongXY,BurgemeisterReta1.Approxi— matelyhalfoftheerythroblastsinmaternalbloodareof fetalorigin.MolHumReprod,1999,5:1162 6邹丽,朱剑文.孕妇外周血中胎儿有核红细胞的出现 频率及其与孕周的关系.中华围产医学杂志,2000,3 (3):199 (2002—05—27收稿) 孕妇外周血中胎儿有核红细胞数量在妊高征中的变化 (正文见第677页) 圈1示外周血涂片中NRBC 圈2示妊高征妊娠胎盘绒毛问后血管中NR- BC 圈3妊高征妊娠胎盘组织病理切片,示细胞培 养细胞增生,合体滋养细胞结节增多,绒 毛血管减少,基底胰增厚 本刊原刊名为《同济医科大学》 FORMERACTAUNIVERSITATISMEDICINAETONGlrJI 华中圭:塞(医学版)盖羞 HJuazhongUnivSciTech 双月刊Bimonthly 名誊主编裘法祖 HonoraryChiefF_AitorOAuFazu 主绾向继溯 ChiefF_AitorJ~.hou 绾辑部翻主任】一c万武 ?oeDirectorofEdimrinlDe~ont HIlangWanwu 2002年第31卷第6期 2002年12月出版 Dec200231No6 1957年刨刊 印刷 中华人民共和国教育部 华中科技大学 华中科技大学同济医学院 编辑部 (430030武汉航空路13号) 华中科技大学同济医学院 印刷厂 国内总发行武汉市邮局 订购处全国各地邮局 国外总发行中国国际图书贸易总公司 (北京399信箱) 发行范圈公开发行 广告经营许可证号武工商广字03-1号 刊号,CODENTYDXEP 电话lO27-83692530 Supervi~lbyMof Eduction,People'sRepublic ofChina SponsoredbyHuszhongUnivemity ofScienceandTechnology EdlmtbyEdimrialDepartmentof TongjiMedicalCollege0f HUST (HangkongLu13,Wuhan 430030) PrintedbyHUWong~ MedicalConeg,PriIHouse Subecription Dome~iclPost0ofD IerentLevelsjnChina Forei窑TllChinaInternationalBook TrgC泖.P.O.Box 399.,China DisuibumtinChinaandOverse~ E?maillz研@timtI.edtI.cn Faxl027.83692927 国内代号.38—37国外代号tBIVI198国内定价t全年72.00元每期定价,12.00元