祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血白细胞介素6、干扰素γ和肿瘤坏死因子α的影响-

祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血白细胞介素6、干扰素γ和肿瘤坏死因子α的影响- 祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血白细胞介素 6、干扰素γ和肿瘤坏死因子α的影响*         &nb sp;   作者:王玉玺～王 丽～王俊志～王雅贤～王惠国～李志鸿     【摘要】  目的  观察祛毒胶囊对LPS诱导的狼疮样模型小鼠几项免疫指标和病理改变的影响～探讨祛毒胶囊治疗系统性红斑狼疮,SLE,的可能机制。方法  用ELISA试剂盒检测血清中白细胞介素-6,IL-6,、γ-干扰素,IFN-γ)、肿瘤坏死因子,TNF-α,水平～对肝肾组织常规HE染色。结果  ,1,血清中IL-6、IFN-γ及TNF-α水平各治疗组与模型组比较～差异有显著性,P,0.05,,,2,病理结果显示模型鼠肝肾炎性改变～治疗组炎性改变减轻。结论  祛毒胶囊对狼疮样小鼠血清中IL-6、IFN-γ及TNF-α的分泌有抑制作用～能明显改善其病理状态。         【关键词】  祛毒胶囊,系统性红斑狼疮,白细胞介素-6,γ-干扰素,肿瘤坏死因子-α     【Abstract】  Objective  To investigate the effect of Qudu capsule on IL-6～ IFN-γ and TNF-α secretion and pathologic change in revulsive lupoid model mice with LPS and the possible mechanism of Qudu capsule in treating systemic lupus erythematosus(SLE).Methods  IL-6～IFN-γ and TNF-α in serum of the model mice were detected by enzyme linked immunosorbent assay(ELISA).Hepatic and renal tissue was stained by HE.Results  (1)In the treated groups～as compared with the model group～levels of serum IL-6～IFN-γ and TNF-α were significantly lower(P,0.05,,,2,Pathologic results showed that liver and kidney appeared inflammation in model mice. Inflammation relieved in the treated groups.Conclusion  Qudu capsule could inhibit the secretion of IL-6～IFN-γ and TNF-α and improve the pathologic lesion in model mice.         【Key words】  Qudu capsule, systemic lupus erythematosus,IL-6,IFN-γ,TNF-α         系统性红斑狼疮,SLE,是以多克隆 B细胞异常活化～免疫球蛋白增多和多种自身抗体的生成及 细胞内外免疫反应异常为特征的自身免疫性疾病～其病因和 发病机制尚未完全清楚。研究发现SLE中存在着T细胞亚群的异常和细胞因子的异常～网络性细胞因子失衡在SLE发病中起着重要作用。现代医学多采用肾上腺糖皮质激素、免疫抑制剂、非甾体抗炎药及抗疟药治疗～但毒副作用明显～停药后易反复～故中医中药治疗该病得到广泛关注。祛毒胶囊是笔者数十年来治疗SLE行之有效的复方中成药～本研究旨在通过对狼疮小鼠血清中细胞因子的测定来探讨中药治疗SLE的免疫机制。         1  材料与方法         1.1  药品与试剂  祛毒胶囊:秦艽、紫草、生黄芪、白花蛇舌草、雷公藤、丹参、生地等～由我院药局提供,强的松片剂,大肠杆菌脂多糖,LPS,,IFN-γ～IL-6～TNF-α试剂盒购于TPI Inc.17037 the 34th Ave～Suite G Lynnwood～Washington 98003 U.S.A。         1.2  造模及给药  纯系昆明小鼠～20，22g～8，10周～雌雄各半～由黑龙江中医药大学实验动物中心提供。参照WHO免疫研究教学中心,WHO Immunology Research and Training Centre)报道造模方法～i.p LPS。75只小鼠随机分为5组～西药组:0.312g/ml的 强的松水溶液～0.5ml/,20g〃d)灌胃,中药组:1?1,即1ml水中含1g生药,的祛毒胶囊水溶液0.7ml/,20g〃d,灌胃,联合用药组:1?1的祛毒胶囊水溶液0.35ml/,20g〃d,～浓度0.312g/ml的强的松水溶液0.25ml/,20g〃d,灌胃,空白组、模型组给予0.5ml/,20g〃d,的生理盐水。         1.3  形态学观察  肝肾组织甲醛固定～切片～常规HE染色制片～光镜下观察细胞形态。         1.4  指标测定方法  IL-6、IFN-γ和TNF-α测定参照ELISA试剂盒#说明#～用anthos 2010全自动酶标仪测定OD值。         1.5  1 统计学方法  采用SPSS 10.0统计软件包进行统计分析。所有均用,x〒s)示～采用多样本均数比较的方差分析法。         2  结果         2.1  镜下观察  模型组 动物肾小球毛细血管丛增生、充血～内皮细胞肿胀～集合管腔内见蛋白管型～近曲小管基底膜增厚。肝细胞严重脓肿～可见小灶性坏死～小叶中央静脉扩张淤血～汇管区内见有大量淋巴细胞浸润～并有少量胆色素颗粒。说明所造动物模型符合SLE病理改变特点。西药组及联合用药组动物肝、肾炎性病变有所恢复～中药组动物肝、肾炎性病变恢复状况明显优于以上2组。         2.2  IL-6、IFN-γ和TNF-α水平  模型组小鼠IL-6、IFN-γ和TNF-α水平明显高于空白组、各药物治疗组～差异有显著性,P,0.05,,空白组与各治疗组组间IL-6、IFN-γ和TNF-α水平比较～差异无显著性,P,0.05,。见表1  表1  祛毒胶囊对狼疮样小鼠外周血IL-6、IFN-γ和TNF-α水平的影响  ,pg/ml,     3  讨论         3.1  细胞因子  是由活化的免疫细胞和某些基质细胞分泌的参与炎症反应的小分子多肽～在免疫反应和炎症反应中有多种生物活性～它们在免疫细胞间起相互联系的介导作用～在细胞的活化、增殖及分化中起调节作用。细胞因子是个复杂的免疫调控网络～SLE患者存在着多种细胞因子异常～国内外一些研究发现SLE患者血清Th1、Th2细胞因子水平均升高～认为Th1诱导发病～Th2在炎症过程中起作用,1,。深入研究SLE细胞因子的变化～并寻找细胞因子拮抗物等免疫调节剂～减少或阻止Th2的分泌是我们探索治疗SLE的方向。          3.2  白介素-6,IL-6,  是多种细胞产生的一种具有广泛生物活性的低分子糖蛋白～属Th2型细胞因子～它可激发炎症及免疫反应～IL-6主要与变态反应性疾病及体液免疫性疾病有关～其生物学功能之一就是促进B淋巴细胞分化成抗体分泌细胞～进而产生抗体。SLE患者体内大量自身抗体的产生就是与IL-6分泌异常有关～近年来大量的临床观察与实验资料已证明～B细胞在正常人不表达IL-6抗体～而在SLE患者表达。IL-6通过参与维持B细胞高活性状态的自分泌途径～促进IgG的自发性生 成,2,～SLE患者血清IL-6水平显著高于正常～其与SLE的病理过程与严重程度成正相关。因此SLE血清IL-6水平检测是SLE病情监测的实验指标之一。         3.3  γ-干扰素,IFN-γ,  是由活化的T淋巴细胞产生～属Th1型细胞因子～其主要作用是通过激活单核细胞、淋巴细胞和自然杀伤细胞,NK,而调节免疫反应～调节淋巴细胞因子的生成～诱导细胞表面受体表达等,控制免疫调节～故称为免疫干扰素。干扰素对细胞免疫和体液免疫功能的影响～视所用剂量和给药时间不同而异～小剂量可增强绵羊红细胞,SRBC,小鼠脾溶血空斑数,PFC,～而大剂量可抑制之。各家报道也不尽一致～Regaraju等报道SLE患者PBMC中IFN-γ的表达减少,而Gerez报道SLE患者INF-γ表达可增高,3,。         3.4  肿瘤坏死因子,TNF-α,  属Th1型细胞因子～可激活T细胞和NK细胞～促进B细胞活化和趋化。TNF-α可诱导DNA蛋白的合成～后者与IL-6基因上的调节区相结合～而刺激IL-6基因的转录～故TNF-α的增高可能伴有IL-6的增高。有研究证实～TNF-α的增高～与IL-6的增高同步～提示上述的作用机制在发病中起作用～且有关联,4,。实验证实～TNF-α在自身免疫性 疾病中是造成病理性损害的主要原因之一,5，7,。这些实验结果与临床所见一致～表明IL-6和IFN-γ及TNF-α均为炎性细胞因子。在SLE血清中均有异常表达～因而笔者选择其作为实验的检测、观察指标。本实验采用的LPS诱导SLE的小鼠模型～病理学结果与SLE的临床病变基本相符～这为该模型的成功建立提供了可靠依据。本研究结果显示:狼疮小鼠B、T细胞过度活化～存在IL-6、IFN-γ和TNF-α蛋白高表达～祛毒胶囊和强的松一样可有效抑制IL-6、IFN-γ和前炎性因子TNF-α的分泌。         3.5  祛毒胶囊有凉血解毒、活血化瘀、滋阴益气的功效  由秦艽、白花蛇舌草、雷公藤、紫草、丹参、生地、黄芪等组成。除黄芪外～上述药物皆具有明显的抗感染作用～可对抗或抑制迟发性超敏反应。秦艽、白花蛇舌草、雷公藤皆可兴奋垂体-肾上腺皮质系统～增强肾上腺皮质功能～发挥抑制炎症反应和特异性免疫反应的作用。而白花蛇舌草、雷公藤皆具有免疫抑制和免疫调节作用～其中雷公藤对细胞免疫和体液免疫均具有显著的抑制作用～对NK细胞活性具有剂量依赖性双向调节作用～并能显著提高血清总补体含量和水平～阻止免疫复合物,IC,的形成～阻止其沉积于肾小球内～促进IC的清除～阻断其致炎作用。紫草具有抑制前列腺素、抑制补体活性的作用～ 可减少IC的产生。丹参除具有抗凝和促纤溶作用外～对非 特异免疫和体液免疫均有抑制作用～可减少免疫复合物,IC, 的产生。生地、黄芪两药具有免疫调节作用～无论是细胞免 疫还是体液免疫～其作用方向与机体自身免疫的功能状态和 免疫水平有密切关系～低者可升～高者可降～并可对抗或提 高因强的松或环磷酰胺所致的细胞免疫功能低下。根据祛毒 胶囊能有效地减少或阻止上述细胞因子的分泌使用～由此推 论免疫抑制和免疫调节是祛毒胶囊治疗SLE在免疫学方面的 重要机制之一。其确切作用机制有待进一步深入研究。        ;                          【参考文献】         1  施为.系统性红斑狼疮患者 血清IFN-γ、IL-4、IL-10水平及疾病活动性研究.临床皮 肤科杂志～2002～31,8,:499-500.         2  Nagafuchi H～ Suzuki N～ Mizushima Y～ et al. Constitutive expression of IL-6 releptors and their role in the excessive B cell function in patients nith systemic lupus erythematosus. J Immunol～1993～151(11): 6525-6534.         3  陈志强.SLE患者外周血单 个核细胞中IL-10与γ-干扰素的表达.临床皮肤科杂志～ 1999～28,2,:74-75.         4  陈志强.系统性红斑狼疮患 者外周血单个核细胞中IL-6与TNF-α的表达.中国麻风皮肤 病杂志～1999～15,3,:63-65.         5  Aderka D～ Engelmann H～ Maor Y～ et al. Stabilization of the bioactivity of tumor necrosis factor by its soluble receptors. J Exp Med～1992～175:323-329.         6  Nina J Makbatadze. Tumor necrosis factor locus: genetic irganization and biological implication. Human Immunol～1998～59: 571-579.         7  Kollias G～ Kontoyiannis D. Role of TNF/TNFR in autoimmunity: specific TNF receptor blockade may be advantageous to anti-TNF treatments. Cytokine Growth Factor Reviews～2002～13: 315-321