[doc] 六氯对二甲苯对豚鼠肝微粒体药物代谢酶的抑制特性

[doc] 六氯对二甲苯对豚鼠肝微粒体药物代谢酶的抑制特性 六氯对二甲苯对豚鼠肝微粒体药物代谢酶 的抑制特性 中国药理学与毒理学杂志1990年2月;4(1)?73 六氯对二甲苯对豚鼠肝微粒体药物代谢酶的抑制特性 王捷全钰珠 (重庆医科大学药理教研室,重庆630046) 前文报道抗华支睾吸虫病药六氯对二甲苯 HCX)对豚鼠肝药酶的抑 作用.Hcx能明显延长戊巴比妥催眠时间和血浆戊 巴匣妥tI/2并抑制肝匀浆中戊巴比妥侧链羟化酶 (Ixntobarbitatside-chainhydroxylase,PSCH)和氨 基比林N一脱甲基酶(aminopyrineN—demcthylase, ADM)话性.本文在肝微粒体和s9承平.进一步研 究了HCX对肝微粒体药物代谢酶的作用,同时对其 抑制特性进行了探讨. 材料和 豚鼠古;体重350土SD20g.由本校动物饲养场 提供.HCX由西南制药三厂提供.戊巴比妥钠Serva 公司产品.氨基比林.比利时进口.中国医药公司上 海化学试剂采购站供给.NADPH购自Sigma公司. NADP,NADH和葡萄糖6一磷酸均为中国科学院上 海生物化学研究所东风试剂厂生产.连二亚硫酸钠系 上海硫酸厂生产.一氧化碳为自制.HCX用玉米油 配成油溶液,豚鼠按2,4mg/kgip.体外温育时, HCX配成丙酮溶液.2.5ml温育液中加入丙酮溶液 100u1.按Flynn的方法制备豚鼠肝s9和微粒 体.参照Szhacterle口的改良Lowry法测定s9和微 粒体的蛋白质含量.然后用KC](0.I5mmol/L) 一 EDTA(1mmo]/L)一Tris—HC1(50mmol/L) 缓冲液(pH75)分别稀释为5mg/ml和4 mg/m1.于一30?保存备用. 戊巴比妥侧链羟化酶活性的测定参JFours 方法测定肝s9和微粒体内PSCH的恬性.以s9 为酶源时,温育体系中加入s9蛋白质5mg,戊巴比 妥钠15#toO1.NADP1.25#mol,葡萄糖一6一瞬酸 125m0】和MgC]2125#too1.以肝微粒为酶源时. 温育体系中加入微粒体蛋白质4mg,戊巴比妥钠15 #mol和NADPH12lano1.然后分加磷酸缓冲液 至25m1.37?温育30min.终止反应后.按 Oroszlan的方法提取并测定剩余戊巴比妥量.以 戊巴比妥的代谢速率示该酶的活性. ADM活性的测定温育体系中肝s9和微粒体 1988年4月28It收精1989年2月12日修回 现在成都四川省寄生虫病防治研究所 蛋白质加入量及各种辅助因子加入量同上.氨基比林 加入量为5#mo1.保温45min,终止反应.参疆 Nash的方法”测定温育液中甲醛的生成量.”{Ii{堇 的生成速率表示该酶的活性. 按Omura的方法u测定细胞色索P450(cyto— chromeP450.P450)和细胞色索h(cytochrome bh)的含量. 结果 HCX体内给药对肝微粒体药物代谢酶及P450和 b含量的影响豚鼠随机分组.每组5只.实骑组 按100mg/kgipHCX一狄,对照纽相同体积的 玉米油.禁食12h.断头处死.制备肝微粒体,测定 肝微粒体中PSCH,ADM活性以及P450和b含 量.结果见表.经HCX处理的豚鼠肝微粒悼转化戊 巴比妥和氨基比林的速率明显降低,与对照组相比 PSCH和ADM的抑制率分别达38和I8%,但对 P450和b的含量别无明显影响. HCX于试管内对肝89药物代谢酶活性的影响 豚鼠5只.禁食12h后断头处死,制备肝s9. HCX溶于丙酮中.在25ml温育悻系中.实验管加 入HCX2m0】,终浓度为0.8mmol/L.按前述方 法测定PSCH和ADM话性,其中对照组分别为158 ?0.29和061?0.06nmol?rain一’?mg-.HCX组 分别为099土0.24和0.48?0.07nmot?rain-.? mg,.有显着性差异(p<0.叭和P<00,抑制半 分别达37和21%. HCX对ADM反应动力学的影响用5只豚鼠 的肝s9合并液进行试验.处理管加入HCX2#mol, 终滩崖0.8mmol/L,对照管加入丙酮100.各管 内氨基比林加入量分别为I.25,25.5和】0mo】. 以甲醛生成速率表示ADM的酶促反应速度.按 Linewaver-Burk方法作图(见图).对中两倒数回 归直线的斜率进行显着性检验(p<0.0I).HCX使 ADM的V…降低,由083降至039nmol/ (rain.mgprotein).即降低53%.加HCX和不加 HCXI1勺值分别为3.45mmo]/L和323 mmol/L1即.值基本不变.由此HCX对ADM 的抑制属非竞争性抑翩. ? 74?ChineseJournalofPhammcologyandToxicology1990Feb;4(1) Tab.Actlvld~of一metabolizingeozymesandthecoltmtaofcytocdhmmeP450andbs Inthelivermkrosomesofgulltelpl,pretreatedwitnafterHCX.Thejncubation mixturecontainedIiverS9 (5meprotein)ofguineapigandaminopytineattheCO~Cen. ~afionindicatedintheabsenQe?—?)orpresence0—O) ofo8retool/LHCX.EachutmWaSdupHcated 讨论 本文在肝微粒体水平.观察了HCX对豚鼠肝药 物代谢酶的影响.结果表明单剂HCX100mg/kg可 明显抑制肝微粒体PSCH和ADM的活性,这一结果 与在肝匀浆水平观察的结果相符”.HCX与豚鼠肝 s9试管内温育.也可显着抑制PsCH和ADM的活 性.表明无论整体给药或体外温育.HCX对豚鼠肝 微粒体药物代谢酶均可产生抑制作用.同时,体外动 力学实验表明HCX对ADM的抑制属非竞争性抑 制.经HCX处理的豚鼠肝微粒体P450和b含量无 明显降低,而经HCX处理的小鼠肝P450和b.含量 也无明显改变.提示HCX对小鼠和豚鼠肝药物代 谢酶的抑制机理可能是相同的.Admas曾报道哪氯 霉索能延长小鼠戊巴比妥催眠时间.并抑制PSCH和 乙基吗啡N-脱甲基酶话性.氯霉索抑制小鼠肝镦粒 药物代谢酶的一个最大特点是使酶话性降低的同时并 不伴有肝P450和b含量改变.本实验用豚鼠以及前 文’用小鼠均证明HCX使肝药物代谢酶抑制时.对 P450和b含量无明显影响.是否HCX对肝药物代 谢酶的抑制作用象氧霉索那样通过其中间代谢产物与 酶胥白质形成共价结音.从而导致酶的抑制.值得进 一 步探讨. 参考文献 1王捷.全钰辣.六誊对二甲苯对晖鼠肝药酶的抑制作 用药学1988;23:651 2FlynnEJ.Spmlesdifferenceanddrugmetabolism B~chemPh肼dcol1972;21:2577 3SckaeterleRG,Pollack.RL.Asimplifiedmethodforthe quantitativeassayofsmallarnou~taofproteininbiologic materia1.AhalBlochem1973;51:654 4Fo~tsJRUvetsmoothendoplesmicreticum .microsomal.drug-metabolizingenzymesystemIn: SChwartzAed.Me~odsinpharmacology.Vo】1.New York:Meredit1ICorp.1971:287—325 5OroszlanSI,Maengwyn-DaviesGDUltraviolet photometricassayofthiopentalandpentobarbitalin bloodandplasmaJAmPharmceuAssoc1960;49:507 6NashTThecolorimetricestimationofforraaldekydeby m~Ln$oftheHan~zschreaction.BiocAemJ1953;55:416 7OmuraSaroRThecarbonmonoxide-binding珂gment oflivermicrosomesIEvidenceofhemoproteinnature 丑fCheml964:23’:2370 8弋苹,全钰辣.六誊对二甲苯对小鼠肝药酶的抑制作 用.1987;&258 9AdamnsHR.1~aibitionoflpatiomicrosomalenzymes bycklorampkenicolPharmExpTher1977;203:388