阴道毛滴虫代谢产物体外对精子膜功能的影响

阴道毛滴虫代谢产物体外对精子膜功能的影响 阴道毛滴虫代谢产物体外对精子膜功能的 影响 一 418一中国误诊学杂志2005年3月第5卷第3期 ChineseJournalofMisdiagnostics,March2005.V015N0. 3 【研究原着】 阴道毛滴虫代谢产物体外对精子膜功能的影响 韩青江,刘继红 【摘要】目的:研究阴道毛滴虫代谢产物体外对精子膜功能完整性的影响.: 实验分为两组,实验组(A):除去 虫体的阴道毛滴虫培养液稀释为6×10/L浓度,与优化精子共同孵育1h;对照组 (B):不含代谢产物的滴虫培养液与优 化精子共同孵育1h,二组再通过低渗肿胀试验测定精子膜功能的完整性.结果:实 验组的精子肿胀率明显降低,与对照 组相比有显着性差异(P<O.O1).结论:阴道毛滴虫代谢产物体外能损害精子膜功 能的完整性,是不孕不育的原因之一. 【主题词】毛滴虫,阴道/代谢;精子/生理学;精子/病理学 【中图分类号】R382.21;R698.2【文献标识码】A【文章编号】1009—6647(2005)03—0418—02 EffectsoftheMetaboliteofTrichomonas.Vaginalis onMembraneFunctionIntegrityofHumanSperminVitro HANQing—jiang,LIUJi-hong (DepartmentofUrology,TongjiHospital,TongjiMedicalCollege, HuazhongUniversityofScienceandTechnology,Wuhan430030,China) [Abstract]Objective:Toinvestigatetheeffectsofthemetaboliteoftrichomonasvaginalisont hemembranefunc— tionintegrityofhumansperminvitro.Methods:Inexperimentalgroup,theculturesolutionco ntainingthemetabolite wasobtainedbyremovingtheprotozoa,thendilutedtoconcentrationof6× 10/L.Andhealthyspermswereincubated withthissolutionfor1hour;Incontrolgroup,healthyspermswereincubatedwiththesolution containingnometabolite for1hour.Nextspermmembranefunctionofthe2groupsweremeasuredbyhypo— osmoticswellingtest.Results:The membranefunctionintegrityofhumanspermofgroupBwasdestroiedmarkedly(P<0.01). Conclusions:Themetabolite oftrichomonasvaginaliscoulddoharmtothemembranefunctionintegrityofhumanspermin vitro,whichshouldbeone ofthecauseofinfertile. [MESH]Trichomonasvaginalis/metabolism;Spermatozoa/physiology;Spermatozoa/pat hology 生殖道感染是导致不孕不育的一个重要原因,已 有研究显示多种致病菌体外能抑制精子运动,但阴道 毛滴虫对精子作用的报道较少.作者曾经研究证实阴 道毛滴虫代谢产物体外能显着降低精子活力u],在此 基础上,进一步通过低渗肿胀实验(spermhypo—OS— moticswellingtest,HOS)研究了其对精子膜功能完 整性的影响,现如下. 1对象和方法 1.1'对象?阴道毛滴虫取自同济医院妇产科门诊 滴虫性阴道炎患者,立即接种于专用的滴虫培养基,2 次传代,第3代生长期间,取少许培养液行革兰氏染色 涂片和细菌培养,无杂菌者,在滴虫处于稳定生长期时 (第3代培养48h),用血细胞记数板计算虫体密度后, 将培养管放入4C冰箱,使滴虫滞动,再经1500r/min 作者单位:华中科技大学同济医学院附属同济医院泌尿外科.湖北武 汉430030 作者简介:韩青江(1969一).男,河南洛阳人,主治医师.硕士.研究方向: 不孕不育. 离心30rain,弃沉淀,留取上清液(其中含生长48h的 阴道毛滴虫代谢产物)备用;?健康生育男性10例自 慰供精,经上游法优化精子,再用EBSS溶液(Sigma 公司)调节精子密度至40×10/L. 1.2方法?试剂盒为深圳月亮湾生物工程有 限公司生产.各组中代谢产物的浓度以相应的阴道毛 滴虫浓度来示.由于已经实验证实阴道毛滴虫浓度 在6×10/L以上时精子活力显着降低L1],故依此浓度 作为分组依据.用空白阴道毛滴虫培养液将前述含代 谢产物的上清液稀释为6×10/L浓度.将每例优化后 的精子悬液(密度为4O×1O/L)分为A,B2组,每组 60l,A组加入未培养阴道毛滴虫的培养液60l为 空白对照;B组加入60l浓度为6×10./I的培养液 为实验组.上述各组各自混合后立即置入37lC恒温水 浴箱中孵育1h.依照WHO编写的人类精液及精子一 宫颈黏液相互作用实验室检验手册(第4版)为, 通过H0S来测定精子膜功能.取上述二组已混合孵 育1h的精子各0.1m1分别加入低渗肿胀检测试剂1 中国误诊学杂志2005年3月第5卷第3期 ChinesejournalofMisdiagnostics.March2005.Vol5No.3 ml中作用40min,再用移液器取1Ol于载玻片,显微 镜下观察,计数200个精子中尾部肿胀的精子数,每份 标本重复计数2遍,取其平均值,然后,计算出肿胀率. 具体操作按检测试剂盒使用说明书进行. 1.3统计学处理实验数据用?S表示,两组肿胀 率之间的比较用.t检验,采用SPSS11.0统计软件进 行. 2结果 在低渗肿胀液中精子尾部发生不同的变化,表现 为b,C,d,e,f,g6种肿胀类型(参照上述WHO编写的 检验手册第四版),用b,g的总和来计算肿胀率.A 组和B组精子的肿胀率()分别为67.42?3.85, 48.OO?6.83,差别相比具有显着性意义,P<0.01.详 见表1. 表1A组和B组精子肿胀率的比较(j?.) 注:两组肿胀率相比具有显着灶差异?P<0.01 3讨论 滴虫性阴道炎和尿道炎是一种常见的性传播疾 病,在两性中有较高的发病率,占男性非淋菌性尿道炎 的19.9.Gopalkrishnan等发现男性感染者精液 质量明显下降[3].国内郭永和等L4]报道男性不育者的 滴虫感染率明显增高.虽然已有研究显示阴道毛滴虫 能吞噬精子,并能明显抑制精子活力[1],但对精子 膜功能的研究,国内外均未见报道.HOS是一个基于 完整细胞膜半透性的实验.在低渗条件下,水通过细胞 膜进入精子细胞内,引起细胞内容量增加,原生质膜膨 胀,由此反映出精子膜的完整性和功能正常.1966年 Drevius和Eriksson发现了精子的低渗肿胀现象, 1984年Jeyendran在测定人精子膜功能时使用了 HOS.目前,HOS已成为为数不多的测定精子膜功能 完整性的检测方法之一.在一组研究习惯性流产的男 性精子膜功能的实验中L8],也使用了HOS,并发现习 惯性流产的男性精子肿胀率明显低于正常对照组,作 者据此认为习惯性流产的男性精子膜功能存在不完整 性.精子膜不仅是精子活动和新陈代谢的基础,也是精 子获能和精卵融合等受精过程的基础,HOS与金黄地 鼠卵子穿透试验正相关.因此,我们认为,通过HOS 来预测阴道毛滴虫代谢产物对精子膜功能完整性和潜 在受精能力的影响是合理的. 本文资料显示,阴道毛滴虫浓度在6×1O./I时的 代谢产物与精子孵育后,通过HOS证明精子肿胀率 明显降低,说明精子膜的完整性受到了损害.蔡惠珍 等L9曾经通过电镜观察到阴道毛滴虫可向质膜外排放 溶酶体酶的现象.溶酶体内有5O余种酸性水解酶,包 括蛋白酶,核酸酶,磷酸酶,糖苷酶,脂肪酶,磷酸酯酶 及硫酸脂酶等,在这些酶的作用下,导致细胞膜脂质和 其中的蛋白质结构破坏,损伤了精子膜的化学和生理 功能.Hayashi等u叫在研究滴虫分裂增殖的过程时发 现虫体可以向胞外分泌某些因子,这些因子对滴虫增 殖是必须的,但在本实验中是否参与了对精子膜的损 害,尚不得而知,有待于以后的进一步观察. 通过本次和以往的研究,说明阴道毛滴虫代谢产 物不仅能抑制精子活力,还能损害精子膜功能的完整 性,降低其受精能力,提示临床医生在诊治不孕不育 时,要重视男女双方阴道毛滴虫感染的检查和治疗,特 别是无症状携带者和症状轻微的患者. 【参考文献】 [1]韩青江.刘继红.王涛.等.阴道毛滴虫代谢产物体外对精子活力 的影响口].中华男科学,2004.10(4):272—274. 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