【doc】高效液相色谱法测定复方卡托普利片剂中氢氯噻嗪含量

【doc】高效液相色谱法测定复方卡托普利片剂中氢氯噻嗪含量 高效液相色谱法测定复方卡托普利片剂中 氢氯噻嗪含量 药物鉴定2009年第18卷第l5期 高效液相色谱法测定复方卡托普利片剂中氢氯噻嗪含量 敬永升1,胡海廷,杨珂 (1.河南大学药学院,河南开封475004;2.河南大学制药厂,河南开封475004) 擅要:目的探讨测定复方卡托普利片荆中氢氯噻嗪含量的高效液相色谱(HPLC)法. 方法色谱柱为HypersilCN柱(150mm×4.6mm, 5m),流动相为甲醇一四氢呋喃一水(10:10:80,以磷酸调pH至2.86),流速为 1.0mL/min,检测波长为220nm.结果氢氯噻嗪质量浓 度在26,130I~g/mL范围内与峰面积线性关系良好,线性回归方程为 A=55432C+110698,r=0.9999(n=5);氢氯噻嗪的平均回收率 为100.56%,RSD=0.46%(n=5).结论所用方法快速简捷,可靠,准确度高,重现性好,可 用于测定复方卡托普利片剂中氢氯噻嗪的含量. 关键词:卡托普利;氢氯噻嗪;高效液相色谱法 中图分类号:R927.2;R972+.4文献标识码:A文章编号:1006—4931(2009)15—0018 —02 HPLCMethodforDeterminationofHydrochlorothiazideinCompoundCaptoprilTablets ringYongsheitg,HuHaiting, rJ.PharmaceuticalInstituteofHenanUniversity,Kang,Henan,China475004;2.如 PharmaceuticalFactory,Kaifeng,Henan,China475004) Abstract:0bjecfiveToestablishaHPLCmethodforthedeterminationofhydrochlorothiazid einCompoundCaptoprilTablets.Methods TheHPLCseparationwascarriedoutontheHypersilCN(150mmx4.6mm,5m)columnwith methanol—tetrahydrofuran—water(adjusted topH=2.86withphosphoricacid)(10:10:80)asthemobilephase,anddetectedat220nmwitht heflowrateof1.0mL/min.Results ThegoodlinearitywasdemonstratedbythelinearequationA=55432C+110698(n=5,r=0.99 99)forhydrochlorothiazide.Theaverage recoveryrateofhydrochlorothiazidewas100.56%,RSD=0.46%(n=5).ConclusionThemet hodissimple,reliableandaccuratefor simultaneousdeterminationofhydrochlorothiazide~ Keywords:captopril;hydrochlorothiazide;HPLC 复方卡托普利片含有卡托普利和氢氯噻嗪,是第一代口服有 效的血管紧张素转化酶抑制剂1.笔者采用高效液相色谱(HPLC) 法测定了该产品中氢氯噻嗪的含量,现报道如下. 1仪器与试药 LC—IOAT型高效液相色谱仪(日本岛津);SPD—PAVP检测 器(日本岛津);N一2000型双通道色谱工作站(浙江大学智达信息 工程有限公司).氢氯噻嗪对照品(中国药品生物制品检定所,批号 为10319—0001);复方卡托普利片(市售);甲醇(色谱纯);四氢呋 喃(分析纯);磷酸(分析纯);重蒸馏水. 1周内对上述样品每天各测定1次,计算日间RSD.结果见表1. 2.4人血浆样品测定 选择健康志愿者,静脉输注昂丹司琼3mg后,于不同时间点 抽取血样.各取肝素化血浆样品1.0mL,按供试品溶液制备方法操 作,取4O上清液进样,将测得的峰面积按随行标准曲线计算昂 丹司琼的质量浓度.结果其中某一健康志愿者2,8,24,48h4个时间 点的昂丹司琼质量浓度分别为11.380,8.311,5.865,1.632g/L. 3讨论 3.1萃取条件的选择 曾考察了涡旋振荡时间对血浆中昂丹司琼萃取回收率的影响, 结果涡旋振荡1min时,低质量浓度血浆(O.52—9.06g/L昂丹司 琼)的萃取回收率可达96%,但高质量浓度血浆(30.06—60.04g/L 昂丹司琼)的萃取回收率只有72%左右;涡旋振荡2min时,高质量 浓度血浆的萃取回收率稳定且均达到96%.但涡旋振荡时间过长 (3min),则会产生一定的乳化现象,故选择涡旋振荡时间为2min. 3.2流动相体系的选择 昂丹司琼为碱性化合物,分子结构中含有氨基,故用ODS柱进 行分离时,其色谱峰因亲硅羟基效应而发生拖尾.试验发现,采用 文中流动相,昂丹司琼色谱峰更加对称,与血浆中代谢物等有关杂 质可达基线分离,且分析时间适中,故以此作为流动相. ? 18? 2方法与结果 2.1色谱条件与系统适用性试验 色谱柱:HypersilCN柱(150mm×4.6mm,5txm);流动相:甲 醇一四氢呋喃一水(10:10:80,以磷酸调pH至2.86);检测波 长:220nm;柱温:室温.在此条件下的色谱图见图1. 2.2溶液制备 精密称取氢氯噻嗪对照品6.50mg,置25mL量瓶中,用甲醇 溶解并稀释至刻度,摇匀即得质量浓度为260~g/mL的氢氯噻嗪 对照品溶液.取复方卡托普利片10粒,精密称定,研细,精密称取 3.3溶剂对血浆样品色谱行为的影响 用液一液萃取法分离纯化血浆样品,可大大提高方法的灵敏 度,同时操作也比较方便,因而在生物样品分析中已得到了广泛应 用.在磷酸盐缓冲液中,用甲醇萃取分离人血浆中昂丹司琼,萃取 回收率高,昂丹司琼色谱峰峰顶分裂;而用流动相作溶剂时,其色 谱峰尖锐对称.作为生物药物分析中的一种普遍现象,Bahlund等 和Hoollardt"曾从不同角度阐述了产生血药色谱峰形变的原因,根 据文中血药色谱峰形变的表现形式来看,Hoollard的理论似乎更能 解释试验结果.因此笔者认为,流动相的干扰可能是导致血浆中昂 丹司琼色谱峰形变的主要原因. 参考文献: [1]王哲海,陈黎.5一羟色胺及其拮抗剂的研究进展[J】.国外医药?合 成药,生化药,制剂分册,2000,18(2):76. [2]BahlundKG,ArvidssonT.Eliminationofpeakdeformationintheliquid chromatographicseparationofastronglyprotein—-bounddrugfromdi?? rectlyinjectedbloodplasmasamples[J].JChromatogr,2003,285:327. [3]HoollardGA.Effectofprecipitatingagentsontheanalysisofmetroni- dazolebyhigh—performanceliquidchromatography[J].JChromatogr, 2000,356:565. (收稿日期:2009—03—05;修回日期:2009—05—22) 中国药业ChinaPharmaceuticals 2009年第18卷第l5期 04812 A I.氢氯噻嗪2.卡托昔利 A.对照品溶液B.供试品溶液 图1高效液相色谱图 细粉适量(约相当于121mg)置10mL量瓶中.加流动相适量,超声 处理30min,溶解后用流动相定容.用0.45m滤膜过滤,取续滤 液作为供试品溶液. 2.3方法学考察 线性关系考察:精密量取质量浓度为260txg/mL的氢氯噻嗪 对照品溶液1.O0,2.O0,3.O0,4.O0,5.O0mL,分别置10mL量瓶 中,用流动相定容作为系列标准溶液.进样测定,以峰面积(A)对质 量浓度(c)进行线性回归,得氢氯噻嗪回归方程为A=55432C+ 110698,r=0.9999(n=5).结果表明氢氯噻嗪质量浓度在26— 130~g/mL范围内与峰面积线性关系良好. 精密度试验:取线性关系考察项下的对照品溶液,连续进样 5次,色谱图.结果峰面积的RSD为0.52%(I1,=5),表明方法 精密度较好. 稳定性试验:取同一供试品溶液,每隔2h进样1次,连续考察 12h.结果峰面积的RSD为1.32%(n=7),表明供试品溶液在12h 内稳定. 重现性试验:取同一批供试品溶液2O各5份,按上述色谱 条件依次进样,记录色谱图.结果含量的RSD为0.70%(n=5),表 明方法重现性较好. 加样回收试验:精密量取已知含量的供试品溶液5mL,置10mL 量瓶中,共5份,分别精密加入线性关系考察项下第3个质量浓度 点溶液5mL,混匀,依法测定,计算加样回收率.结果见表1. 2.4样品含量测定 取3批样品各10粒,按2.2项下供试品溶液配制方法制备供 试品溶液,按2.1项下色谱条件每份进样3次,每次20,根据回 表1氢氟噻嗪加样回收试验结果(/Z=5) 药物鉴定 归方程由峰面积计算样品含量,结果批号为07060412,07060612, 07070412的样品平均含量分别为71.92,71.98,71.88mg/g(n=3). 3讨论 《中国药典(二部)》对复方制剂中有效成分氢氯噻嗪的含量测 定采用紫外分光光度法"】,虽然结果比较准确,但存在取样量大的 缺点.相关文献1中,以HPLC法测定复方卡托普利片剂的含量, 多采用国产Cs色谱柱,以甲醇一水一磷酸,9%四氢呋喃的甲醇溶 液一0.05%磷酸缓冲液或磷酸二氢钠溶液一甲醇一乙腈为流动 相,但氢氯噻嗪峰形较差,对测定的准确度有一定影响.笔者所用 HPLC法测定复方卡托普利片剂中氢氯噻嗪的含量,流动相配比简 单,分析时间短,操作简便,测定方法的线性关系好,准确度高,稳 定性好,可用于该样品的含量测定. 作者简介:敬永升(1964,),男,河南开封人,讲师,从事药物 分析的教学与科研工作,(电子信箱)yshjing@henu.edu.cn. 参考文献: [1】国家药典委员会.中华人民共和国药典(二部)[M】.北京:化学工业出 版社.2005:424—425. [2]邬方宁,刘树春.HPLC法测定复方卡托普利片的含量[J】.天津药学, 1997,9(2):64—66. [3]王宜祥,杨汉中,吴韶铭.复方卡托普利片中卡托普利和氢氯噻嗪的 HPLC测定【J].中国医药工业杂志,2003,34(8):404. [4】陈丽芳,陈国锐.卡托普利片中卡托普利二硫化物HPLC测定法的改 进[J】.海峡药学,2002,14(3):33. [5]黄滔敏,刘振,沈丽萍,等.卡托普利片含量及有关物质测定方法[J】. 复旦(医学版),2004,31(4):429. (收稿日期:2009一O1—20;修回日期:2009—02—23) 5种医院制剂微生物限度检查法的方法学验证 林琼芳,丘进 (1.广西壮族自治区玉林市骨科医院,广西玉林537000;2.广西壮族自治区玉林食品药品检验所,广西玉林537000) 摘要:目的建立5种医院制剂的微生物限度检查方法.方法采用药典规定的常规法和培养基稀释法对跌打散,十味散,一方散,风湿散和 外敷一号液进行5种茵株的回收率试验和控制菌检查方法验证.结果采用常规法的回收率只有外敷一号液小于70%,其余制剂均大于 70%,说明外敷一号液对细茵有一定的抑制作用,但通过培养基稀释法可消除其对细菌的抑制作用;其余4种制剂对细菌及真茵均无抑制 作用.控制茵采用常规法即可检出.结论跌打散,十味散,一方散,风湿散的细茵及真菌检查可采用常规法;外敷一号液细茵检查可采用培 养基稀释法,真菌检查采用常规法;5种制剂的控制茵检查均采用常规法. 关键词:微生物限度检查;抑茵作用;方法学验证 中图分类号:11286.0文献标识码:A文章编号:1006—4931(2009)15—0019一O2 微生物限度检查是药品安全性检查的重要项目,检查项目包 括细菌数,霉菌数,酵母菌数及控制菌检查….但具有抑菌成分的 药品由于其抑菌活性的干扰,常规检查结果不能真实地反映出药 品中污染微生物的情况,为了确保微生物限度检查法的科学性和 结果的准确性,2005年版《中国药典(一部)》规定药品的微生物限 度检查应进行方法学验证.笔者通过对5种医院制剂的微生物限 度检查进行方法学验证【21,建立了一种准确,可行且有效的检验方 中国药业ChinaPharmaceuticals 法,报道如下. 1试验材料 菌株:枯草芽孢杆菌[CMCC(B)63501】,黑曲霉[CMCC(F)98003], 大肠埃希菌【CMCC(B)44102】,金黄色葡萄球菌[CMCC(B)26003], 铜绿假单胞菌[CMCC(B)10104】,白色念珠菌[cMcc(F)98001],均 由中国药品生物制品检定所提供. 样品:跌打散(批号为20070301,20070305,20070307),十味散 ? 19?