鞘内注射布托啡诺对神经病理痛模型(SNI)大鼠痛阈及脊髓背角NMDAR

鞘内注射布托啡诺对神经病理痛模型(SNI)大鼠痛阈及脊髓背角NMDAR 中南大学 硕士学位论文鞘内注射布托啡诺对神经病理痛模型(SNI)大鼠痛阈及脊髓背 角NMDAR表达的影响 姓名:魏晓洁 申请学位级别:硕士 专业:麻醉学 指导教师:郭曲练 20061101硕士学位论文 中文摘要 鞘内注射布托啡诺对神经病理痛模型(,…)大鼠痛闭及脊 髓背角,,,,,表达的影响 摘要 目的;本研究拟采用免疫组织化学方法，观察,,，(,,,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,,，,,，)模型大鼠脊髓背角神经元,,,,,的表达，以及鞘内注射布托啡诺对,,，模型大鼠痛阈及脊髓背角,,,,,表达的影响。 方法:健康雄性,,:,鼠,,只，体重,,,,,,,,，随机分为,组:对照组(,,组，,,,)，假手术组(,,组，,,,)、生理盐水组(,,组，,,,)、布托啡诺,, , ,组(,,组，,,,)、布托啡诺,, , ,,,,(,,组，,,,)。,,组不做任何处理，其它,组均根据改良,,,,,法进行鞘内置管。置管,天后，;,组在大鼠的左腿后外侧依次分开皮肤和肌肉，暴露坐骨神经及其三个分支，然后依次逐层缝合肌肉和皮肤;其它置管的,组则建立神经病理性疼痛模型(,,,)，制模,天后，,,组和,,组用,, ,， ,微量注射器鞘内注射,, , ,生理盐水，,,、,,组则分别用微量注射器鞘内注射,, , ,布托啡诺,,、,, ,， ,，然后用,, , ，,,理盐水冲管(共,, , ,)。在,,,,,后，,,组、,,组、,,组和,,组均进行疼痛行为学观察。,组均在注药后,,处死大鼠，用免疫组化法观察大鼠腰,节段水平脊髓背角,,,,,的表达。 结果: (,),,组和;,组在各时点均无机械性异常疼痛出现，热刺激后爪退缩潜伏时间也均无统计学意义(,,,(,,);(,),,组，硕士学位论文 中文摘要,,组和,,组在,,，手术后第,天和第,天出现明显的痛觉过敏(机械性异常疼痛痛阈降低)，与对照组比较有统计学意义(,,,(,,)，但对热刺激的后爪退缩潜伏时间与对照组比较无统计学意义(,,,(,,); (,),,组在注药后,,,,,使痛阈明显提高，与注药前比较有统计学意义(,,,(,,)，并且能使热刺激后爪退缩潜伏时间明显延长，与其它组别比较有统计学意义(,,,(,,); (,),,组大鼠脊髓背角,,,,,,免疫阳性细胞数量与对照组比较明显增加，,,组和,,组的阳性细胞数量与,,组比较阳性细胞数量减少，并且两者之间也有统计学差异(,,,(,,);(,),,组的脊髓背角,,,,,免疫阳性细胞数密度值与对照组相比显著增高(,,,(,,)，,，组和,,组与,,组相比,,,,,，阳性细胞的数密度大小及分布减少，并且两者之间也有统计学差异(,,,(,,)。,,组，,,组和,,组的阳性细胞光密度值较;,组和;,组增高(,,,(,,)。 结论:(,),,，模型可引起大鼠损伤侧肢体机械性痛觉过敏，但对热刺激不敏感; (,)鞘内注射,,,,布托啡诺可减轻,,，模型大鼠痛觉过敏，且呈剂量依赖性;(,),,，模型引起大鼠脊髓背角神经元,,,,,表达上调;鞘内注射布托啡诺可降低,,，大鼠脊髓背角神经元,,,,,表达上调。 关键词:神经病理痛，布托啡诺，脊髓，鞘内，,,甲基,,一天冬氨酸受体 ? 硕士学位论文 英文摘要 ,,,,;,, ,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,?, ,,,, ,,,,,,,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,, ,; ,,,,; ,,,,, ,,,,,,;, ,,,,,,,,,:,,, ,,,,,,, ,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,, ,,,,;, ,,,,:,,,,,,;,, ,,,,,,,,,,, ,, ,,,?, ,,,, ,,,,,,,,, ,,, ;,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,, ,, ,;,,,,; ,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,,,,,,( ,,,,,,,:,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,,,,, ,,,,(,,,,,,,,),,,, ,,,,,,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,(,,,，,, ,,;, ,,,,,):;,,,,,, ,,,,,(,,,,, ,， ,,, ,,,,, ;,)，,,,,,, ,,,,,, ,,,,,(,,,,, ,,)，,,,,,,,,,,, ,,垤, , ,)，,,,,,,,,,,, ,,坞,,,,,(,,,,,(,,,,, ,,,,,,)(,,,,, ,,,,,?, ,,,,,,,,, ,,,;,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,,(,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,;,,,,,,,, ;,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,,,,,,,,,,,(,,,,, ,,,),;;,,,,,, ,, ,,, ,,,,,, ,,,,,,,(,,,,, , ,,,,，,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,,,,, ,, ,,,, ,;,,,,; ,,,,, ,,, ,,, ,,,,;,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,;,,, ,,,,证,,,,, ,,、,,,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,,;,,,,, , ,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,, ,,, ,;,,,,; ,,,,,(,,,,,, ,,, ,,,,,,, , 里坠苎墅坚堡生———一一( ——、 —————————————,————————————————————,——————————一,„,, 茎奎塑墨 ,,,,,,,, ,,,,,,),,,,,,, ,,, ,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,,,,;,(,,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,，,,，)(,,,,, ,,，,,,,, ,,、,,,,,,, ,,, ,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,;,,, ,,,,, ,,,,,, ,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,,(,,,, ,,, ,,,,),,,,,,,, ,, ， ,,, ,,,,,, ,,,,,, ,,,,, , ,,,, ,,,,,,,,,,,,，,,,,,;,,,,,,(,,;,,,,;,, ,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,; ,,,, ,,,, ,,,,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,, ,, ,,, ,，, ,,,,,,,,,,,, ,,, ,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,;,,,,(, ,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,;,,,,，,,, ,,,, ,,,, ,,,,,,，,,, ,,, ,, ,,,,,, ;,,, ,,,, ,,,,,;,,, ,,, ,,,,,,,，,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,;,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,,,;,,,,;,, ,,;,,,？,,,( ,,,,,,:(,)，, ,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,，,,,,, ,,,, ,, ,,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,, ,,,,,,,,,(,,,(,,);(,),,,,, ,,,, ,,,,,,,;,,,,,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,,, ,,，, ,，,,勰;,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,，,,(,,,(,, ,, ,,, ,，,,,,,,,,,,,,,(,,, ,,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,,,, ,,,,,;, ,,, ,,;,,,,, ,, ,,,,, ,,,,,, ;,,,,,,,, ,,,, ,,,, ,,，,, ,,,,, ,,，,,(,,,(,,);(,)，, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,, ,,,,,,,,;, ,, ,,,,,,,,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,;,,,, ,,,, ;,,,,,,, ,, ,,,,,,,,;,,,, ,,,,,,(,,,?,,)，,,, ,,,,,,, ,,,, , ,,,,,,,,,, ,,,,,;, ,,, ,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,;,,,,, ,,,,,,,,,(,,,(,,);(,),,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,,,,,,, ,, ,,, ,,,,,,,;,,, ,,,,,,, ,, ,,, ,, ,,,,,, ;,,, ,,, ,,,,,,,;,,,,,,,;,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,(, ? 硕士学位论文 英文摘要 ,,?,,)(,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,,,,;,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,,,, ,,,,;,,,,,, ,,,,,,,;,,,,, ;,,,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,,,, ,,，,,, ,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,;, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,, ,,(,,,(,,);(,),,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,, ？,,,,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,,,,,, ,,,, ,,,,, ,, ,,,,, ,, ,,, ,,(,,,(,,)，,,, ,,, ？,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,,,, ,,,,, ,, ,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,, ,,, ,,,,, ,,，,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,, ？,,,,,,, ,,,,,,, ,,, ,,,, ,,,,,,,,,(,,,(,,)(,,,,,,,,,,,,;,,,, ,,,, ,,,,;,, ,,,,,,, ,, ,,,,, ,,, ,,,,,, ,, ,,，,,,,, ,,,,, ,,,, ,,,, ,，, ;,,,,,, ,,,,,(,,,(,,)( ,,,;,,,,,,,:(,),,,,,,,,,,, ,,, ,, ;,,,,, ,, ,,, ,,,,,,, ,,,,,,,,, ,, ,,,, ,,,,,,, ,, ,,,,,, ,,,,, ,,,,, ,, ,;,,,,; ,,,,,;(,)，,,,,,,,;,, ,,,,,,,锄,,(,, ,(, ,) ,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,, ,, ,,,,,,,,,,;,,,, ,,, ,,, ,,,,,, ,,, ;,,,,,,,,,, ,,,, ,,, ,,,,;,;(,),,, ,,,,,,,,,,,, ,,,, ,,;,,,,, ,, ,,,,,, ;,,, ,, ,, ,,,,,,,,, ,,,,,,,,, ,,,,,, ,,,,,,,,,,, ,, ,;,,,,; ,,,,, ,, ,,, ,,, ,,,,,,,,;,, ,,,,,,,,,,, ,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,,(,,, ,,,,,:,,,,,,,,,,; ,,,,;,,,,,,,,,,,;,,,,,, ;,,,;,,,,,,,,;,,;,。,,,,,,—,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,(,,,,,) , 原创性声明 本人声明，所呈交的学位论文是本人在导师指导下进行的研究工作及取得的科研成果。尽我所知，除了论文中特别加以标注和致谢的地方外，论文中不包含其他人已经发表或撰写过的科研成果，也不包含为获得中南大学或其他单位的学位或证书而使用过的材料。与我共同工作的同志对本研究所作的贡献均已在论文中作了明确的说明。 作者签名:丝堕造日期 五年,～月二互日 关于学位论文使用授权说明 本人了解中南大学有关保留、使用学位论文的规定，即:学校有权保留学位论文，允许论文被查阅;学校可以公布学位论文的全部或部分内容，可以采用复印、缩印或其它手段保存学位论文;学校可以根据国家或湖南省有关部门规定送交学位论文。作者签名:差幽导师签名:社日期—塑业月(丛日硕士学位论文 第一章前言 第一章前言 外周躯体感觉神经或神经根损伤常引起疼痛和痛觉过敏，如腰背痛、坐骨神经痛等，是较常见的神经系统疾病，损伤后常伴有持续的顽固性疼痛。属临床神经病理痛，疼痛的特征表现为自发性锐痛，灼痛和电击样痛，疼痛超敏反应包括触觉异常性疼痛，针刺痛觉增敏和和痛觉过敏,,。由于上述特点，神经损伤性病理痛可给患者带来极大的痛苦伽。一些研究已经尝试建立相应的神经损伤动物模型，来模拟,，缶床上一些疼痛的特征。这些模型中现在较常用的包括慢性缩窄性损伤模型硼(,,,,,,, ,,, ,,,，,,,,)或部分坐骨神经结扎模型嘲(,,,,,,, ,, ,,(，,,,,)(但是这两个模型损伤程度的复制困难从而导致它们变异性大。而,,,,,〔,,的脊神经结扎(在,,和,,脊神经结扎)，也存在着对,,脊神经损伤或暴露时引起感染的风险。 本研究拟采用的大鼠坐骨神经分支选择结扎切断模型(,,,,,, ,,,,, ,,,,,,,,,，,,，)，是由美国哈佛医学院的,,,,趿其研究组川于,,,,年建立，该模型可观察损伤的初级神经元与临近未受损伤的初级传入神经元的变化，它容易执行且能使损伤程度的变异性减少到最小。机械性异常痛敏表现显著为该模型的一大特点，其于术后,天出现明显的机械性痛敏，,周降到最低，并可持续较长时间(该模型还有一显著特点即热刺激可引起大鼠屈足时间延长但无热痛阈的改变。由于其有确实存在而且较长的机械敏感变化和热刺激反应，所以能够提供接近模拟临床神经性疼痛的许多特征，是一种较理想的疼痛模型。 ,,甲基一,,天冬氨酸受体(,,,,,,,,,,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,，,,,,,)是目前研究最为深入的兴奋性氨基酸(,,,,)受体之一，它与慢性神经病理性疼痛的发生机制密切相关(,,,,,是膜 相关鸟苷酸激酶(姒,,,【)作用的靶位蛋白质，表达于突触后膜…，调节多种生理和病理过程，包括中枢神经系统的疼痛信号的传导和处理嘲，尤其是持续较长的伤害性刺激的信号传导(外周神经损伤后，;纤维末端可释放谷氨酸等兴奋性氨基酸，与,,,,,结合使之激活而产生兴奋性突触后电位“”。一方面增加了,,，和,，的通透性，更多的则是增加了,,,，通透性，结果使细胞内,,,，浓度增加，后者可以激活蛋白激酶;发生膜转位，,,,,,磷酸化，使受体的功能进一步上调，最终使合成的受体蛋白增多以适应与释放的谷氨酸等兴奋性氨基酸结合发挥神经元兴奋性作用。另外,仍,,是一种离子通道复合体，过度激活后，相藕联的;,,，，,矿， ,，的通透性也随之增加，;,,，内流增加，又加速了钙依赖性兴奋性氨基酸释放，从而引起脊髓的可塑性变化，使信号得以长时间维持，导致中枢敏感化〔,,，,,〕(因,啦心仍，,在脊髓水平痛觉传递和调制中起着重要作用(硕士学位论文 第一章前言 酒石酸布托啡诺(,,,,,,,,,,, ,,,,,,,, ,,,,;,,,,)其化学名称为:左旋(()一,,(环丁基甲基,,，,,,二羟基吗啡喃,,(()一酒石酸(,:,)盐。人工合成的布托啡诺于,,,,年被首次报道，因其在使用临床有效的镇痛剂量时并不产生明显的致幻副作用而受到关注。布托啡诺是一种混合型阿片受体激动剂，主要激动静阿片肽受体，对,受体则具有激动和拮抗双重作用，对,(受体活性也很低“”。其镇痛效应强，在采用双盲对照法比较药物肌注后镇痛效果的相对功效测定中显示: ,(,倍“”、哌替啶的,,,,,倍“”、布托啡诺的镇痛效力分别是吗啡的,(,— 镇痛新的,,倍。就镇痛作用维持时间而言，布托啡诺与吗啡、哌替啶及镇痛新相当“”。由于布托啡诺的以上特点，所以被应用于许多外科手术的术中和术后镇痛“?嘲，并且也作为一种局麻药的联合用药应用于硬膜外麻醉九。但是它对神经病理性痛的作用研究甚少，本实验应用,,，模型，拟观察鞘内注射布托啡诺对神经病理性痛大鼠行为学的影响，并采用免疫组化的方法检测大鼠脊髓背角,,,,,表达的变化，在分子水平进一步的阐明神经病理痛的机制，并探讨布托啡诺对神经病理痛的机理。 ,堡主堂垡丝塞星三童塑空鎏墼塑堑堕堂型盔基塑丝丝壅堑堡型【婴笪堕塑墼堕丝塑塞 第二章鞘内注射布托啡诺对大鼠神经性疼痛模型(,,，) 的镇痛效应的观察,材料与方法,(,主要仪器与材料钻石牌机械秒表 上海秒表厂聚氨基甲酸乙酯鞘内微导管(,,,,,,,,,,, ,,;,,,,,,, ;,,,,,,,,，内径,(,,,,，外径,(,,,,,) 美国,，,的丝线 国产,,,,,,,,热刺激仪 中国医学科学院生物医学工程研究所,,,;,,,,,; ,,, ,,,,刺激仪 ，，,, ，,;(美国微量注射器(,,,、,,,、,,,) 上海医用激光仪器厂,,主要试剂酒石酸布托啡诺注射用干粉(不含防腐剂，用无菌水稀释,,,,,,,,,) 江苏连云港 新晨医药有限公司提供,(,,的生理盐水注射液 湘雅医院药剂科,,,的水合氯醛 湘雅医院药剂科注射用青霉素钠 华北制药有限公司,,实验动物 ,,只纯种清洁级雄性,,大鼠(由中南大学湘雅医学院动物学部提供)，体重,,,,,,,,，实验动物单笼饲养适应环境,天后进行实验，饲养环境温度为,,士,?，正常昼夜节律，避免强光、噪音刺激，动物可以自由的进食和饮水(,(,实验动物分组 ,,只大鼠在适应环境,,后，随机分为,组:对照组(,,组，,,,)，假手术组 (,,组，舻,)、生理盐水组(,,组，,,,)、布托啡诺,,,, ,组(,，组，,, ,)、布托啡诺,,,, ,,,,(,,组，,,,)(,，组不做任何处理，其它,组均根据改良,,,,,法进行鞘内置管。置管,天后，,,组在左腿后外侧依次分开皮肤和肌肉，暴露坐骨神经及其三个分支，然后依次逐层缝合肌肉和皮肤;其它置管的,组则建立神经病理性疼痛模型(,,，)，制模,天后， ,,组和,,组用,, ,， ,微量注射器鞘内注射,,,, ,,:理盐水，,,、,,组则分别用微量注射器鞘内注射,,,， ,布托啡诺,,、,,, ,，然后用,,,, ,生理盐水冲管(共,,,, ,)(在,,,,,,后，;,组、,,组、,,组和,,组均进行疼痛行为学观察。,(,大鼠鞘内置管 按改良,,,,,乜,,给大鼠进行鞘内置管，,,只实验大鼠腹腔注射,,,的水合氯醛 (,,,(,,,,,,,,)麻醉后，俯卧位四肢固定在鼠板上，常规消毒铺巾后，于后枕部正中线切开皮肤，钝性分离颈部肌肉，充分暴露寰枕膜，用无齿镊夹住颈部皮肤使大鼠头部向前稍倾(注意避免呼吸道受压)，用,,,无菌注射针头小心挑开寰枕膜一个小口(针孔大小，挑时小心，防止损伤脊髓)，看见有清亮脑脊液外漏，并随大鼠呼吸而运动，小心置入无菌的,,;,,,,,,,,导管至脊髓腰段。置管过程中，尽量使大鼠脊柱伸直，进管稍慢，如遇阻力，则稍退管芯或适当调整方向，确误强力进管，以防置入脊髓。置管深度,;,，导管外露端与一长约，;,的聚乙烯管相连固定(用于鞘内给药)，逐层缝合肌肉皮肤，肌注青霉素,,,万单位,天连注三天以预防感染。取无运动障碍的大鼠于置管,,后鞘内注射利多卡因,, , ,，如注药后,,,内未见双下肢麻痹，则放弃不用。动物单笼饲养,,后，即用于,,，模型制作。,(, ,,，模型制作 在鞘内置管,,后，,,组、,,组和,,组的大鼠按,,,,,等,,】方法制作模型，手术方法具体如下:在腹腔注射,,,的水合氯醛(,,,(,,,,,,,,)麻醉后，俯卧位于鼠板上，常规消毒铺巾后，于左侧大腿外侧边平行于大腿划开皮肤，然后断开股二头肌，充分暴露坐骨神经和它的三个末端分支:腓肠神经，腓总神经和胫神经。用,,,丝线把腓总神经和胫神经分别紧结扎，在靠近结扎的远侧端切断，保留大约,((,,,,的远侧残端;保留腓肠神经完整(需要特别小心尽量避免对腓肠神经任何损伤)，然后分层缝合肌肉和皮肤(见附图,(,)。肌注青霉素,,,万单位以预防感染。动物单笼饲养即可用于实验。,(, 行为学观察,(,(,一般行为学观察 所有的,,大鼠在术前和术后均检测其体重，作为健康状况的评价。在术前及术后期间，将,,大鼠放在一个上方敞开的长方形大透明玻璃盒内，观察其行走状态及休息时的姿势。按照,,,,,,,, ;,,提出的评价方法进行评估:,级正常运动行为，无后爪畸形;,级正常运动行为，但明显有后爪畸形;,级轻度运动行为异常，有垂足现象;,级严重运动行为异常，术侧后爪瘫痪。,(,(,机械性异常疼痛 每组大鼠均在实验前用,,,;,,,,,; ,,, ,,,,刺激仪测量左后爪跖的外侧面 (腓肠神经区域)和内侧面(隐神经区域)的机械性刺激痛阈，,,，术前第,天和第,天测定作为基础值，术后每天均测定机械性异常性疼痛痛阈，测定时间均为上午,点到,,点。,,组、,,组、,,组和,,组则均在注药后测定机械性异常性疼痛痛阈。测量方法:将大鼠放在一个有透明有机玻璃盒罩的金属框架上，盒的底面为 ,有孔的金属网格，用,,,;,,,,,; ,,, ,,,,单纤丝一连串的上行力刺激老鼠后爪的跖表面(外侧面和内侧面)，上行力量为由轻逐渐增强，直致后爪出现一个敏锐的回缩，然后下电子 显示屏上的数字，作为机械性刺激痛阈，连续测量三次，每次间隔,一,,,,,，取其平均值作统计学， (操作见附图,,,)(,(,(,热痛敏测定 各组实验大鼠，于实验前和术前均先测定双侧足底部抬腿潜伏时间(即基础值)，然后各组实验大鼠于手术后第,，,天分别测定。;,组、,,组、,,组和,,组大鼠于注药后分别测定其抬腿潜伏期。抬腿潜伏期的测定:参照,,,,,,,,,等嘲方法采用,,,,,,,,型热痛测试仪(中国医学科学院生物医学工程研究所研制)测定。测定时环境温度恒定于,,,,,(;。在安静的环境下，将矩形检测支架放在平滑的桌面上，支架顶部放一块约,,,厚的普通无色玻璃平板，其上放一上下开口透明的有机玻璃观测盒，容积,,×,,×,,;,,，将辐射热光源置于观测盒下，调节辐射热灯泡与玻璃平板的距离，使光线在平板上界聚焦，光斑直径,,，在测定痛闽前先将待测大鼠放入观测盒内适应,,,,,分钟，待大鼠安静后(注意保持观测盒内清洁干燥)，将聚光光源置于大鼠后足底的测定位置测定抬腿潜伏期(操作见附图,,,,,)，从记录开始到抬足时间以,,秒为最大阈值，如超过,,秒，则停止照射，以防大鼠足底局部烫伤。每次照射间隔,—,,分钟，连续测量,次，最后取平均值作为该侧抬腿潜伏时间。,(,统计学处理 计量资料数据以均数?标准差(,?,)表示，采用,,,,,,(,统计软件进行数据处理，统计学方法采用完全随机设计单因素方差分析和非参数配对符号检验分析，,,,(,,认为有统计学差异。, 结果,(,行为学观察,(,(,一般行为学观察 可见,,，术后动物出现受伤侧不堪负重，术侧足外翻畸形，并出现相应的姿势改变(见附图,,—,,)，除有,只大鼠的活动评级达到,级外其余大鼠评级都在,级;在实验观察过程中，动物在休息或活动时患侧后爪偶然接触笼面，会发生明显的缩足反应，大部分的老鼠(,,,,,)可在无任何刺激的情况下发生自发性的缩足发射。在整个观察期间无动物自残现象，术前各组之间大鼠体重无明显差异，手术后各组老鼠体重也正常增长，相比较无统计学差异(,,,(,,)(另外在研究期间动物的进食及饮水睡眠均正常。,(,(,机械性异常疼痛 胫神经和腓总神经结扎切断后，,,，模型大鼠后爪跖外侧面(腓肠神经区域)巫兰堂鱼鲨蔓墨三至塑喧生堑塑堑里～堡堕丕垦塑丝些鉴塑堡型(,丝～)盟堡塑鏊堡盟型窒和内侧面(隐神经区域)的,,, ,,,,机械性刺激出现痛敏反应;,,，操作后第,、,天，,,组，,,组和,,组与术前基础值比较刺激痛阈明显下降，相比较差异有统计学意义(,,,(,,);其中大鼠后爪跖外侧面(腓肠神经区域)相对于内侧面(隐神经区域)刺激的痛阈下降更加明显，相比较有统计学意义(,,,(,,)。,,组和,,组在注药后,,,,,与注药前相比差异无统计学意义(,,,(,,);,,组在注药后,,,,,与注药前相比差异有统计学意义(,,,(,,);而,,组和,,组则在这些检测时段的刺激痛阈变化无统计学意义(,,,(,,)，具体见表,，,及图,，,。 表,各时间段人鼠左后爪跖外侧面的,,, ,,,,刺激痛阈(单位,?,?,)，与术前比较,,,(叭(,与,，组和,,组比较,,,(,, ,, ,, , ,, ,,,,,,,,,,,组 娶,, ——,—,,组 篓,, 一一一???,,组 台 —,,,,组 皇,, 一,,,,,组 星,, ,, , ?‖‖爹‖歹歹 时间 图,并组犬鼠左后爪趾外侧面在各时间段,,, ,,,,束,,激痛阈变化 ，与术前比较,,,(,,，拌与,,组和,,组比较,,,(,, ,塑主堂鱼鲨塞釜三童塑凼鎏盟 查堑旦,堂型厶匦塑丝丝壅塑堡型,型坠丝焦塑塑鏖塑堡塞 表,各时间段大鼠左后爪跖内侧面的,,, ,,,,刺激痛闽(单位,，, ,,,)术前第,天 ,,(,,?,,(,, ,,(,,?,(,, ,,(,,土,(,, ,,(,,?,(,, ,,(,,士,(,, ,,(,,?,,(,, ,,(,,?,(,, ,,(,,土,,，,,术前第,天 ,,(,,?,,，,, ,,(,,土,,(,,术后第一天 ,,(,,?,,(,, ,,(,,?,(,, ,,(,,?,(,,。 ,,(,,?,(,,? ,, ,,?,(,,?术后第,天 ,,(,,?,,(,, ,,(,,?,(,, ,,(,,土,(,,? ,,(,,?,(,,? ,,(,,土,(,,? .