胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究

胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究 胃复春片对幽门螺杆菌抑制作用的实验研究 【关键词】 幽门螺杆菌 近年来，临床治疗幽门螺杆菌(Helicobacter pylori，Hp) 遇到了很大困难，Hp耐药的问题日益严重，如何选择更有效的西药和研究中药对 Hp的治疗，是摆在消化科医生面前的重要任务之一。本实验选用中药胃复春片对 Hp的体外试验，旨在探讨中药胃复春片对幽门螺杆菌可能的抑制作用和临床意义。 1 与方法 1.1 实验材料 (1)菌种: Hp菌株NCTC11637由浙江大学医学院病原生物学系医学细菌研究室提供。近期从临床胃炎或消化性溃疡患者胃黏膜活检标本中分离了60株 Hp，经系统细菌学鉴定证实为 Hp后保存于-70?。 (2)药物: 受试药物胃复春片由杭州市胡庆余堂药业有限公司生产，每片重0.359g; 批号060618;国药准字 Z20170003。对照药丽珠得乐(枸橼酸铋钾颗粒)，由丽珠集团丽珠制药厂生产，国药准字H10900086。将胃复春片碾成粉末，加灭菌蒸馏水4?浸泡24h，滤除残渣，100?水温15min灭菌。枸橼酸铋钾颗粒先用灭菌蒸馏水溶解，然后0.22μm滤膜过滤除菌。上述试验药和对照药再用灭菌蒸馏水配制成所需浓度的溶液。 1.2 实验方法 (1)细菌培养基: 采用含5%脱纤维羊血的哥伦比亚琼脂(法国梅丽埃公司)，作为分离和培养 Hp的培养基，同时该培养基也作为药敏试验的基础培养基。脱纤维羊血购自杭州康裕贸易有限公司， Hp培养时环境气体条件是5%O 2、10% CO2及85% N2(杭州特种气体厂提供)。 (2)药敏试验培养基: 将上述哥伦比亚培养基加热充分溶解，冷却至60?左右时加入终浓度为5%脱纤维羊血，再分别加入不同稀释度的上述药物溶液，使培养基所含药物的浓度分别为0.00 5、0.0 1、0.0 2、0.0 4、0.0 8、0. 16、0.3 2、0.6 4、 1.2 8、2.5 6、5. 12、10.24 mg/ml，倾注平板，37?孵育24 h检菌合格后置4?备用。 (3)药物最低抑菌浓度(MIC)测定: 采用二倍平皿稀释法。刮取新鲜培养的 Hp菌苔，用灭菌生理盐水充分混匀，用麦氏比浊法配制成1×107/ ml的菌液。取各菌液5μl点种于含药物的平板上，37?培养72h后观察结果。以50%和90% Hp菌株的生长被抑制为该药物的50%最低抑菌浓度(MIC50)和90%最低抑菌浓度(MIC90)。实验中同时设置不加任何药物、正常培养的对照。 2 结果 正常对照中60株 Hp均生长良好。受试药胃复春片和对照药丽珠得乐对60株 Hp临床分离菌株和标准菌株NCTC11637的MIC测定结果见1。表1 胃复春片和丽珠得乐对60株Hp及NCTC11637的MIC测定结果(略) 3 讨论 Hp是一种微需氧的革兰阴性螺旋形细菌，主要栖居于人胃黏膜的黏液层，被认为是慢性胃炎、消化性溃疡的重要致病因素，并与胃癌的发生也有一定关系。新近研究发现Hp感染与胃肠外疾病如心血管疾病等也有一定相关性。因此，Hp感染及其相关疾病已成为一个严重的问题。Hp在人群中感染率约为60%,70%，慢性胃炎或消化性溃疡患者中可高达70%,90%左右。人胃是Hp感染的主要栖居场所。随着对抗Hp感染治疗的深入，发现 Hp耐药的问题日益严重。据国外资料报道，Hp对克拉霉素的耐药率在3%,14%,,,,,，对甲硝唑的耐药率在20%,40% 80%,,,。国内资料显示，克拉霉素的耐,,,，某些发展中国家可高达50%, 药率为6.1%,25%,,,,,，且有上升的趋势。