抗体效价测定操作规程

抗体效价测定操作规程 操作步骤: 一( IgG类 1. IgG类抗体效价滴定，须取适量血清200μL加等体积2—Me 溶液混合，封口，置37?水浴箱作用60分钟，先稀释血清: 200μL病人血清+600μL生理盐水备用排列6支试管按顺序 编号。第二管开始加样枪各加生理盐水200，在第一管和第二 管中各加入稀释血清200μL，第二管混匀后移出200μL转至 第3管，以同样操作稀释第6管，从第6管吸出200μL暂时 保留在另一试管中(可作为第7管)，以备必要时作进一步稀 释。这样从第1管到第6管的血清稀释度依次是1:8，1:16， 1:32，1:64，1:128，1:256; 2. 加红细胞悬液(自配红细胞悬液同反定型试剂)每管各加2% 相应红细胞悬液200μL，混匀。(如待检血清抗体为抗A，则 加入A型红细胞悬液;如待检血清抗体为抗B，则加入B 型标准红细胞悬液;如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍 量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加 入B型标准红细胞悬液; 3. 先直接离心观察结果，之后再每管分别加入凝聚胺试剂盒中 的R1液3d，混合30S均匀后，再各加R2溶液1滴，并混合 均匀，离心后再加R3液2滴，操作方法同凝聚胺交叉配血法， 然后判读结果。通常以肉眼观察到的第一个“?”的凝集管作 为判断的终点，终点血清稀释度的倒数为效价(Titer)，或称 滴度。 二( IgM 1.血清连续倍量稀释法 先稀释血清:100μL病人血清+700μL生理盐水备用，排列6支试管按顺序编号。第二管开始到第六管加样枪各加生理盐水200μL，从第一管和第二管中各加稀释血清200μL，第二管混匀后移出200μL转至第3管，以同样操作稀释至第6管，从第6管吸出200μL暂时保留在另一试管中(可作为第7管)，以备必要时作进一步稀释。这样从第一管到第6管的血清稀释度依次是1:8，1:16，1:32，1:64，1:128，1:256; 2.加红细胞悬液(自配红细胞悬液同反定型试剂)每管各加2%相应红细胞悬液200μL，混匀。(如待检血清抗体为抗A，则加入A型标准红细胞悬液;如待检血清抗体为抗B，则加入B型标准红细胞悬液;如待检血清中既有抗A又有抗B，则倍量稀释两份血清，一份加入A型标准红细胞悬液，另一份加入B型标准红细胞悬液; 此为IgM类盐水抗体可立即离心后观察。