[最新]复方乌杞胶囊对小鼠免疫功效影响试验研究

[最新]复方乌杞胶囊对小鼠免疫功效影响试验研究 复方乌杞胶囊对小鼠免疫功能影响实验研究 复方乌杞胶囊对小鼠免疫功能影响实验研究 更新日期:2010-07-07 点击: 唐显民 提要 对复方乌杞胶囊对小鼠免疫功能的影响作了动物实验研究。结果表明该药能增加小鼠胸腺及脾脏指数，增强小鼠腹腔吞噬功能，能明显增加小鼠对SRBC抗体的生成;能增强特异性体液免疫功能，同时还能增强小鼠外周血液T淋巴细胞的功能。提示复方乌杞胶囊具有良好的增强免疫功能的作用。 关键词 复方乌杞胶囊; 免疫器官指数; 巨噬细胞吞噬功能 复方乌杞胶囊为我所研制的新药，已通过“江苏省新药评审委员会”专家评审，准备上报卫生部审定。处方中有乌梢蛇、枸杞子等中药。是按照传统炮制方法的，结合现代工艺制成的硬胶囊制剂，具滋肾养肝、祛风明目、强筋骨、增强免疫等功能，主治肝、肾之虚亏。我们通过对复方乌杞胶囊对小鼠免疫功能影响进行了动物实验研究。现报告如下。 1 实验材料 昆明系小鼠(由南京中医药大学实验动物中心提供);复方乌杞胶囊(银灰色粉剂，自制，批号971229，临用前用蒸馏水配成所需浓度)，人参(由南京市药材公司购入，自制成0.05 g/ml水煎液备用)，淋巴细胞分离液(上海化学试剂厂)，碱石灰(上海五四化学厂);CS501型超级恒温水锅(重庆分析仪器设备厂)，82-1型离心机，U型血凝板(上海塑料三厂)，OLYMPUS光电显微镜(日本)。 2 实验方法 2.1 对小鼠免疫器官指数的影响,1,:取昆明小鼠40只，雌雄各半，体重23,25 g，随机均分为4组，即复方乌杞胶囊小剂量组、复方乌杞胶囊大剂量组、人参水煎液组、生理盐水组。各组均灌胃给药1 次/d，连续10 d。于第11 d脱臼处死各组小鼠，剖腹，立即取脾脏、胸腺称重，并计算每20 g小鼠的器官指数。结果见表1。 表1 复方杞胶囊对小鼠免疫器官指数的影响 组 别 剂 量 动物数 器官指数( ? s，mg/20g) 脾脏 胸腺 生盐盐水组 10 ml/kg 10 58.8?10.6 36.7?8.9 人参水煎液组 0.3 g/kg 10 82.6?16.3** 53.3?15.8* 复方乌杞胶囊小剂量组 0.9 g/kg 10 72.7?15.4* 45.5?14.7 复方乌杞胶囊大剂量组 2.2 g/kg 10 79.8?21.5* 50.4?13.6* 与生理盐水组比较* P,0.05，** P,0.01 实验结果表明，复方乌杞胶囊两个剂量组均能增加小鼠胸腺及脾脏指数，与生理盐水组比较，差异显著( P,0.05)。 2.2 对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响,1,:取昆明小鼠40只，雌雄各半，体重18,22 g，随机均分为4组，即复方乌杞胶囊小剂量组、复方乌杞胶囊大剂量组、人参水煎液组、生理盐水组。各组均灌胃给药1次/d，连续10 d。于给药后第6 d每鼠腹腔注射10%蛋白胨0.2 ml，停药后次日取腹腔巨噬细胞，以生理盐水将巨噬细胞配成适当的浓度，加入适量5%鸡红细胞混合，37?温育30 min，每隔10 min摇动1次，4 000 rmp离心10 min，取细胞沉淀物制成涂片， 待自然干燥后用甲醇固定3 min，姬姆萨染色7 min，在油镜下观察100个巨噬细胞吞噬鸡红细胞总数和吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数，并计算吞噬指数和吞噬百分比。 吞噬指数=(100个巨噬细胞中吞噬鸡红细胞总数)/(100个巨噬细胞) 吞噬百分比=(吞噬鸡红细胞的巨噬细胞数)/(100个巨噬细胞)×100% 实验结果(见表2)表明:复方乌杞胶囊两个剂量组能明显增加小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬指数和吞噬百分比，与生理盐水组比较，差异非常显著( P,0.05， P,0.01)。提示复方乌杞胶囊可增强小鼠腹腔吞噬细胞的吞噬功能。 表2 复方杞胶囊对小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能的影响 组 别 剂 量 动物数 (只) 吞噬百分比 ( ? s，%) 吞噬指数 ( ? s) 生盐盐水组 10 ml/kg 10 19.4?8.6 0.42?0.13 人参水煎液组 0.3 g/kg 10 40.5?13.8** 1.03?0.48** 复方乌杞胶囊小剂量组 0.9 g/kg 10 27.6?5.3* 0.88?0.35** 复方乌杞胶囊大剂量组 2.2 g/kg 10 38.0?10.7** 0.95?0.42** 与生理盐水组比较* P,0.05，** P,0.01 2.3 对SRBC致敏小鼠抗体生成的影响,2,:取昆明小鼠40只，雌雄各半，体重23,25 g，随机均分为4组，即复方乌杞胶囊小剂量组、复方乌杞胶囊大剂量组、人参水煎液组、生理盐水组。各组均灌胃给药1次/d，连续10 d。于开始用药后次日腹腔注射10% SRBC 0.2 ml/只。停药后次日眼眶取血，分离血清，56?灭活30 min，以生理盐水倍比稀释，将不同稀释度的血清分别加入到血凝板内，观察血凝程度，并根据下列公式计算抗体积数。 抗体积数 N=?( S1 +2 S2 +3 S3 +n Sn ) (其中n代表稀释倍数的指数，S代表凝集程度) 实验结果(表3)表明:复方乌杞胶囊两个剂量组均有明显增加小鼠对SRBC抗体的生成，与生理盐水组比较差异非常显著( P,0.01)。 表3 复方杞胶囊对SRBC致小鼠抗体生成的影响 组 别 剂 量 动物数 (只) 抗体积数 ( ? s) 生盐盐水组 10 ml/kg 10 22.7?2.3 人参水煎液组 0.3 g/kg 10 70.4?15.6** 复方乌杞胶囊小剂量组 0.9 g/kg 10 31.5?5.6** 复方乌杞胶囊大剂量组 2.2 g/kg 10 56.8?10.7** 与生理盐水组比较** P,0.01 2.4 对小鼠空斑形成细胞数(PFC)的影响,1,:取昆明小鼠40只， ,27 g，随机均分为4组，即复方乌杞胶囊小剂雌雄各半，体重24 量组、复方乌杞胶囊大剂量组、人参水煎液组、生理盐水组。各组均灌胃给药1次/d，连续5 d。于给药后第2 d，每鼠腹腔腔注射10% SRBC 0.2 ml。停药后次日，脱椎处死各组小鼠，取脾剪碎加2 ml Hank's液吹打，150目筛过滤细胞，离心洗涤2次，重悬于1 ml Hank's液中，制备脾细胞悬液(107个/ml)。取脾细胞悬液20 ml，加1 ml填充液(Hank's?10% SRBC?补体=10?1?1)，摇匀后填充小室。小室剩余空隙用未加补体的填充液补充。石蜡封口，置匀后填充小室。小室剩余空隙用未加补体的填充液补充。石蜡封口，置37?孵育1 h后，取出并立即计算空斑数，结果以106牌细胞中的RFC表示。结果见表4。