米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性比较研究

米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性比较研究 米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋 白微球肝靶向性比较研究 l一I. „ R765”,I 米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白微球肝靶向性比较研究 张志荣张奇志(华西医科大学药学院成都610041) ?__-? 一 ,-—_-一 摘要目的:比较米托蒽醌白蛋白微球和联糖米托蒽醌白蛋白擞球肝靶向性的优劣.方法:以一1,鼠为宴验动物,以静脉注射 给药后小鼠血泉厦各器官中的米托葸醌含量为指标.结果:联糖米托蒽醌白蛋白微球在肝中的分布高于米托蒽醌白蛋白微 球,而且肝中米托蒽醌较高浓度的维持时间也更长:结论:联糖米托葸醌白蛋白微球肝靶向性比米托蒽醌白蛋白微球好,但 兰差二薹耋兰兰兰m,高ito致x渡an相tr色.谱nc法-bovineSerum关键词兰丝兰兰苎坠:鱼曼皂签鹜tE垫旦兰纠系统,高致渡相色谱法C删叩arjs0n0flivertargetjngeff&tl0rgalactosyl—serumalbumin—microspheres ZhangZhimng,ZhangQizhi(Sctx~olofPharmacy,West(IhLnaUniversityofMedi~|Sciences,Ch~du6 10041) A】瞄IRAcTOKIEC31VE:Tostudythelivertargetingeffectof肼{AQBsMSandGal-DHAQ-BSA-MS砌H0Ds:The】iver targetingeffectofDHAQ-BSA-MSandOal—DHAQ-KSA—MS?eevalumedbymeasuringthedmgconcentrationineachorganand plasmaaftLv.administrationviatheta])veinofmiceRESUltjI:There~u]tsshowedthatmP3lYtcoocemr afionofGel—T._BS MSintheliverwashigherthanthatofHDAQ-BSA-MS.inadditicm.theGa[-DHAQ-BSA-MSdepc~sil edalongerdraeintheliver withahigherdrugconcentrationCONCLUSIONS:ThereisriosignificantdifferenceOllstatisti~betwe e1:DK&.Q-BSAMSandGal— DHAQ-BSA一 KEYWORDSgalamosyl—mitoxantronebovine,s~rtillalbumln-microspheres,livertargeteddrugdd lverysystem.HPLC 研究明,静脉注射0.1,20I盯n的微球具有 明显的肝靶向性.哺乳动物的肝实质细胞,主 要是质膜部分存在无唾液酸糖蛋白受体(ASGP— R).ASGP—R能专一性识别以非还原性半乳糖为末 端的糖蛋白并与之结合_341.Vera等人用放射示踪 法研究证明,ASC-P—R与其配体的结合具有高度的 分子特异性,亲和力依赖和剂量依赖性l55.以AS— GP-R的合成配体为药物载体,其良好的肝靶向性 已为众多研究所证实. 本研究直接将半乳糖基与白蛋白微球进行偶 联,理论上其靶向性应优于白蛋白微球,为验证这一 设计思想,比较研究了米托蒽醌(DHAQ)白蛋白微 球和联糖DHAQ白蛋白微球的肝靶向性. 1仪器,药品及动物 Lc10A高教液相色谱仪附SPI>10A紫外可见 光检测器和(7-R7A数据处理机(日本岛津);TGL l6型高速台式离心机(上海医疗器械厂):CQ-250 型超声波清洗仪(上海超声波仪器r?). I计IAQ(由本院有机教研室提供);?1AQ白蛋 白微球(自制);联糖DHAQ白蛋白微球(自制);其 他试剂均为分析纯.昆明种小鼠18,22g,雌雄各 - 14【1? 半(由本校实验动物中心提供). 2血浆及各器官中DHAQ含量测定方法 本文在报道的HPLC法的基础上加以改进l66, 用于D}IAQ的生物样品的分析,结果令人满意. 21色谱条件预处理柱:YWG—ODS柱(101371); 分析柱:ShimpackCLC—ODS(5,,.um150X46mm ID);流动相:甲醇一02mo[?L..乙酸铵缓冲液 (H,SO4调pH=20)(48:52);流速:1.0ml?mln; 检测波长:599nm;柱温:35?;进样量:20. 2.2样品预处理方法取血浆(或器官匀浆)0.5 ml,加人CHC[~:CHOH:6mo[?LHC”3.8:1.9: 0.3)的混合液15mt,漩涡混合3rain,超声振荡l0 min,15000f?rain离心10min.取上清液到15 ml离心管中,精取07ml,加人浓氨水250和氯 仿lml,漩涡混合2min,于15000r?min离心10 m[n.取下层液0.9ml,流通氮气吹干,残渣用流动 相100溶饵,漩涡混合2min后以1500Or?rain.. 离心10m[n,取上清液如l进样. 2.3方法可行性考察取样品液2O”l进样.在上 *本院1997届硕士研究生 中国医院药学杂志1999年第19卷第3期 ? 述色谱条件下分离测定,DHAQ的色谱图.血 浆及肝脏匀浆样品色谱如图1和图2由图可见. 空白血浆及空白器官匀浆不干扰测定,DHAQ的保 留时间约为40rain. 按文献方法测定,该法对血浆的平均回收率 为1028%,对器官匀浆的平均回收率为103.9%, 983%;方法精密度良好. l ll ——,. . L, 图I空白血浆fa)和加啊IjHAQ札11的l址Lc图谱 4.3o1 剧2空白肝匀浆【a)科l加I)HA~肝匀浆(b】的HtLC谱 3DI-L~,Q白蛋白微球在小鼠体内分布研究 取DI-L~Q白蛋白微球先用生理盐水洗涤,除去 微球表面吸附的药物,再用含01%Tween培0的生 理盐水超声分散均匀备用.取小鼠35只随机分为 7组,每组5只,按4mg-kg体重剂量(按DHAQ 计),小鼠尾静脉注射DI-L~,Q白蛋白微球液(0.05 ml/10g),分别于5,10,15,25min和1,6,12h断头 处死,剖取每只鼠的血,心,肝,脾,肺,肾.各器官分 别称重,血液按小鼠体重的8%计算.按前述样品 预处理方法和测定方法进行处理和测定,记录色谱 图和DlHAQ的峰高.根据各器官和血液的总重,计 算出各器官中DHAQ的含量,将各器官中DI-L~,Q 的量相加即得总DHAQ量.各器官中的DI-L~,Q的 量与总量之比,即为各器官中DHAQ白蛋白微球在 体内分布的百分数结果见表1. 表1静注DHA~-AM(按体重4ragDHAQ/kg)后血浆和器 官组织中DHAQ的分布{=5) 100 100 l()0 1O0 10n I()0 1o0 4联糖DI-L~,Q白蛋白微球在小鼠体内分布研究 取联糖DHAQ白蛋白微球的冻干针剂,加生理 中N医院药学杂志1999年第19卷第3期 盐水分散,15000r-min离心5min,倾去上清液, 下层微球用含0.1%Tween的生理盐水超声分散备 用.取小鼠35只随机分为7组,每组5只,按4nag ? 体重剂量(按DI-L,~O计),小鼠尾静脉注射联 糖白蛋白微球液,分别于5,lO,l5,25rain和l,6,12 h断头处死一组小鼠.取每只鼠的血,心,肝,脾, 肺,肾.同白蛋白微球在小鼠体内的分布测定法测 定.结果见表2. 表2静注联糖DHAQ-AMc按体重4ragDHAQ/kg)后血浆 和器官组织中DHA.Q的分布(=5) 堕匦些-堕盟竖量盐 0083092.0228862124110O 016703I.82.771644233Io0 025002l73.169644236l【H_ 0417可删.2l00 l0可测26428.545.639l100 60可测26478.7456384100 61lH] 5DHAQ白蛋白微球与联糖D[L~Q白蛋白微球肝 靶向性的比较 将两种微球在肝组织中的累积量对时间作图. 见图3,可见从给药后7min开始,联糖DI-L~,Q-AM 在肝组织中的量高于DHAQ-AM. 瞄 蒜 蕾 燕 g 岳 甚 I,… 图3按4】唱DHAq/kg静注1)HAM(a)和联糖DHAQAM(b) 后小鼠肝中的{AQ音量.时向曲线 将两种微球在不同时间点小鼠肝中累积量的数 据进行单因素方差分析,数据处理结果见表3.F= 0.28,查F检验临界值表,F0I. I.12=3.18,F< F”1.. “,说明这两种微球在肝中靶向性投有显着性 差别. 表3Dt~~kQAM和联糖DHAQ—AM的分布数据的单因素 方差分析 6讨论 体内DHAQ含量测定研究中,曾直接沉淀蛋白 后进样,经预试发现此法灵敏度不够高.最后,采用 了液.液萃取处理样品的方法在HPLC流动相的 选择方面,分别试验了乙腈.水.冰醋酸(90:6O: ? 14】- ? 84932 7?m? 测测删剽.可可町可可 三暑?