氧乙酰大花旋覆花内酯对照品的制备及其在欧亚旋覆花中的含量（可编辑）

氧乙酰大花旋覆花内酯对照品的制备及其在欧亚旋覆花中的含量（可编辑） 氧乙酰大花旋覆花内酯对照品的制备及其在欧亚旋覆 花中的含量 !""#年 $$月 !"#$!, %"$- 色 谱 %&’*+ !""# #., /#.- !"#$%&% ’*$+, - !"*.+/0*+1"2 !!氧!乙酰大花旋覆花内酯对照品的制备及其 在欧亚旋覆花中的含量测定 王云志,C 石晓伟,C 付C 焱,C 程C 伟,C 张嫡群,C 查建蓬 (河北医科大学新药开发研究室,河北石家庄 "#""$.) 摘要:从欧亚旋覆花的氯仿提取物中分离制备了 $&氧&乙酰大花旋覆花内酯对照品,经紫外光谱、红外光谱、核磁共 振和质谱确定结构,其相关数据与文献一致,纯度为 DDE #’,符合中药化学对照品含量测定用要求。以所制备的 $& 氧&乙酰大花旋覆花内酯为对照品,建立了用高效液相色谱&蒸发光散射检测器(*+&,*-.)测定欧亚旋覆花中 $& 氧&乙酰大花旋覆花内酯含量的方法。色谱条件为 /01234# 5.-&!色谱柱,流动相为甲醇&水(体积比为 #!F B3),流 速为 $E " 6*7648。,*-.的漂移管温度为 D" 9,载气(空气)流速为 !E # *7648。$&氧&乙酰大花旋覆花内酯在进 样量为 $E ,. /3E !$ :时与其峰面积的线性关系良好(! G "E DDD 3)。平 均加样回收率为 $""E !’,相对偏差 ! (;-.)为 $E ,’(" G-)。该法准确,简单,省时,重复性好,适用于欧亚旋覆花 的质量控制。 关键词:高效液相色谱;蒸发光散射检测; $&氧&乙酰大花旋覆花内酯;对照 品;欧亚旋覆花 中图分类号:5-#3C C C 文献标识码:C C C 文章编号: $"""&3.$,(!""#)"-&"#.,&"B "#$%&#&’* &*+ ,$’$#-*&’* . !!!!/0$’123#’&**2&0’*$ * "#$%& ’*&##+& 45 % ?@8AB4,-C D4E"F14,GH ?E8,+,% 14,I% .4J@8,I K4E8018: (#$%&!’$"’ * +$, #!-. #$/$0%$"’,1$2$3 4$536&0 7"3/$!83’9,:;33&;-&". !"!!#$,;3"&) /36’#&0’:L" 0210E21 21M1218N1 3@O3PE8N1 M"2 J@E#4P/ N"8P2"# "M ?"-0& @!3’&""36& *$,$&A& EN1P/#O24PE884#ENP"81 FE3 1QP2ENP1R E8R 310E2EP1R M2"6 NB#"2"M"26 1QP2ENP4"8 "M ?"-0& @!3’&"B "36& *$ +B164NE# 3P2@NP@21 "M PB1 $&A&EN1P/#O24PE884#ENP"81 02"R@NP FE3 1#@N4REP1R O/ @#P2ES4"& #1P 301NP2"61P2/(H!),48M2E21R 301NP2"3N"0/(C;),8@N#1E2 6E:81P4N 213"8E8N1(%T;)E8R 6E33 301NP2"61P2/(T-),E8R PB1 213@#P3 F121 48 E:211618P F4PB PB1 21M1218N1$ LB1 0@24P/ "M PB1 $&A&EN1P/#O24PE884#ENP"81 02"R@NP FE3 DDE #’,FB4NB 3EP43M413 PB1 811R "M 21M1218N1 3@O& 3PE8N13 "M P2ER4P4"8E# +B48131 61R4N4813$ 61PB"R "M B4:B 012M"26E8N1 #4J@4R NB2"6EP":2E0B/& 1SE0"2EP4S1 #4:BP 3NEPP1248: R1P1NP4"8(*+&,*-.)43 R13N24O1R M"2 PB1 R1P12648EP4"8 "M $&A& EN1P/#O24PE884#ENP"81 48 ?"-0& @!3’&""36& *$ LB1 NB2"6EP":2E0B4N N"8R4P4"83 48N#@R1 /01234# 5.-&! N"#@68,E 64QP@21 "M 61PBE8"#&FEP12(#!F B3,S7S)F4PB PB1 M#"F 2EP1 "M $E " 6*7648 @31R E3 6"O4#1 0BE31$ LB1 P16012EP@21 "M R24MP P@O1 "M PB1 ,*-. FE3 D" 9$ G#"F 2EP1 "M NE224& 12 :E3 FE3 !E # *7648$ *481E2 2E8:1 "M $&A&EN1P/#O24PE884#ENP"81 FE3 $E ,. H 3E !$ !:(! G "$DDD 3)$ LB1 ES12E:1 21N"S12/ "M $&A&EN1P/#O24PE884#ENP"81 FE3 $""E !’ F4PB PB1 21#EP4S1 3PE8RE2R R1S4EP4"8(;-.)"M $E ,’(" G -)$ LB1 61PB"R 43 3460#1,ENN@2EP1,P461 3ES48: E8R 2102"R@N4O#1$ 7$1 8#+6:B4:B 012M"26E8N1 #4J@4R NB2"6EP":2E0B/;1SE0"2EP4S1 #4:BP 3NEPP1248: R1P1NP4"8; $&A&EN1P/#O24PE884#ENP"81;21M1218N1 3@O3PE8N1;?"-0& @!3’&""36& *$ [-] C C 欧亚旋覆花(?"-0& @!3’&""36& *$)是传统中 取物有抗氧化作用 , $&氧&乙酰大花旋覆花内酯的 药,多年来一直用于治疗消化不良、支气管炎,并具 衍生物 $, -&二氧&二乙酰大花旋覆花内酯的细胞毒 [$] [.] 有抗炎作用 。现代药理学研究证明,旋覆花的氯 性比 $&氧&乙酰大花旋覆花内酯强 。但在 !""#年 [!] [,] [B] [$] 仿提取物具有免疫 、肝保护 和细胞毒作用 , $& 版《中国药典》 的旋覆花质量标准中只有鉴别项, [#] 氧&乙酰大花旋覆花内酯具有抗炎作用 ,正丁醇提 无含量测定项。我们从欧亚旋覆花中分离得到了 收稿日期: !""#0"-0!$ 作者简介:王云志,男,教授,12:(",$$)3-!--,,#,40562:789:; * ? @A 基金项目:河北省自然科学基金资助项目(,",B.")?’$+? 色 谱 第 !"卷 #!氧!乙酰大花旋覆花内酯(结构式见图 #),经紫外 中含 #!氧!乙酰大花旋 覆花内酯 *& **, 5G与 *& , 光谱("#)、红外光谱($%)、核磁共振(&’%)和质 5G的溶液,作为对照品溶液和供试品溶液,用于不 谱(’)分析,其相关数据与文献[$]所报道的数据 加校正因子的主成分自身对照实验。 一致,纯度为 %%& ’,符合中药化学对照品含量测定 !%#%$" 色谱条件 HA3@0I !- 色谱柱(!’* 55 # [] 用要求 ,因此可用作欧亚旋覆花质量控制的化学 -+& , 55 B& C&, ’ !5);柱温:室温;流动相:乙腈! 对照品。 水(体积比为 "#. ,%);流速:# 5,J5B/;检测波长: !* /5。 !%#% %" 不加校正因子的主成分自身对照法 在 “#E !E "”节色谱条件下,精密量取 #!氧!乙酰大花旋 覆花内酯对照溶液 #* !,,注入色谱仪,记录色谱 图,调节检测灵敏度使主峰峰高约为满量程的 !*; 图 !" !!氧!乙酰大花旋覆花内酯的化学结构 "#$%!" &’#*+, -./0*.0/ 12 !!!!+*.3,4/#.+55#,+*.15 再取供试品溶液和对照品溶液各 #* ,分别注入色 ! 谱仪,记录色谱图至主成分峰保留时间的 !倍。 本文报道了从欧亚旋覆花中制备 #!氧!乙酰大 !%#%&" 二极管阵列检测器(7)纯度检查法 该 花旋覆花内酯对照品的方法,并测定了欧亚旋覆花 实验所用仪器为 7GB82/9 ##**色谱仪,7检测器 中 #!氧!乙酰大花旋覆花内酯的含量,该法准确,简 和 7GB82/9化学工作站。在“#E !E "”节色谱条件下, 单,省时,重复性好,适用于欧亚旋覆花的质量控制。 用 7检测器记录色谱图,检查主成分峰的纯度。 !%$" 欧亚旋覆花中 !!氧!乙酰大花旋覆花内酯含量 !" 实验部分 的测定 !%!" 仪器与试药 !%$%!" 样品溶液的制备 取干燥旋覆花 #& * G,置 高效液相色谱(*+,-)系统:包括脱气机、.! 于索氏提取器中,加氯仿 +’ 5,,加热回流提取至溶 #’**溶剂组合器、.!#**# 泵、"#!.!’*# 检测器 液无色,将提取液蒸发至干,残渣加甲醇 #* 5,溶 (./0123,42350/6);78892:; !***蒸发光检测 解,用 *& +’ !5微孔滤膜滤过,备用。 器(,)("7);?!!**!色谱工作站(北京瑞利 !%$%#" 对照品溶液的制备 取 #*’ K干燥至恒重 分析仪器有限责任公司)。,0@A3A90 +***旋转薄膜 的 #!氧!乙酰大花旋覆花内酯对照品,精密称取约 蒸发仪(42350/6,*2BCA8D;6);!#*电子天平 #*& , 5G,置于 !’ 5,量瓶中,加甲醇溶解并稀释至 (北京赛多利斯天平有限公司)。 刻度,过 *& +’ !5微孔滤膜,备用。 欧亚旋覆花样品采自于山西省运城地区,部分 !%$%$" 色谱条件 *6D23LB8 M!! 色谱柱(!’* 样品购自药材市场。药材经河北医科大学生药教研 55 -+& , 55 BE CE, ’ 5);柱温:室温;流动相:甲 ! 室聂凤?教授鉴定为欧亚旋覆花。甲醇,乙腈(色 醇!水(体积比为 ’!. +);流速: #& * 5,J5B/;载气: 谱纯,购自 :;03801 -;25B2 E 7E D0B/),其他试 空气, !& ’ ,J5B/;,的漂移管温度: %* K。 剂均为分析纯。#!氧!乙酰大花旋覆花内酯对照品 #" 结果与讨论 为自制(批号 !**"*!*")。 !%#" 欧亚旋覆花中 !!氧!乙酰大花旋覆花内酯对照 #%!" 对照品的纯度检查 品的制备与纯度检查 用不加校正因子的主成分自身对照法测定 #! !%#%!" #!氧!乙酰大花旋覆花内酯的分离和提取 氧!乙酰大花旋覆花内酯对照品的纯度,色谱图见图 取采自山西省运城地区的欧亚旋覆花 ! FG,用 #*倍 !。结果表明,在供试品溶液的色谱图中,除溶剂峰 量的乙醇回流提取 "次,每次 # ;,过滤,合并滤液, 外,各杂质峰面积总和小于对照品溶液主峰的面积 回收乙醇得黑色粘稠膏状物约 !** G。将膏状物悬 (*& ’)。二极管阵列检测器的测定结果表明:主 浮于 +** 5,水中,依次用石油醚、氯仿、乙酸乙酯、 成分峰的纯度因子为 %%%& %’+;五点光谱图完全重 正丁醇萃取。取氯仿萃取液减压浓缩回收溶剂,上 合,表明主成分峰为单一物质峰。 [’] 硅胶柱,经反复分离,得 #!氧!乙酰大花旋覆花内酯 #%#" 对照品的结构确证 粗品,用乙醇重结晶得白色针状结晶,即为 #!氧!乙 熔点与定性鉴别 对 照品的熔点(《中国药典》 酰大花旋覆花内酯对照品。 !**’年版附录 -)为 #!+ / #!, K。对照品与 羟 " !%#%#" 供试品溶液与对照品溶液的制备 精密称 肟酸铁试液反应,反应液 呈红棕色,表明对照品的结 取对照品适量,分别加入甲醇溶解,配制成每 # 5, 构为倍半萜内酯。?,+,? ! 第 "期 王云志等: #!氧!乙酰大花旋覆花内酯对照品的制备及其在欧亚 旋覆花中的含量测定 * # 和 7?6伸缩振动),# +$ 0 ( 7 5),# ""’ $$ * # * # 0 ( 7 7),# "",# ’+ 0 ( 76 ),# $"& $$ ’ * # * # 0 (7?5), # #"’, # %’&, ,, "’ 0 。 # ! ! 核磁共振 6 89:! ’- +"(0,#"),’- +"(0, #/),#- %,(0,$"),#- $"(0,$/),#- #,(0,’"), %- &+(0,’/),$- ,&(0,),- %#(;,"),’- ’"(0, +), - ’(0, &),$- +$(0,"),$- $"(0,/),"- %# (;, #’"),,- +#(;,#’/),#- "#(,#),%- (;, #,), #- &&(,9%755)。 #’ ! ! 核磁共振 7 89:! ",- ,#, $+- &$, ’$- ,’, ’- $ 图 !" #!氧!乙酰大花旋覆花内酯的纯度测定色谱图 (-),#’#- (-),,"&- +(-)",+- $+,+&- &,’- $, "#$%!" &’*+,$+*- . /0#,1 ,2-, . #’+- #%, #’&- ##, #+$- #$, #$- +#’, $%- ,#, #!!!+32,145#,+66#4+3,62 "# $%&%$%’% *+,-.*’;/# "01+% *+,-.*’# #- #,, #+%- ’ 9%755, $%- & 9%755。! ! 质谱! 分子离子峰(!"# ’%&[9]),主要碎 ! ! 紫外光谱! 对照品的甲醇溶液在 $%& ’0处有 片离子峰为 !"# $%,$&,$’’,$’%,$#,,$%+,$%$, 最大吸收。 #&, #+, #"#,符合裂解规律(见图 ’)。 34$ * # ! ! 红外光谱 ! ! ’ 0 (56),’ %& 0"2 ! ! 以上 ,:,89:,9?光谱数据与文献报道值 * # * # 0 ( 7 7),$ +’,$ %,$ %%,$ &"# 0 (饱 一致,确证对照品为 #!氧!乙酰大 花旋覆花内酯。 $$ 图 $" #!氧!乙酰大花旋覆花内酯的质谱裂解图式 "#$%$" 7/4#, /+,,26 . *+-- -/23,+ . #!!!+32,145#,+66#4+3,62