岳阳地区妇女宫颈HPV感染及亚型分布调查研究

岳阳地区妇女宫颈HPV感染及亚型分布调查研究 岳阳市妇幼保健院 刘庆乐 田月赐 【摘要】目的 研究岳阳妇女人乳头瘤病毒(HPV)感染及亚型的分布情况。 方法 应用 基因芯片技术对916例临床疑似HPV感染患者进行基因分型。 结果 共检测916例女性， HPV感染妇女327例，感染率为36%;检出HPV亚型高危型感染129例，感染率5%;混 合感染179例，感染率54.74%。感染年龄集中在30-39岁段，高峰在35-39岁年龄段(29.35%)， 与其他年龄段有显著差异(P,0.05)。 结论 本地区岳阳妇女宫颈HPV感染率较高，主要 为混合性感染占54.74%，亚型分布为16型、58型，其次为18型、33型等，感染人群高峰 在35-39岁年龄段。 【关键词】 人乳头瘤病毒、基因芯片、亚型 Yueyang region women with cervical HPV infection and subtype distribution investigation and study Liu Qingle Tian Yueci of Yueyang Maternal and Child Health-Care Hospital [ Abstract ] Objective:To study of Yueyang women human papilloma virus ( HPV ) infection and subtype distribution. Methods:Application of gene chip technology in 916 patients with clinically suspected patients with HPV infection genotyping. Results:A total of 916 cases of HPV infection detection of women, women in 327 cases, the infection rate was 36%; the detection of HPV subtype in high-risk type of infection in 129 cases, the infection rate was 5%; mixed infection in 179 cases, the infection rate was 54.74%. Infection age focused on 30-39 years old, peak in 35-39 age ( 29.35%), and the other age groups have significant difference ( P < 0.05 ).Conclusion:The conclusion of this area of Yueyang women with cervical HPV infection rate is higher, mainly mixed infection accounted for 54.74%, subtype distribution for type 16, type 58, type 18, type 33 second, infected population peak in the 35-39 age. [ Key words ] Human papilloma virus, gene chip, subtype [1]人乳头病毒(HPV)感染是宫颈癌的主要致病因子已广泛公认。目前世界上已发现100 多种HPV基因分型，其中20余种与宫颈癌密切相关，尤其是高危基因型(hrHPV)持续性 反复性感染。因此，早期诊断和早期治疗对宫颈癌的治疗和预防是关键。本研究应用基因芯 片技术对妇科疑似HPV感染妇女进行HPV基因分型检测，并对其HPV感染及亚型分布统 计，现报导如下: 和方法 1 材料 1.1研究对象 2010年10月~2011年9月本院妇科就诊的916名妇女，疑似HPV感染取其 分泌物进行检测，年龄为18~56岁，平均年龄34岁，从,19岁开始，到?56岁，以5岁为 一年龄段，其分为9个年龄组。 1.2试剂和仪器 HPV分型基因检测试剂盒(深圳亚能生物技术有限公司);基因扩增仪(杭 州博日);分子杂交仪(江苏兴化)，显色液经新鲜配制，用时按所需浓度加蒸馏水配制。 2 方法 2.1标本收集 用窥阴器暴露宫颈，用棉试子擦去宫颈过多分泌物，然后使用专用的宫颈刷置于宫颈口，轻轻旋动宫颈刷4-5圈以获得足量的上皮细胞样本;慢慢取出宫颈刷，然后沿刷柄折痕处将宫颈刷柄折断，放入装有专用细胞保存液的洗脱管中浸泡，旋紧管盖，做好标记送检验室检测。 2.2样本处理 将宫颈刷在洗脱管中充分漂洗(旋涡振荡器上震荡1分钟)后，用1000ul的移液器将洗脱液1ml转移到带有相应标记的1.5mL微量离心管中。将离心管放到高速离心机中13000rpm离心10分钟，弃上清，保留管底的沉淀细胞块。加入50ul裂解液到离心管中，充分混匀，悬浮细胞快沉淀，放入水浴锅中煮沸10分钟，水浴结束后把离心管放到高速离心机中，13000rpm离心10分钟，保留上清待用。 2.3检测方法 HPV基因分型检测步骤主要包括: (1)DNA提取;(2)PCR扩增;(3)杂交;(4)洗膜;(5)显色及结果判读，操作和结果判读均按试剂盒说明书进行，检测的23种基因型包括18种高危型和5种低危型，18种高危型分别为16、18、31、33、35、39、45、51、52、53、56、58、59、66、68、73、MM4和83型，5种低危型包括6、11、42、43、44。有三种或三种以上感染者为多重感染(不论是高危型或低危型)。 2.4统计方法 使用SPSS10.0软件包进行统计分析。列联资料分析，各年龄组间检出率差 2异用X检验，P检验为双向P,0.05为差异具有显著性。 3 结果 3.1感染的基因型分布 916例检测妇女中有327人次感染HPV，感染率为36%，23种检测基因型中被检出21种，基因型筛查人群感染以高危型为主，共有333例，低危型76例。混合感染179人次，感染率54.74%，各基因型感染分布见表1。 表1 例HPV感染者各基因型分布况表(包括单重与多重感染) 基因型 检出数 检出率(%) 基因型 检出数 检出率(%) 6 23 7.03% 45 3 0.92% 11 18 5.50% 51 19 5.81% 42 3 0.92% 52 26 7.95% 43 32 9.79% 53 4 1.22% 44 56 7 2.14% 16 79 24.16% 58 72 22.02% 18 33 10.09% 59 7 2.14% 31 16 4.89% 66 16 4.89% 33 29 8.87% 68 8 2.45% 35 9 2.75% 73 2 0.6% 39 1 0.31% 83 2 0.6% MM4 3.2 感染的人群年龄分布: 感染的人群分布30-39岁年龄组为主，筛查人群年龄高峰在35-39岁之间，感染比例达29.35%，与其他年龄段有显著差异(P,0.05)，年龄越大感染越少(表2)。 3.3 单一感染及混合感染比例及构成 单一感染148例，占感染人数45.26%，混合感染179人次，占感染总数54.74%，受检者中最多达5种类型感染(详见表3)。 表2 327例妇女各年龄段HPV感染人次检出表 表3 327例妇女各年龄段感染情况 年龄 HPV阳性数 检出率 年龄 例数 单重 二重 多重 ,19 3 0.92% ,19 3 2 1 20~ 23 7.03% 20~ 23 10 9 4 25~ 40 12.23% 25~ 40 15 13 12 30~ 63 19.27% 30~ 63 23 23 17 35~ 96 29.36% 35~ 96 45 30 21 40~ 45 13.76% 40~ 49 25 15 9 45~ 29 8.87% 45~ 29 14 9 6 50~ 16 4.89% 50~ 16 9 6 1 ?56 12 3.67% ?56 8 5 3 0 合计 327 100% 合计 327 148 108 71 4 讨论 宫颈癌是妇科常见恶性肿瘤之一，据统计每年约50万宫颈癌新发病例，在中国，每年约有10万宫颈癌新发病例，近20万妇女死于宫颈疾病及宫颈癌，中国每年约有2.5~3万名妇女死于此疾病(约占全球的10%)。现已明确HPV感染是宫颈上皮内病变及宫颈癌发生的必要条件，欧洲生殖道感染和肿瘤研究组织(EUROGIN，2006)及24届HPV临床研讨会议均建议将HPV检测作为宫颈癌初筛的首选方法。 HPV是一类双链、环形、嗜上皮DNA病毒，基因分型存在明显地区差异，但最常见的亚型为HPV16型，国际癌症研究协会(IARC)研究报导，HPV-16阳性的宫颈癌患者平均 [2][3]率为57.4%。而我国南方和北方HPV亚型感染有差异。湖南、广州市、江西HPV-58感染仅次于HPV-16，本文筛查检测327例结果显示HPV-16感染率占24.16%，HPV-58感染 -39岁之间，HPV感染率比率占23.55%，感染年龄集中分布在30-39岁之间，而高峰在35 例高达29.35%，与其他年龄段感染率有显著性差异(P,0.05)，随着年龄的增加，感染率 [4]明显降低，这与国内刘植华报导有一定差异，表明HPV基因型分布存在明显的地区差，但与国内外报导感染最常见而最多的亚型是HPV16型是相似的。有人报导，35岁后呈高危HPV感染持续状态，有更高风险患上宫颈癌，因此定期检查HPV具有一定的临床应用价值。 [5]HoGy等学者认为，HPV发生感染的患者出现持续感染的危险性更大，大多数发生感染中含有一种或两种以上的高危型HPV，本资料显示混合感染179例，感染率占54.76%，则多重感染达五种。 总之，利用芯片技术对HPV分型检测，是控制和预防宫颈癌发生的主要手段，了解本地区人群HPV感染情况及HPV亚型分布，对于研究发病机制，做到早预防、早诊断、早治疗都具有重大意义。 【参考文献】 [1] 关婷等人乳头瘤病毒基因型与宫颈上皮肉瘤样病变关系，中国妇幼保健杂志，2006，21(7):960。 [2] MunozN，Bosch FX，Castellsague X et al.Againstwhich human papillmavirus types shall we vaccinate and screen.The international per-spectivel Int J Cancer，2004，111(@):278。 [3] 朗景和主编.妇科学新进展(子宫颈病变的防治).中华医学电子音响出版社，2005:34~41 [4] 刘植华、李晴、李卫红宫颈疾病1686例临床分析[J]，中国实用妇科与产科杂志，2004:22~66 [5] HoGY Bierman R，Beardsiey L，et al.Natural history of cervicovaginal papillomavirus in young women[J].N Engl J Med，1998，338:423-428。