【doc】促甲状腺激素受体在Graves眼病发病中的作用研究进展

【doc】促甲状腺激素受体在Graves眼病发病中的作用研究进展 促甲状腺激素受体在Graves眼病发病中的 作用研究进展 围外医学内分泌学分册2000年7月第20卷第4新179 |-7一fa r促甲状腺激素受体在Graves眼病发病中的作用研究进展 朱显军,安振梅综述魏松全审校77/l一———,.\/ (华西医科大学附属第一医院内分泌科,西川成都610041)(^霉/,,.z f0Jf', 摘要:Graves眼病(CO)是一种器官特异性自身免疫性疾病,与Graves甲状腺功能亢进密切相关在 CO患者眼球后成纤维细胞上可以检测到促甲状腺激素受体(TSHR)转录物及其片断,井有证据直接表 明在眼球后表达.TSI-IR作为甲状腺一眼共同自身抗原,通过交叉免疫反应而引起球后的病变过 程TSHR基因突变与CO的关系,进一步说明TSHR独特的抗原决定簇在CO发病中的作用. 关键词:粤:竺里堑;俚里鉴堕堂童墨;促甲状腺激素受体抗体丁5 中图分类号tP,581102文献标识码:A文章编号:1003—5435(2D00)o4—0179—04 Graves眼病(co)是一种器官特异性自身免 疫性疾病,与Graves甲状腺功能亢进(甲亢)密 切相关.在co患者中,90%存在Graves甲亢, 5%伴自身免疫性甲状腺功能减退症(甲减),只 有5%甲状腺功能正常,但据研究,相当一部分 患者体内存在甲状腺自身抗体.在甲亢合并 co的患者中约20%co先于甲亢发生,约40% 与甲亢同时发生,约40%在甲亢后发生J. 研究表明,Graves甲亢是由于促甲状腺激素受 体刺激-性抗体(Ah)作用于其受体而引起的. 在大多数co患者血液中也可以检测出TSAb, 并且眼球后有促甲状腺激素受体(TSHR)及其 转录物.基于Graves甲亢与co的密切关系, 因此推测Graves甲亢与co是同一种疾病在身 体不同部位的表现,有共同的发病基础,即 TSHR是两者的共同自身抗原而成为T淋巴细 胞攻击的对象,通过交叉免疫反应而致病一. 以下就TSHR在co发病中的作用研究进展做 一 综述. 1汨喂及 甲状腺的生长和功能是由促甲状腺激素 (ysH)作用于甲状腺细胞膜上的TSHR而控制 的.TSHR属于G蛋白偶联受体家族的一员, 有7个跨膜节段,3个胞外环,3个胞内环,1个 胞外的氨基末端和1个胞内的羧基末端.它是 一 种糖蛋白,其胞外氨基末端特别长,是决定与 作者简介:朱显军(19~4-),士,重庆永川人,在读项士. TSH及TSAb特异性结合的主要部分. TSHR的氨基酸30.33,34.37,42-45,52-56.58. 61.32—56,38—45被认为是与刺激性抗体特异性 结合的重要部位,但TSHR的抗原决定簇可能 是立体的.包括了受体胞外区域的多个不连续 部分,以及跨膜区域的胞外环].人类编码 TSHR的基因位于14号染色体上.共58kb,有 1O个外显子和9个内含子.TSHR的胞外区域 由前9个外显子编码,而跨膜区域和胞内区域 由第10个外显子编码.TSHRmRNA长度仅 2.4kb,目前已制备了许多TSHRmRNA的片 段,但其意义尚未阐明. 在正常情况下,TSH与TSHR的细胞外区 域相结合,激活刺激性G蛋白a亚单位(GSa), 使腺苷酸环化酶活化,cAMP大量生成,导致 TSH发挥一系列生物效应,如甲状腺细胞生长, 分化等.若TSH浓度较高,TSHR也能与G蛋 白的q亚单位结合,导致磷酯酶c的活化,使甘 油二酯(OG)及三磷酸肌醇(B)增多,做为第二 信使发挥效应.TSHR还能通过结合到其他G 蛋白受体家族的成员发挥作用】. 由于机体免疫功能失常,免疫耐受力下降, 或者由于TSHR基因突变,使该受体细胞外的 TSH结合区域具有抗原性,均可导致抗.TSHR 抗体(TRAb)产生.TRAb是一组多克隆抗体. 可以分为刺激型(TSAb)和阻断型(TBII)两种, 分别作用在TSHR胞外区域不同的结合位点 上.TSAb可刺激甲状腺细胞的芷长和功能, 180 TBII则阻断TSH的刺激作用,抑制甲状腺功 能.. 2q[SHR与GO的关系 2.1TSHR在眼球后组织表达TSHR不仅存 在于甲状腺组织,而且某些甲状腺外组织也能 表达TSHRHeufelder等"以第1外显子正向 引物,第9外显子反向引物,在培养的人眼球后 组织,胫前及腹部的成纤维细胞中发现有TSHR 的转录.Stadlmavr等利用聚合酶链反应 (PCR)技术,在GO及胫前粘液性水肿患者的球 后及胫前成纤维细胞中,检测到编码全长TSHR 的mRNA.spitzweg等用地高辛标记的,对应 hTSHR胞外区域的反义寡核苷酸做探针进行原 位杂交,在GO患者的眼球后成纤维细胞内发 现了特异性核厨和胞浆内TSHR基因的表达, 而正常个体表达较低.Crisp等在正常人眼 球后脂肪组织中发现了低水平的TSHR转录 物,而GO患者的表达水平增加,分析可能是由 于患者眼球后脂肪细胞量增加的结果.Major 等用逆转录.聚合酶链反应(RT-PCR)技术在 眼眶来源的骨骼肌细胞内发现了编码全长 TSHR的mRNA及片断,而非眼眶来源的骨骼肌 细胞中没有表达,并且眼外肌TSHR表达与正 常甲状腺TSHR表达相同.Bahn等利用液 相杂交分析技术(?),在GO患者眼球后脂 肪/结缔组织切片中发现了全长TSHRmRNA及 其片段,因为?不依赖于抗体特异性和RNA 增殖,所以研究者认为其试验结果是迄今为止 最让人信服的.但是在正常人眼肌eDNA文库 和眼肌的mRNA中未能测得TSHR的转录". 产生以上这些不同研究结果的主要原因 有:?大多数研究都依赖于RT-PCR技术增殖 并检测TSHR基因的特定区域,可能因为其它 的不够敏感或适合于做RNA提取的组织 来源有限.?对RNA来源的定义不严格:患者 或正常人,眼球或非眼球等.◎使用的引物不 同.?扩增条件不同.因此,眼球后发现TSHR 基因表达究竟是展示了新的发现抑或是错误转 录所造成的假象还很难判断.另外,只能用 PCR检测到的TSHR转录物生理意义又是如何 国外医学内讣泌学分册2000年7IFl第20卷第4期 呢?为了证实PCR试验的结果,使用多种方法 检测TSHR基因,如Northern印迹杂交,RNA酶 保护,原位杂交等等正在为更多的研究者采用, 从而将进一步提供TSHR在眼球后存在的直接 证据. 虽然在眼球后组织中检测到TSHR转录产 物,但这些转录产物能否被成有功能活性 和(或)有免疫学意义的相关蛋白尚有争议的 曾有研究者应用放射免疫方法,在猪的眼球后 结缔组织膜上检测到低亲和力的,能被I标记 的猪TSH可逆性结合的位点,此位点能被GO 患者血清中的IgG优先识别l.Bnrch等用对 应TSHR352.367氢基酸的多克隆抗体在GO患 者的球后成纤维细胞培养物中检测到了THSR. spitzweg等采用高度敏感的免疫标记技术和 对应hTSHR不同抗原决定簇的单克隆及多克 隆抗体,在甲醇固定的眼球后成纤维细胞和结 缔组织中发现了独特的细胞浆TSHR样免疫活 性,这种免疫活性在腹部成纤维细胞中未有发 现;在GO患者的眼外肌肌束膜成纤维细胞中 可以发现TSHR样免疫活性,而眼外肌则投有; 在2%多聚甲醛固定的成纤维细胞显示出特异 的细胞膜相关的TSHR样免疫活性.上述试验 结果是用多种分别针对TSHR不同抗原决定簇 的抗体所获得,表明编码TSHR的RNA能够被 眼球后成纤维细胞翻译成有免疫活性的TSHR 样蛋白.并且,Bahn等使用免疫组化方法直 接显示了GO患者眼球后脂肪/结缔组织切片 中有TSHR的表达,而正常个体没有表达;在培 养的早期传代(第一,二代)眼球后前脂肪细胞 成纤维细胞可以检测到TSHR的表达,这种培 养物中包含部分脂肪细胞,但是这些细胞在以 后的传代过程中丧失了TSHR的表达和脂肪细 胞特异性染色,表明受体的表达和GO眼球后 脂肪组织的积聚是由人体内的某种体液因子所 刺激.他们还发现TSHR在眼球后的表达受 TSH或其他TSHR配体的刺激,因为眼球后成 纤维细胞培养物用TSH处理后72h,完整的 TSHRmRNA(2.4kb)及其片段(1.3kb)的表达 量都有所增加.但是,有人发现TSH对球后 4 成纤维细胞合成葡糖胺聚糖(GAG)并无刺激作 用,而GAG对GO的发病相当重要…,也未能检 测出放射性标记的TSH结合到眼球后脂肪细 胞膜上. 22TSHR基因突变与GOBalm等报告在 2例患严重GO,胫前粘液性水肿,指端粗厚和 高TSAb水平的患者中,存在TSHR第52位密 码子第一个碱基的突变,即C52~A52,导致苏 氨酸转变为脯氨酸.这种替代可导致TSHR胞 外区域的构象发生改变,使该受体蛋白的免疫 原性或功能发生改变,有可能TSHR的突变形 式免疫原性特别强,导致对抗TSHR的自身免 疫反应也特别强,从而产生高TSAb及显着的 临床表现.他们的研究还发现患者的TSHR基 因187位密码子第3位碱基存在多态性.另 外,在7名严重GO患者中,发现其中一名患者 眼球后成纤维细胞的TSHRmRNA有点突变, 这个突变导致在TSHR公认的抗原性决定区内 发生了单个氨基酸的置换,导致TSHR对TsH 刺激的反应性增强J.Cuddihy等发现 TSHR基因52位密码子突变比例,单纯Graves 病为15%,Graves病伴GO为l7%,Graves病伴 GO和胫前粘液性水肿为40%,Graves病伴GO, 胫前粘液性水肿和指端粗厚则达到60%.其 它的点突变也有报道'.但Watson等_I未 发现编码区的多态性与Graves病和GO有关. 分析其原因可能是参与GO发病的因素很多, 如人类白细胞抗原(HLA)分型,遗传背景,环境 因素等,因此在部分GO患者就检测不出TSHR 基因的突变. 2.3TSAb与GO一般认为Graves病的发病 是由于TSAb的存在,它结合到TSHR上,模拟 TSH的作用,导致甲状腺滤泡细胞膜上的TSH 受体过度兴奋,引起甲亢及甲状腺肿大】. 临床资料显示8%一12%的GO患者甲状腺功 能正常,血循环中甲状腺激素水平没有升高,也 无治疗甲亢的历史,但检测患者血液可发现部 分患者的TSAb增高】.在伴发眼病的Grayes 病患者中,TSAb阳性率较不伴发眼病的患者 高,严重的GO患者常有高滴度的TSAb_】. 18l 患者TSAb的改变程度可反映眼部的病变程 度,在Graves患者血清中可检测到能够刺激 培养的皮肤成纤维细胞合成胶原的单克隆 TSHR抗体,37.BarUdena等发现因Graves甲亢 而行放射治疗的患者中,GO的发生率增高达 15%(药物治疗为3%).探讨其原因可能有 ?"I治疗导致甲状腺释放的甲状腺一眼眶组 织共同抗原增加.?I治疗引起甲减,TSH升 高,促进眼球后成纤维细胞GAG合成增加. 到目前为止,尽管在眼球后细胞上检测到 了TSHR转录物以及TSHR样免疫括性的存在, 但是要阐明TSHR在GO发病中的作用仍有许 多问题有待解决,如TSHR究竟是在成纤维细 胞,脂肪细胞还是眼外肌细胞上表达?在人体 内TSHR如何与TsH,TSAb结合以及结合后的 信号传导等.相信随着技术的发展,GO发病的 研究一定会走向一个新台阶. 参考文献: 【IJtteufelderAE.Pt1.:sofGravesophthalmopaJth;,:l椰I cm器and.pr.re[J]Et!rJEr,doelinol,1995,132: 532—54l 【2JM.AMHasthe'噼Iautoanti~nhG啪盥.q止一 '一Ilybeenfound[J]?lancet.1998,352:595—596. 3J51ac~yrw,lliehlmairAM,itzwegc,d.Deteeti~0f- l:~ueleieacid目fidllengthluaanthyrtca~inreceptor inorbitaland.pretiblalfibrnIp丑曲bmG啪器.0ph— Ihalm:~yandp嘣ibid一-[J].卫y_'ij,1997,7t3 , I2 【4JllurmanKI).叩姐hn0P山:Whattheinitial出 non~ity【JJ?Et!rJEildoer~o1.1997,136:583—585. L5lteufdd~AEInvolvement山eorbitalr止加b1缸and'ISH r.髓inthepB堆商sGI呷埘nhn0P山[J]. y删d,1995,5:331一:NO 【6JR-lteM1k't'盯in~. vmiddi9- ease[J].NE?JMed,1997,挪:1675—1681 l7Js叽deJv,I哪J,dmM,d.s?I1日Iic趼d雄fdi口e ?lthe1sHr.einId[J]J ChD山cTd^eLBb.1995.舯:2577—2585 [8]脚锄M,Jdm.Th.lI-0fG删d白e啪[J]. ?幽CNAm.1998,:73—89 [9J附mlis,I~tlton,Ite,ddd~AE,H^c】l raulali~inthee:amedlll~d0m0fthe吐q】inreceP' with"嘶[J].Ja l82 /~ietab,1994.78:256—260 [1O]spic,aw,HlmtN,el"o1"?一tllym一 reee叮8曲e瞄煳【0rL删棚w肥日cIivinh咖 il日l[J].EurJFm0oati~l,1997.136:599—607 11]cfi叩惜,L槲C.I-Mli~ollM.H.Thy~mr?印tmn- d毗日humanadipDse}[JJaF~deeramlNemb, 1997.82:00?一晒. [12]MBjorBJ,CuresA.n一AG.The舢leith日Ild5plce variantthy~lmpinmis自excl~velyin 呷e0f.血加cular耐口:aLinktothePH山.邑芦瑚b0f胁一 咄l'-I'y[J].1llceheraBitchy9c0??, 1997,7:493—496 [13]BRS,D吣柚chI,N蛆N.al1'ynlt'reo0r pre婚lminGl州't帅?emmecfid蚺L-eB:P autismmGW'0pbl'.:jq-I'yJ]JClinF~tcefinal Net~b.1998.83:998—1002. [14]m,~lleltiD.B?sG.et._nl邢receptor 叫【9f【1rthedeleeti~0f_皿聊眦曲eprotein叩edin re10ar丘b哪b0bed丘咖patj衄b'0ph? tI?岫[JjJcd0口Mdab,1994.78:1384一 国外医学内分泌学分册2000年7月第20卷第4期 l391. [15]BRS.D,auc~CM,Jdmw.et.?{qmr.c叩 p?m?lILl?d(v'1日lpreadil:~cyten]1 Imed~ymlmpinJ]..1998,8:193—196 [16]cI】dd岫RM.Dutt~nCN,Ba}】nRSA,唧hminthe* tr卸吨LllLlar?llBjn0fthe山ymITop瑚epl盯hiya触i a}棚丑u删删如刊s衄妇e[J]1,, 1995.5:89—95 [17]BalmRs.HldAE,Duttc~CM.AntlTII?0fthe 'rSH~eptorin0c山fibrobl~t丘伽emw"hC~-a. %'砷II山帕p吐hy[J]JEndoe6nelln~st.1993.16{叫 2—6):42. [1吕]Wat~,nI:T,F唧dIA,PiekefillAP,Lao1"硼咖 e目lapc々0rl鲫inthe?I】g日e出ym rd【日seJ]Jcli口D ~iemb,1995.80:1032—1051 [19]Ntmd~L,?【C.BjF,elRelati~ipbelween therapyfor帅蛐叽dIhe?ufse0f'ophtlM- 眦p[JBJNed,1998.338:73—78 {收稿日期:t9994~-28修回日期:19994~-23) 一 , 儿童和青少年Graves病的治疗现状 童_.综述邹大进审校?J (第二军医大学附属长海医院内分泌科,上海2oo433) 摘要:与成年人相比,儿童和青少年G刖船病(GD)患者治疗上有其特殊性,治疗效果直接影响患儿 的长期生活质量.目前常用的3种治疗方法(抗甲状腺药物治疗,放射性"碘治疗和手术治疗)各有利 弊.为重视和提高该年龄组GD患者的治疗敢果,简要综述国内外治疗现状(包括近期开展的介入栓塞 治疗),并对治疗方案的选择进行探讨.弋0,d;I'—一 关键词:儿童和青少年:G硎船病;抗里犍婆荮物治疗:放射性'碘治疗;手术治疗;介厶治疗 中田分类号:11581.105文献标识码:A文章编号:1003—5435(2000)04—0182一.' Gmves病(cD)在儿童和青少年(年龄<l吕 岁)中均可发生,但较少见,约占全部GD患者 的1%5%.该年龄段的患者有其特殊性,如 治疗效果差可影响生长发育及智力;抗甲状腺 药物(ATD)治疗为首选疗法,但复发率高,与成 年GD患者相比,国内外学者对该人群的观察 研究报道极少.一项调查研究发现,欧洲各国 作者简介:黄勤(1966_),士,浙江杭州人,主治医师,在 读博士' 家及地区在青少年GD的诊断和治疗方面存在 差异,甚至存在不正确之处.与国外情况相似, 我国随着全民碘化食盐的逐步强化和普及,各 地内分泌专科医生均发现甲状腺功能亢进症 (甲亢)的发病率出现了普遍升高的趋势,同时 甲亢的治疗效果降低,复发率增加.为重视和 提高儿童及青少年GD患者的治疗效果,将国 内外治疗现状作一综述. 1A1D治疗 目前,A'rD仍是儿童和青少年GD的首选