【doc】DNA—DNA分子杂交技术检测EIEC侵袭力基因的探讨

【doc】DNA—DNA分子杂交技术检测EIEC侵袭力基因的探讨 DNA—DNA分子杂交技术检测EIEC侵袭 力基因的探讨 中国公共卫生l991年第7卷第3期11? DNA-DNA分子杂交技术检测EIEC侵袭力基因的探讨 山东省卫生防疫站(济南250014)傅继华胡建华李云圃 刘齐家关冰段玉芹 摄要车文用福氏志贺氏菌5型致病性质粒PWR]00,内切酶ECOR1限制产生的 17kb片段为探针, 经P砖口酎译(Nicktranslatioa)标记,对3o株E1EC进行DNA?DNA分子杂交.结果 杂交阳性率为 90,高于胍鼠角膜结膜侵袭力试验(B7%.局血请型两项实验结果看不出弱显差别. 证实EIEC与 志贺氏菌侵袭力基囡序列具有同源性. 侵袭性大肠杆菌(EIEC),是较为常见的腹泻癌 原菌之一.其致病机理与志贺氏菌相类似,侵袭力由质 粒控制.我们用{;;氏志贺氏菌5型致病质粒PWR100, 由核酸限制性内切酶ECORI消化产生的l7kbDNA 片段为探钟,进行DNA—DNA~-子杂交,检测EIEC 的侵袭力基,j}与脬鼠岛脱结膜试验进行了对比观 察,结果报道如 1材科与方法 1.1菌株来源3O株EIEC由本省腹羁病监.测点 1987~1988年分离,经生化反应,动力及血清学系统 鉴定,均符台EIEC.对照菌株非0l群霍乱弧菌和伤 寒沙门氏菌,均由木站菌种室提供. 1.2豚鼠角膜结腹试验方法及结果判断按参考 文献c进行. 1.3DNA—DNA分子杂交菌藩原位杂交涪按 文献?进行,同时用非01群霍乱弧菌和伤寒门氏 菌进行对照.所用[a一3P]dNTP缺口翻译(Nick translation)标记探针DNA由军事医学科学皖五所 提供. 2括果 DNA分子杂交(图1)在30株EIEC 2.1DNA— 中,有27碌侵袭性基囡DNA分子杂交阳睁(如图1所 圈1DNA分子采奎结果 示,每林菌一个样,阳性者为一个黑点,空白者为 阴姓),阳性率为90.对照菌l绦非0l群霍乱弧菌及 伤寒沙门受苗,DNA分子杂交均膈性. 2.2豚鼠角膜结膜侵袭力试验30株EIEC中 佗0株侵袭力试验阳性,阳性率为67,较DNA— DNA分子杂交的阳性率(90)明显偏低.经统计学 处理(x=5.14,P<0.05)二者有显着性差异. 2.3不同血清型DNA—DNA分子杂交和豚鼠角膜 结膜试验结果(附) 附表不同血清堑DNA分子索奎和角囊试蟹菇果 血清型菌株数DNA杂空角腱侵袭力 0:28 0:154 0:29 0:112 0:13& 0:144 0:i52 5讨论 侵袭性大肠杆菌与志贺氏凿在致病性上有着相同 的杌理,二者侵袭社基因序列基本相同{?.因此用志 贺氏茵侵袭性基囡来检测EIEC的侵袭性基因是可 行的,本拴测结果表明了这一点.实验中有少数菌株 DNA-DNA分子杂交阳性,而豚鼠角膜结膜侵袭力试 验则显示阴住结果,其原因可能有以下两个方面.(1) 本次所用探针只是侵袭力基固的一部分,不是其全部. 医此DNA分子杂交阳缝,只能说明侵袭力基因的存 在.部;菌株由丁悖代繁殖过再巾可能会出现侵袭性 基医部分缺舟或突变,而使其功能不能表选,显示侵 袭力胡,(2部分菌株侵袭力减弱,由于生物体间反 I蔓性的差异,致陡豚鼠角膜结聪侵袭力阴性.另据文 献报道?,EIEC在豚鼠角膜侵袭力试验中,仅有 80出上的菌株3天内显示阳性结果.本次试验只观 , 431IlJ 中国公共卫生I991年第1卷第3期 察3天,可能有,部分菌栋被错判为侵袭力阴性. EIEC的侵袭力受质粒控制,这种侵袭矬质粒的 存在很稳定,舅丢失?.本实验日一发现存一部分 菌株(10)DNA—DNA分子杂交和豚鼠角膜结膜侵 袭力试验均瞬性,可能是这些菌株侵袭性基因完全丢 失所致 不同血清型间EIEC的侵袭力是否有差别,由于 本次实验菌种数量有限,尚难得出肯定结论.但在实 验中发现,3株0:29型中,只有1株显示很弱的侵 袭力,其余2株侵袭力为阴性.是否该血清型侵袭力 较其它血清型为弱,有待进一步证实. 目前测定EIEC侵袭力常用的方法是豚鼠角膜结 噗侵袭力试验T~Hela细胞侵人试验.前者需要动物, 实验周期长,动物个体间的差异对结果有影响.后者 则需培养细胞等特殊设备.且实验较繁琐.DNA? DNA分子杂交具有简便,快速,特异性强,敏感性 高,,敬能作大量样品试验.如用生物素标记 DNA探针,悃!可克服同位素标记半衰期短,危害 人体等被陷.用以取代侍统的豚鼠角膜结膜侵袭力试 验和Hela细胞侵八试验,是一十颇有希望的检涮方 倍. 参考文献 1.部昌槐.等.福建省脑侵袭性大脑杆菌翻壹研究.福 建医学杂志1989I1lf6):26. 2.博继华.等.山东霍乱丹子藏行病学研究.中华灌行 病学杂志l9明J9(特3)l3o8. 3.翟峰,荨.抗志簧障菌一和侵袭性大脑杆?毒由大质 粒编码的共同外瞑置自的特异性臣于血靖的研?.中 华藏行病学杂志198I9(特4)_87. 4.杨正时.志贺氏茸和侵袭性大脑杆菌基目鬻竹擎断技 木和菌痢研究进展.北京军事甚学科学院掌生糖流 行病研究所,1D88_141. (军科院五新事掇太厨虑给车实验租多邦肪.衰示癌 埘)(1989-o5-2B收藕) 湖南省部份乡镇企业水泥厂生产环境 有害因素危害现状调查 湖南省劳动卫生职业病防治研究所(长沙410005)龙蛊喜田国彬 为摸清其劳动卫生现状及生产环境中有害因素危 害程度,我们对ll家水泥厂进行了劳动卫生学监测. 现报告如下. 1内窖与方法 I.1粉尘I丧凄测定用Fc一2型粉尘采样器 (武汉分析仪器厂产),于原料破碎,配料,球磨, 成球等的生料矽尘作业工段,采样测定矽尘浓度I从 立窑烧成卸料口,破碎,包装等的水泥粉尘作业工 段,采样测定矽酸盐尘浓度.同时,在生料和熟料工 段分别采样啶游离=氧化硅含量. 1.2有害气体测定用Qc一2B型气体采样器 (武汉分析仪器厂产),于立窑烧成炉朋察口采样涮定 二氧化硫,硫化氢,氟化氲. I.3高温和辐射热强度测定用DHM2型通风 干湿表(天津气象海洋仪器厂产)和MlR一1型辐射热 计(锦州消防器材厂产),于立窖烧成炉观察口涮定高 温和幅射热强度. 1.4噪声强度测定用Js一1型精声级计(衡蜜 阳仪器厂产),于破碎,球磨,立窑鼓风机等产生噪 声源的各个工段.分别涮定噪声强度. 2培果 2.I粉尘浓度生料作业工段采样24份,矽尘旅 度平均5,1.5f8~226)mg/m,最高超过标准(国家 卫生标准2mg/m'7112倍 2.2游离二氧化硅含量生科中的游离二氧化硅 含量平均为18.66(13.20~26.86),熟料中的游离 二氧化硅含量平均为7.39(2.31~10.06),生料和 抖中的游离=氧化硅含量差别较大(P<O.017. 2.3有害气体和气象条件结果只有两个点的= 氧化硫(19.8,25.3mg/m)超过标准(国家卫生标 准15mg/m).其他均正常}高温介于25~37"C,相 对湿度为72~82,热幅射强度为0.7,2.0(cal/ cm"rain). 2.4噪声测定共测63个点,噪声强度介于62, l06dB(A),有{4个点超过标准(85dB(A)),超标率 69.8. 5讨论 调查结果表明,乡镇企业水泥厂的劳动卫生条件 均很差,生料和熟料工段在生产过程中都产生大量粉 尘,作业点粉尘浓度超标串达100.据现场调查, 产生高粉尘渡度和高噪声的原因一一是防护设施不配 囊,二是管理不健垒,三是对防护设施使用不 当,检修制度不严,结果造成严全的跑冒,滴现象. t参加词壹的还有芦白拣事再勤,子梅,簟仁.有 兰地(市)职防所为奉罚查提供了协助和部昔数?.在此一并 蕈谢)f199o-ol-16收?)