大鼠延髓巨细胞网状核与脑干内脏运动核间的纤维投射研究

大鼠延髓巨细胞网状核与脑干内脏 运动核间的纤维投射研究 【摘要】 目的 研究成年大鼠延髓巨细胞网状核与脑干内脏运动核的神经联系。方法 将顺、逆行神经示踪剂WGA- HRP注入一侧巨细胞网状核，光学显微镜下观察该核团与一般内脏运动核（迷走神经背核、上泌涎核、下泌涎核）和特殊内脏运动核（面神经核、 疑核、三叉神经运动核）的纤维联系。结果 在一般内脏运动核、双侧迷走神经背核、下泌涎核均可 看到少量逆行标记细胞及神经纤维末梢，但上泌涎核未发现任何标记，在特殊内脏运动核的面神经核、疑核、三叉神经运动 核团双侧均见逆行标记细胞及神经纤维终支。 结论 巨细胞网状核与大多数脑干内脏运动核有双向纤维联系。 【关键词】 巨细胞网状核;神经示踪剂;迷走神经背核;疑核;大鼠 　　经典神经解剖学清楚地阐述了位于脑干抑制区的巨细胞网状核（gigantocellular reticular nucleus）通过网状脊髓束的神经支配对骨骼肌起抑制效应［1-2］。根据诸多基础及临床研究，其对肢体协调运动的抑制性 调控作用已被医学界公认。近年来随着人们对功能认识相对空白的脑干网状结构这一区域的深入了解，不断发现巨细胞网状核的其他调控作用。比如其对心血管、呼吸等内脏活动有不同程度的影响［3-5］，认为该核 团所在区域属于降低血压的“降压区”及调节呼吸节律的吸气中枢［6］。临床痉挛性脑瘫患者由于中枢抑制与兴奋调节失衡，产生躯体运动及胃肠道功能障碍，这些都说明巨细胞网状核与内脏活动有着某些联系，但目前国内外研究内脏运动核与巨细胞网状核相关联系的资料较少，本实验主要观察该核团与直接调控内脏活 动的脑神经核团间的神经联系，说明它与内脏活动有关联。 　　1 材料和方法 　　1.1 动物和试剂 　　180～220 g Wistar大鼠30只，雌雄不限。4%WGA-HRP（溶液）购自美国Sigma公司，四甲基联苯胺（TMB）为美国Research公司产品，二甲基亚砜（DMSO）为美国Merck公司产品，亚硝基铁氰化钠（SNF）、钨酸钠（ST）均为美国Sigma公司产品。 　　1.2 仪器 　　江湾Ⅰ型C脑立体定位仪，CM1800恒冷冰冻切片机，C09 - A4772型微量注射器，90型牙科钻，P-30型 微玻管拉制仪，德国Leica光学显微镜及数码摄影 装置。 　　1.3 方法 　　大鼠在戊巴比妥钠（50 mg·kg-1）或水合氯醛（500 mg · kg-1）腹腔注射全麻下，通过两侧耳杆和齿栓将大鼠头部固定于脑立体定位仪，剪毛，消毒，在大鼠头部 切一正中切口，分离皮下组织，充分暴露颅骨前囟到人字缝后1cm ，按照Paxinos和Watson大鼠脑立体定位图谱定位Gi（图谱中巨细胞网状核的缩写），以颅骨中线左侧或右侧旁开1 mm与外耳道连线后方2.8 mm 交汇处为圆心（Gi中心点坐标）钻一小孔，清除此孔内脑膜及少量溢出的脑脊液，将前端套好微玻管（已吸入WGA-HRP）的1 μl微量注射器固定在定位仪推进杆上，按上述坐标使微玻管尖端从脑面向下小心推进7.6 mm，缓慢注入4%WGA-HRP 0.05～0.10 μl，留针20 min，缓慢起针，缝合。有28只动物存活2～4 d （少数为4d ），在麻醉状态下，经左心室快速灌流20～25 ℃生理盐水100 ml冲去血液，继而灌入4 ℃体积分数为4%多聚甲醛及1.25%戊二醛的0.1 mol ·L-1磷 酸缓冲液（PBS，pH7.4）固定，打开颅骨，迅速取出整个脑组织，后固定4 h，再入4℃ 20%蔗糖PBS液沉底，截取脑干部分，冰冻冠状连续切片，厚40 μm，隔1取1，注射部位附近切片全取，切片收集于装有0.01 mol·L-1PBS液的孵育盒，其中10只动物切片按Mesu- lam1978年推荐的TMB-SNF法［7］显色，另外18只动物切片用TMB-ST法［8］ 显色。整个显色反应过程注 意避光。 　　1.4 切片处理 　　将反应后的切片顺次贴在涂抹铬钒明胶的载玻片上，避光晾干，切片收集2套，其中1套中性红复染，用于对照观察和定位核团。过梯度酒精、二甲苯，中性树胶封片，光学显微镜下观察并记录、拍片。 2 结 果 　　2.1 注射区