正常高值血压人群ACE基因多态性的相关研究_唐黎群

收稿日期:2013 － 01 － 28 基金项目:浙江省教育厅资助项目(Y201122756) ;浙江省科技厅资 助项目(2011C23001) 作者简介:唐黎群(1979 －) ，男，福建莆田人，主治医师，硕士研究 生，研究方向:老年病的临床及科研。 ［5］ 金泉克，许建华，肖海娟，等．肠胃清煎剂对裸鼠大肠癌皮下 移植瘤奥沙利铂治疗的增效作用［J］． 环球中医药，2012，5 (3) :175 － 179． ［6］ 金旻逸，丁越张彤，等．肠胃清颗粒提取工艺研究［J］．亚太传 统医药，2011，7(2) :20 － 23． ［7］ 黄继汉，黄晓晖，陈志扬，等．药理试验中动物间和动物与人 体间的等效剂量换算［J］．中国临床药理学与治疗学，2004，9 (9) :1069 － 1072． ［8］ 司徒镇强，吴军正．细胞培养［M］．西安:世界图书出版西安 公司，2007:356． ［9］ Kenneth Kolinsky，Ben － Quan Shen，Yu － E Zhang，et al． In vi- vo activity of novel capecitabine regimens alone and with bevaci- zumab and oxaliplatin in colorectal cancer xenograft models［J］． Molecular Cancer Therapeutics，2009，8(1) :75 － 82． ［10］ 王北婴，李仪奎． 中药新药研制开发技术与［M］． 上 海:上海科学技术出版社，2001:995． ［11］ PrewettMy，DeeviDSy，BassiRy，et al． Tumorsestablished with celllinesselected foroxaliplatin resistancerespond tooxaliplatin if- combined with cetuximab［J］． Clin CancerRes，2007，13(24) : 7432 － 7440． ［12］ LiliLiu，YokoNakatsuru，StantonL，et al． Base Excision Repair as a therapeu － ticTarget in Colon 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ACE基因型为 DI、 II、DD，占正常高值血压人群比例分别为 57%、34%、9%，与正常血压值组及高血压组对照比较无明显差异，无统 计学意义( P ＞ 0． 05) 。通过对 3 组人群按收缩压相差 10 mmHg、舒张压相差 5 mmHg分别进行组段比较发现 ACE 基因( DI、II、DD) 频率分布比较仍无明显差异，无统计学意义( P ＞ 0． 05) 。对正常高值血压组进一步行体质分型 (中医体质量) ，运用 Logistic分析发现气虚型、阴虚型基因与正常高值血压发生相关，进一步对所有入选人群 属气虚、阴虚型人群进行 ACE 3 种基因型与血压相关性进行比较，发现 II基因与 SBP增高相关，组间比较有统计 学意义( P ＜ 0． 05) 。结论:入选人群 ACE基因频率分布与血压无明显相关，但与不同个体中医体质相关。 关键词:正常高值血压; ACE基因多态性;中医体质 中图分类号:R596． 3 文献标志码:B 文章编号:1673 － 7717( 2013) 06 － 1370 － 03 Research on ACE Gene Polymorphism Among High-normal Blood Pressure Crowd TANG Liqun1，XU Xiaoling2，CHEN Ming1，ZHOU Ning1 (1． Zhejiang Provincial People’s Hospital(Zhejiang Medical College) ，Hanghzou 310000，Zhejiang，China; 2． Zhejiang Hospital，Hangzhou 310014，Zhejiang，China) Abstract:Objective:To investigate the relationship between normal blood pressure high value and angiotensin conver- ting enzyme (blood vessel tense element transformation enzyme ACE)gene polymorphism;at the same time to discusse two kinds of traditional Chinese medicine physique parting crowd ACE gene distribution and the correlation of blood pres- 0731 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1371 学 刊 sure． Method:120 cases of normal blood pressure high value of the people through the random method were selected and divided into normal blood pressure value group and hypertension group as two control groups． PCR － RFLP technical was used for detection 3 groups angiotensin converting enzyme gene polymorphism． Result:Normal blood pressure high value group main ACE genotype was DI，II，DD，which accounted for 57%，34%，9%，and the other two had no statistical significance (P ＞ 0． 05)． Based on the three groups according to the 10 mmHg difference of systolic blood pressure as well as 5 mmHg difference of diastolic blood pressure，it found that comparison of ACE gene (DI，II，DD)frequency dis- tribution had no significant difference (P ＞ 0． 05)． Further analysis for normal high value blood pressure group constitu- tion parting (TCM constitution scale)was made by Logistic analysis and it found that qi deficiency type，Yin deficiency type gene was associated with normal blood pressure high value． II gene and high SBP had correlation and there was sta- tistical significance (P ＜ 0． 05)． Conclusion:ACE gene frequency distribution and blood pressure have no obvious correla- tion，but related with different individual TCM constitutions． Key words:high － normal blood pressure;ACE gene polymorphism;TCM constitutions 正常高值血压是高血压的重要高危人群，是高血压病 预防的重要切入点。研究显示血压 120 ～ 129 /80 ～ 84 mmHg和 130 ～ 139 /85 ～ 89 mmHg中年人群 10 年成为高血 压病患者的比例分别达到 45% 和 64%［1］。血管紧张素 (angiotensin，Ang)是已知内源性升压物质中作用最强的激 素之一，而血管紧张素转换酶(ACE)基因是原发性高血压 研究的重要候选基因。但综合国内外研究仍不能确定 ACE基因为高血压的致病基因。而中医体质学认为体质 的差异性决定着个体对疾病的易感性，不同的体质对疾病 的发生具有一定的易罹性，许多相关疾病发生的“共同土 壤”在于其体质基础。因此体质因素关系到人体是否发 病、发病倾向和既病之后疾病的发展、变化、转归［2］。我们 试图在高血压高危人群即正常高值血压人群进行 ACE 基 因分布的研究，观察正常血压、正常高值血压、高血压 ACE 基因频率分布特点。同时筛选高血压易感体质类型。在易 感体质类型中分析 ACE基因频率分布对血压的影响。 1 临床资料 1． 1 一般资料 采用多阶段随机抽样的方法，先抽取杭州市主城区的 3 个社区，然后从每个社区参加体检的居民中随机抽取 200名杭 州主城区常住人口(5年及 5年以上)居民为调查对象，共抽取 600名。估计其中正常高值血压人群占 22%(132 人)。实际 入选行抽血检测为 120人，其中男 48例，平均年龄(60． 21 ±3． 94)岁，女 72例，平均年龄(57． 29 ±3． 91)岁。同时设正常血压 值对照组 120人，高血压对照组 120人。3组一般资料人口特 征及构成比等经检测无统计学差异(P ＞0． 05)。本课题研究 通过浙江省人民医院临床试验伦理委员会审核。 1． 2 诊断及纳入标准 正常高值血压采用《中国高血压防治指南》(2005 年修 订版)标准:正常高值血压［收缩压 120 ～ 139 mmHg 和 (或)舒张压 80 ～ 89 mmHg］。体质判断标准采用中华中医 药学会行业标准《中医体质分类判定标准》:体质分类与判 定(zYYxH /Tls7—2009) (中华中医药学会，2009 － 04 － 09 实施)。中医体质 9 种基本类型与特征:①平和质(A 型)。 ②气虚质(B 型)。③阳虚质(C 型)。④阴虚质(D 型)。 ⑤痰湿质(E 型)。⑥湿热质(F 型)。⑦血瘀质(G 型)。 ⑧气郁质(H型)。⑨特禀质(I型)。 1． 3 排除标准 合并肝肾疾病、呼吸系统或精神病患者;合并血液病、 自身免疫性疾病、肿瘤、妊娠或哺乳期妇女等。 2 方 法 2． 1 血管紧张素转换酶基因检测 2． 1． 1 标本收集 抽取入选者外周血作为检测样本，所有 研究对象抽血前空腹 10 h，均于上午 7 ～ 8 点抽取静脉血标 本 2 mL，然后注入含肝素抗凝剂的真空管中混匀，置于 4 ℃冰箱保存待用。 2． 1． 2 基因检测 (1)基因组 DNA 抽提:采用 DNeasy Blood ＆ Tissue Kit(Qiagen)抽提基因组 DNA，抽提两次。 见图 1。 图 1 DNA的提取 (2)PCR扩增体系与反应条件同预实验，使用的引物 为 hace3s － hace3as(根据参考文献设计两对引物，序列如 下:hace3s: GCCCTGCAGGTGTCTGCAGCATGT，hace3as: GGATGGCTCTCCCCGCCTTGTCTC3 和 hace5a:TGGGACCA- CAGCGCCCGCCACTAC，hace5c:TCGCCAGCCCTCCCATGC- CCATAA。) ，完成 3 组各 120 个样品的 PCR 扩增，并重复 1 次;其中正常高值血压组 3 号样品重复做了 2 次。 (3)PCR产物电泳，共进行了 3 次。见图 2。 图 2 PCR产物电泳 (4)数据分析:根据电泳的条带判读，较大的条带记为 I，较小的条带记为 D，结合血压以及姓名情况，得到血管紧 1731 第 31 卷 第 6 期 2 0 1 3 年 6 月 中 华 中 医 药 学 刊 CHINESE ARCHIVES OF TRADITIONAL CHINESE MEDICINE Vol． 31 No． 6 Jun． 2 0 1 3 中 华 中 医 药 1372 学 刊 张素转换酶基因频率分布结果。 2． 2 统计方法 根据等位基因的频率，对 ACE基因型分布进行遗传平 衡检验。按收缩压及舒张压区分组段的基因频率组间差异 使用 Genepop on the web软件进行组间差异分析。其它数 据处理应用 SPSS 17． 0(多国语言版)统计软件包进行统计 分析。包括卡方检验、logistic 回归分析等。P ＜ 0． 05 为差 异有统计学意义。 3 结 果 3． 1 基因分布情况 结果显示，电泳后 DNA 片段分别位于 190 和(或)490 bp。当 2 条带均为 190 bp时为 DD 型;均为 490 bp 时为 II 型;分别为 190、490 bp 时则为 DI 型。血管紧张素转换酶 基因分布频率在正常高值血压组与正常血压对照组、高血 压对照组比较无明显差异(P ＞ 0． 05) ，并将所有入选者分 别按收缩压相差 10 mgHg 为一组段、以舒张压压相差 5 mgHg为一组段分别进行多组间两两比较，均无统计学意义 (P ＞ 0． 05)。见表 1 ～ 3。 表 1 两组 ACE基因分布比较［例(%) ］ 组别 例数 基因分型 DI II DD 正常高值血压组 120 68(56． 9) 41(34． 1) 11(9． 1) 正常血压组 120 60(49． 6) 40(33． 3) 20(16． 6) 高血压组 120 61(50． 8) 43(35． 8) 16(13． 3) 表 2 按 SBP分组结果如下 Population pair Chi2 df P － Value A66 ＆ B75 5． 15378 2 0． 076010 A66 ＆ C77 3． 528328 2 0． 171330 B75 ＆ C77 1． 347944 2 0． 509680 A66 ＆ D21 3． 856121 2 0． 145430 B75 ＆ D21 0． 426139 2 0． 808100 C77 ＆ D21 0． 378572 2 0． 827550 A66 ＆ E08 1． 936800 2 0． 379690 B75 ＆ E08 0． 624113 2 0． 731940 C77 ＆ E08 0． 000000 2 1． 000000 D21 ＆ E08 0． 000000 2 1． 000000 表 3 按 DBP分组结果如下 Population pair Chi2 df P － Value A25 ＆ B71 3． 22038 2 0． 199850 A25 ＆ C66 0． 814523 2 0． 665470 B71 ＆ C66 3． 196897 2 0． 202210 A25 ＆ D75 1． 850158 2 0． 396500 B71 ＆ D75 1． 607889 2 0． 447560 C66 ＆ D75 2． 201629 2 0． 332600 A25 ＆ E08 1． 953940 2 0． 376450 B71 ＆ E08 1． 077387 2 0． 583510 C66 ＆ E08 1． 813622 2 0． 403810 D75 ＆ E08 0． 350684 2 0． 839170 3． 2 不同体质分型与 ACE基因表达的相关性分析 经 logistic回归分析提示气虚型及阴虚型为正常高值 血压人群主要危险因素，并继续分析 3 组人群气虚型(80 例)及阴虚型(89 例)中 ACE 基因(DD、DI、II)与血压的关 系，筛选出 II 基因与 SBP 增高相关，组间比较有统计学意 义(P ＜ 0． 05)。见表 4。 表 4 2 种中医体质分类中 3 种 ACE 基因分型与血压关系的比较 组别 分型 例数 SBP (mmHg) DBP (mmHg) DD 12 120． 31 ± 5． 90 80． 31 ± 3． 12 气虚型 DI 34 118． 71 ± 9． 76 83． 14 ± 3． 80 II 34 126． 80 ± 8． 44 78． 80 ± 2． 68 DD 10 121． 00 ± 6． 19 80． 21 ± 3． 22 阴虚型 DI 36 120． 00 ± 11． 58 78． 80 ± 6． 72 II 43 131． 0 ± 5． 55 76． 40 ± 6． 54 4 讨 论 RAS系统在水盐平衡和血管容量的维持中起到核心 的作用，刺激或抑制该系统可引起血压的升降。ACE 是 RAS中的重要组成部分，它主要受控于 ACE 基因，能催化 生成具有强烈血管收缩活性的物质。现有研究表明，人类 血管紧张素转换酶(ACE)基因多态性与高血压的发生可能 相关。2000 年由 Donoghue 等［3］和 Tipnis 等［4］发现，ACE2 的发生与 ACE相反的生理活性作用，使人们对肾素 －血管 紧张素 －醛固酮(RASS)系统有了新的认识。人 ACE 基因 存在 3 种基因型:II 纯合型、ID 杂合型和 DD 纯合型，表现 在内含子上，不影响 ACE 的分子结构，可影响体内血浆与 组织中 ACE 的活性。并干扰肾素 － 血管紧张素系统 (RAS)的功能。综合国内外研究，发现对于 ACE 基因 I /D 多态性与高血压是否有关的研究结果有较大的分歧，所以 ACE的基因多态性与心血管疾病相关性的研究仍然是个 热点。 中医体质学认为体质的差异性决定着个体对疾病的易 感性，不同的体质对疾病的发生具有一定的易罹性。而某 些体质的人群可能与高血压的发病相关。本研究相关性分 析提示气虚型、阴虚型为血压增高的易感人群。 研究中对血管紧张素转换酶基因分布频率进行分析，结果 提示在正常高值血压组、正常血压对照组、高血压对照组组 间两两比较无明显差异，无统计学意义，二者间没有必然相 关性。继续结合体质分型对 ACE 基因频率分布与血压的 相关性做进一步研究，发现气虚及阴虚人群 II 纯合型与 SBP增高相关。提示个体体质差异性可影响 ACE 基因的 研究结果，高血压病的相关基因多态性研究可从中医体质 分型基础上进一步展开。 参考文献 ［1］ 中国高血压防治指南修订委员会．中国高血压防治指南 2010 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