不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶活性测定的影响

临床检验杂志2005年第23卷第6期ChineseJournalofClinicalLaboratoryScience，2005，V01．23，No6 423 文章编号：1001-7“x(2005)06。0423-02中图分类号：R446】 文献标识码：A ·论著· 不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶活性测定的影响 郑铁生3，叶立新“，薛锦“，昊志勇“，张徐8，盛微翔8(扛苏大学a医学技术学院，b．附属医院检验科，江苏镇江212001) 摘要：目的探讨不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶测定的影响，为临床压用提供依据。方法通过参考范围调查，临床病 例标本和，临床随机成人血清中碱性磷酸酶的测定，分析比较3种不同缓冲体系测定方法之间的差异。结果二乙醇胺、2一乙 基氨基乙醇、2一氨基_2一甲基．1-丙醇3种不同缓冲体系的方法测定血清碱性磷酸酶活性的参考范围分别为：(98±57)U／L、(86 ±44)U／L、(75±42)U／L；组问比较P<005。221例7组肝病患者标本用3种方法测定，组间结果比较，P<0．05。成人随机 标本109例，3种方法的结果比较，P<0．05，结论不同缓冲体系的测定方法对ALP测定的结果差别很大，即使底物相同，采 用不同激活型缓冲体辱，也套对测定结果带来较大差异，其参考范围也不一致。 关键词：碱性磷酸酶；缓冲体系；参考值 碱性磷酸酶(alkalinephosphatase，ALP)是I临床 应用最多的酶之一。常用测定方法是磷酸酰基受体 缓冲液和自身色原性底物4-硝基苯酚磷酸盐的连 续监测方法”1。各国临床化学会推荐的方法，底物 相同，所选缓冲剂种类不同，其测定结果也不同。德 国l临床化学会(GSCC)和斯堪的钠维亚临床化学会 (SSCC)用二乙醇胺(diethanol，DAE)；美国临床化 学会(AACC)和国际临床化学会(IFCC)用2一氨基一 2一甲基．1一丙醇 (2-amino-2一methyl一1一propanol， AMP)L2J；日本临床化学会(JSCC)则选用2一乙基氨 基乙醇(2-ethylaminothanol，EAE)L341。我们用 DAE、EAE、AMP3种激活型缓冲体系进行了ALP测 定的相关性研究，现报道如下。 1和方法 1．1试剂ALP检测试剂盒：EAE法(口本进口分 装，批号2004005002)、DEA法(德国进口分装，批号 2004008001)、AMP法(美国进口分装，批号 2004009002)均购自科华公司。校准品(Randox公 司产品，批号CAL2350LOTNO402UN)。质控血清 (上海牛物制品研究所，批号200400201) 1．2仪器日本岛津CL-7300型仝自动生化分析 仪，按照试剂说明书分别设置3种方法的实验参数。 1．3方法血清ALP测定用上述3种不同激活型 的缓冲液试剂，分别以校准血清进行仪器校准，再进 行室内质控血清测定，质控结果在允许范围内，进行 上述样本的测定。 1．4统计学分析所有数据均采用SPSS软件的 onewayANOVA方差分析，组问q检验，P<0．05差 异有显著性。 2实验结果 2．1参考值调查取健康杏体者102例，其中男 61例，女41例；年龄23～60岁，平均47岁。清晨空 腹采咀，2h内分离血清，分别用3种方法测定血清 ALP活性。结果：DAE法(98±57)U／L；EAE法(86 ±44)U／L；AMP法(75±42)U／L。组问比较：DAE 法与EAE法间P<0．05．与AMP法问P<0．0l； EAE法与AMP法问P<0．05。 2．2临床病例观察取本市传染病医院住院的肝 病患者221例，其中男145例，女76例；年龄21～58 岁，平均49岁。参照1990年(上海)全国病毒性肝 炎会议修订的诊断标准分型，其中急性黄疽型肝炎 组24例；急性无黄疽型肝炎组43例；慢性活动性肝 炎组52例；慢性迁延性肝炎组45例；肝硬化组34 例；重症肝炎组7例；肝癌组16例。均于清晨卒腹 采血，2h内分离血清，分别用3种方法测定AI．P活 性，结果见表1。 表1 3种方法测定肝病患者血清ALP活性的结果(i !s，U／L) 由表1可知，各肝病组血清ALP的活性与各法 的参考值柏比有极显著差异，P<0．001；3种方法测 定的结果：DAE法与EAE法间P<0．05，与AMP法 作者简介：郑铁生。1948年生，男，副教授，丰要从事临床牛化及检验技术方而的教学和研究丁作。 万方数据 424 临床检验杂志2005年第23卷第6期CbineseJournalofClinicalLaboratory"Science，2005，Vo[23，No6 问P<0．Ol；EAE法与AMP法间P<0．05。 2．3成人随机标本测定附院门诊及本市传染病医 院住院病人共109例，早晨空腹采血并及时分离血 清，用DAE、EAE、AMP3种缓冲体系的试剂龠分别测 定ALP活性，当日测定完毕。结果(i±s)分别为 (165．3±83．4)U／L、(156．7±62．4)U／L、(i47．5± 57．7)U／L。统计分析，DAE法与EAE法Il自JP<005， 与AMP法间P<0ol；EAE法与AMP法间P<0．05。 3讨论 一 血清ALP测定方法的底物相同，所选缓冲剂种 类不同，其测定结果差异较大。本实验用3种不同 激活型缓冲体系方法分别测定了血清ALP参考值 范围、各类肝病病人以及成人随机标本，结果3种方 法之间均有显著或非常显著差异(P<0．05或P< 0．01)。提示不同缓冲液的方法对ALP活性的表达 不同。ALP测定常用的缓冲体系分为激活型、抑制 型和惰性型3类，其测定结果差异很大，主要原因是 其缓冲体系不仅具缓冲作用，还可作为磷酸酰基的 受体，提高酶促反应的速度，从而导致了测定结果的 不同。。“。本实验中，3种都是激活型缓冲体系，但 激活作用也存在较大差异。一般认为相同标本存在 的差异大多为方法问的问题。在上述3种方法中， 最可能的是试剂盒试剂成份的质和量的问题，如① 底物虽然相同，但用量不同，有的用16mmol／L，有 的用10mmol／L，严重影响着酶促反应速度；②Mg“ 与Mn“是ALP的激活剂，大多采用Mg“，最适浓度 为1．0mmol／L，但在有的配方中只t}；}j0．5mmol／L； 馒)ALP的抑制剂很多”1，有磷酸盐、草酸盐、zn“、 Be“、AsO“、CN一及巯基化合物等，L一苯丙氨酸、L一 色氨酸、L一亮氨酸、L一半胱氨酸等L一型氨基酸对ALP 都有抑制作用，还有尿素、EDTA对不同来源ALP也 可产生不同程度的抑制作用。当试剂纯度不高，混 有极少量E述物质都有可能对测定带来较大影响。 由此可见，即使底物相同，采用不同激活型缓冲体 系，也会对测定结果带来较大差异，其参考范围也不 一致，应用时值得注意。 各医疗单位一口选定某种缓冲体系的测定方 法，应确定本单位的A"参考范围，并且不可随意 更换ALP速率法测定的试剂盒，否则将会给临床提 供错误的信息。■生主管部门应组织力量，尽快提 供一种ALP速率法测定的推荐方法，尤其要其 试剂盒组成成份的质量标准，以统一各医疗单位间 的检验结果，为临床提供可靠信息。 参考文献： [1]郑铁牛l临床生物化学检验fM]，北京．中日医药科技出版社， 200456-57 [2]ExpertpmieloDEnzymaes：ApprovedRecommendation(1985)OHIF一 (：CMethodsbrtheMeasumment,ffCatalyticConcentrationofEn— zymesPart3 IFCCMethralfor,ManlneAminottmisferase[J]Clin ChemClinBiochem，1986，24(2)：481487 [3j日本临床化学会匕h血清中酵素活性测定。劝告法[J]略床 化学(日)，1989，18(2)：211-215 [4]山馆蒯恒ALP，1一GT∞常用基准法[J]临床检查(日)，1993，37 (3)：519-526． 5j11I应妩，二F毓二全围l临床检验[MJ，南京，东南大学出 版{上，1991192—194 ‘6]金有余，郁铁生临床生化检验学[M]，北京，海洋出版社，1993 】76—177 Effectofdiffererlactivatingh坩打syste雌Oildeterminationof址妇曲舱pIlmClttaseactivity ZHENGTieshen98，YELixin“，XUEJin8，WUZhiyong“，ZHANGXu8，StIENGWeixian98(aSchoolofMedical Technology，JiangsuUniversity．bClinicalLaboratoryofM'filiatedHospital，JiangsuUniversity．Zhenjimi9212001，Chiita) Abstract：objectiveToimestigntetheeffectofdifferentactivatingbuffersystemsoiltheactivityofalkalinephospliatase，andtoprovide mfereneeforclinicaldiagnosis．MethodWedeterminedalkalinepbosphataseactivityinsell．irasamplescollectedfromclinicalpatients andnormaldollorsusingthreemethodsbasedondifferentactivatingbuffersystems．ResultsThethreemethodsinwhichDAE，EAEor AMPWaSusedasactivatingbuffersysemsappearedtohavenormalrethrencerangeof98±57．86±44and75±42U／Lrespectively． Thecomparisonamongtheresaltsofthreemethodsshowedsignificantdifference(P(005)Thedeterminedvaluesofalkalinephos、 phataseactivityofsevenf；xoupswithliverdiseaseincluding221patientsusingthethreeactivatingbuffersysteumweresimficantly higherthanthoseofnormalperson8(P<0001)Thevaluesofalkalinephosphataseactivitybetweenthepatientsandnormalpersons determinedbythethreemethodsweresignlllcantlydifferentfP<0051ConclusionDifferentactivatingbuO；rsystemsinthedetermi— nationobviouslyinfluencetherestlltsofsenimalkalinephosphataseactivity。11|herefore，selectionofoptimalactivatingbuffersystemis veryimportantformeasuringalkalinephosphataseactivityalthoughthesubstrateissameItisworthyIonoticethatthemethodsusing differentactivatingbuffersystemsmayhavedifferentnormalreferencerange Keywords：alkalinephosphatase；burrsystem；normalrefetefree (收稿日期：20054)7-26．)(本文编辑：陈维忠) 万方数据 不同激活型缓冲体系对碱性磷酸酶活性测定的影响 作者： 郑铁生， 叶立新， 薛锦， 吴志勇， 张徐， 盛微翔， ZHENG Tiesheng， YE Lixin， XUEJin， WU Zhiyong， ZHANG Xua， SHENG Weixiang 作者单位： 郑铁生,薛锦,张徐,盛微翔,ZHENG Tiesheng,XUEJin,ZHANG Xua,SHENG Weixiang(江苏大学 ,医学技术学院,江苏,镇江,212001)， 叶立新,吴志勇,YE Lixin,WU Zhiyong(江苏大学,附 属医院检验科,江苏,镇江,212001) 刊名： 临床检验杂志 英文刊名： CHINESE JOURNAL OF CLINICAL LABORATORY SCIENCE 年，卷(期)： 2005,23(6) 被引用次数： 2次 参考文献(6条) 1.郑铁生 临床生物化学检验 2004 2.Expert panel on Enzymes:Approved Recommendation(1985)on IFCC Methods for the Measurement of Catalytic Concentration of Enzymes Part 3 IFCC Method for Alanine Aminotransferase 1986(02) 3.日本臨床化学会 ヒト血清中酵素活性测定の劝告法 1989(02) 4.山馆周恒 ALP,γ-GTの常用基准法 1993(03) 5.叶应妩;王毓三 全国临床检验操作规程 1991 6.金有余;郑铁生 临床生化检验学 1993 本文读者也读过(10条) 1. 梁建嫦 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