枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究（可编辑）

枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究（可编辑） 湖北中医药大学学报 2011年6月第13卷第3期 ??18?? ofHubei ofChineseMedicine Journal Univensity June，2011，VoL13，No(3 【药学研究】 枸杞子总黄酮和枸杞多糖的提取工艺研究 李元元1，定天明2，刘艺婷1，但汉雄3 1(湖北中医药大学药学院2008级硕士研究生，湖北武 汉430065; 2(湖北省食品药品监督检验研究院，湖北武汉430064;3(湖北中医 药大学药学院，湖北武汉430065 摘要:目的研究了枸杞子最佳提取工艺。采用正交法进行了提取工艺的研究，并采用紫外一可见分 先光度法分别测定其中总黄酮和枸杞多糖的含量。结果正交试验表明较优的总黄酮提取条件为8倍量80,乙醇提 取2次，每次1h，合并水提物得到的枸杞子提取物总黄酮含量高达5,。枸杞多糖含量高达3,。结论本实验研究的 枸杞子提取物制备工艺简便、环保经济。 关键词:枸杞多糖;总黄酮;(if-交试验;含量测量 中图分类号:B284(2 文献标识码:A 文章编号:1008-987X 2011 03-0018-03 StudiesontheExtraction ofTotalFlavonoidsand Technology from L Barbarum barbarum Lycium PolysaccharideLycium 基金项目:国家保健食品原料药枸杞子提取物研究专项工作项目 食 药监许函[20091276号 。 作者简介:李元元 1985一 。女，湖北中医药大学2008缀硕士研究生。 通讯作者:但汉雄 1963一 ，男，湖北中医药大学药理学研究生导师， 电子信箱:DHX200709@126(com。 松生拟层孔菌属多孔菌目中的一种，别名红缘层孔菌。子实体 细胞株NCI―H460表现出较高的抑制活性，抑制率高达98( 无柄。菌盖扁平，半球形或马蹄形，长径7―35cm，短径5―73,，表明松 生拟层孔菌子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外具 24cm，厚3―8cm。表面灰色或黑色，有的具红色胶质皮壳，有较有稳定的 抗肿瘤活性，可能与其在体外直接诱导肿瘤细胞凋亡 宽的同心环棱，边缘赤栗色、黄色或类白色。管口面浅黄色或锈 有关。本实验研究为下一步深入研究其体内外抗肿瘤的作用及 褐色，管口圆形，每lmm问3―5个。纵剖面可见菌管多层，每机制奠定了 一定的实验基础。 参考文献: 层厚3-7mm。木质或木栓质。气微，味淡，具有祛风除湿之功 Ben 0f aetivltlee《 效，我国大部分省区有分布pJ。据报道松针层孔菌主要用于改 [1】 G，LiuXY，刁mHK，et毫1(Eveluafioncyto嫡c 9咄medicinal from 善肿瘤放化疗患者的症状，如增加食欲和体重、减轻疼痛，有时 polypeze“|gi 可见肿瘤缩小、胸腹水减少。提高患者的细胞免疫功能延长肿 5 :408-410( off(theanti―tumoreffect [2】HuangXT。HuangGY，XueCK，eta1(Study 瘤患者的生存期，明显改善生存质量，辅助放化疗使用，可有效 in ofnumber1缸n Linviueand euphorbiatmhyrisvivo【J】(Chi- 抑制各种癌症。其子实体热水提取物对小自鼠内瘤细胞S180 n嘲ph舳n蚴IogicalBulletin，2004，20 1 :79一配( 的抑制率为51(2,It]。本研究通过结合细胞形态学显微镜观 olltheanti GY。Xue a1(Experimental [3】HmmgXT，Huang CK，et study 察、AhmarBlue法及MTT法对松生拟层孔菌子实体乙醇提取物 ―tunmreffectofmethanolieextractfrom invitm b岫L euphorbia 进行体外抗肿瘤的研究。可以直接确定待检样品是否具有对肿 andin oll and research treatment，2004，31 vivo[J】(Cancerprevention 瘤细胞直接杀伤的抗肿瘤活性pJ，另外采用多种不同的检测方 9 :556-558( ofTum?eelhextract 法可以获得其体外抗肿瘤作用较为客观全面的信息。本实验 WF(Inhibition ethand [4】LiuL，Zho(SB，Zheug by offomea and 研究表明，松生拟层孔菌子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外对 fomeutm'ius[J】(Journalel"eareino萨nesis，Tenaogenesis muta genesis(2004，17 2 : 104―106( S180、H22、NCI―H460细胞株均有明显的增殖抑制作用，并且 呈现出现初步的量效关系，随剂量增大。抑制作用增强，其中在 [5】 孙勇，蒋继宏，陈玉芹，等(十种多孔类真菌体外抗肿瘤活性的筛 10,Ljg,mL时，其子实体乙醇提取物乙酸乙酯相体外对人肺癌 选[J】(微 生物学通报，2007，4 1 :112―115( I收稿 日期:7(01142-23编辑:林飞 万方数据 2011年6月第13卷第3期 湖北中医药大学学报 June ofHubei ‘19?? 2011，V01(13，No(3 Joumal Ullive瑁蛔ofChjne靶Medicine LI ( Yuanyuan‘，DINGTianmi砰，LIUYitin91， DANHanxionga of of 2008 student of Chinese 1(GradepostgraduateCoUegePharmacy，HubeiUniversity Medicine， Wuhan forFood of 2(Institute and ControlHubei Drug Province，Wuhan430064， Hubei，Chin To the of of The Establish extract barbarumL(Methods WSJ5selected Abstracts:Objectiveoptimumtechnology Lycium technique the in offla- withthe establishmentofultraviolet―visible WaSdeterminedwhichthetotalcontent orthogonald?i俨(And spectrophotometry total vc咀oidsand Barbarum The of flavonoids were Lycium Polysaccharide LBP (Resultoptimumtechnique parameters to extract baxbammeX- solution time extractionfor2times(Combined L and髓solution，material1:8，extractinglh，and aqueousofLycim tractobtainedthetotaltlavonoidcontentof to to3,ofLBP(CondusionThe methodstudiedinthis by up 5,，containsup extracting pa- is per environmentallyfriendly( simple，and Barbanun Keywords:LyciumPolysaccharide LSP ;Totaltlavonoids;Orthogonaldesign l坷Lba,,uln 裹2正交试验与分析表 枸杞子是茄科植物宁夏枸杞Lrcium L的干燥成 熟果实，2002年枸杞子被列为国家保健食品名单，营养学家用 枸杞子为主料配制生产的营养保健品能提高免疫功能、抗衰 老，被视为保健佳品。近年来，枸杞子提取物远销欧美市场成为 医药、保健产业的“红宝州1-3]，然而通过对市场上现有枸杞子 提取物调查表明，其工艺仅采用水提法制备的提取物只保证了 枸杞多糖【(】，轻视了总黄酮这个标志性功效成分”】。本实验以 宁夏中宁县枸杞子为样品，研究枸杞子提取物的制备工艺及其功 效成分总黄酮含量测定，为枸杞子功能食品的研制奠定基础。 l材料 1(1仪器 通用TU一1901型紫外可见分光光度计 北京普析通用仪 器有限责任公司 ;Lc一250超声清洗机 济宁市中区鲁超仪器 厂 ;RE一2000旋转蒸发仪 上海亚荣生化仪器厂 ;DZF一6020 型减压真空干燥器 上海精宏实验设备有限公司 。 1(2药材及试剂 枸杞子药材 经湖北省食品药品监督检查研究院中药室冯 老师鉴定，产地为宁夏中宁县 ，芦丁对照品 纯度90(5,，批 号:100080―200707，购于中国药品生物制品检定所 ;葡萄糖对 照品 中国药品生物制品检定所，批号:110833―200503 ;无水 2(2枸杞子提取物的制备 乙醇、苯酚、硫酸、亚硝酸钠、硝酸铝为分析纯，纯化水;枸杞子提 根据相关文献及正交试验结果确定最佳工艺为 取物 自制，批号:20100901―20100903 。 2方法与结果 浓缩稠膏? 含枸杞多糖 ;合并I和?，40?减压真空干燥24h 2(1正交试验 后研细，成粉，即得枸杞子提取物?。 制备稠膏I时按表1的因素水平设计正交试验，以枸杞子 2(2(1稠膏I的制备:枸杞子适量，加入少量水匀浆，以固液比 提取物的提取率及稠膏I中总黄酮含量为主要指标，考察乙醇 为89,mL、含醇量达80,溶剂回流提取2次，每次lh，纱布过 浓度、提取时间、溶剂用量、提取次数对回流提取效果的影响。测 滤，合并2次滤液，舳?水浴浓缩成相对密度为1(10―1(20 室 定结果见表2。 温 稠膏I。 襄1因素水平表 2(2(2稠膏?的制备:取枸杞子醇提后的残渣，加入10倍量蒸 馏水，回流提取2次，每次lh，过滤，合并2次滤液。在40?水浴 减压浓缩成相对密度为1(10,1(20 室温 稠膏?。 2(3优化提取工艺后的枸杞子提取物?的含量验证 2(3(1总黄酮的测定方法:参考相关文献[7-10】。精密称取枸杞 子提取物各0(29，置25mL量瓶中，加水5mL溶解，然后加贷, 万方数据 ??20?? 湖北中医药大学学报 2011年第13卷第3期 3讨论 乙醇定容，超声30min，滤过，精密量取2mL至25mL量瓶中，以 芦丁的30,乙醇溶液 0(2mg,mt, 为对照溶液，精密量取1、2、本实验通过对枸杞子总黄酮提取方法及正交试验验证。表 3、4、5mL置25mL量瓶中配制标准曲线，在样品溶液和对照溶明采用乙醇回流提取最好，且乙醇浓度最为关键，优选工艺为 80,的乙醇8倍量为溶剂、提取2次，每次lh，将总黄酮提取的 液的25mL量瓶中依次加2mL水、6mL30,乙醇、lmL5,亚硝酸 残渣再以水为溶剂提取枸杞多糖，可保证两种功效成分的有效 钠溶液，静置6min后，再加lmLlO,硝酸铝溶液，再静置6min。 提出，且总黄酮的平均含量高达5,，是市场上调研的枸杞子提 加10raL氢氧化钠试液，30,乙醇定容，静置15rain。以相应的 取物中总黄酮平均含量的5倍。 试剂为空白。在500hm波长下测定其吸光度值”J，测定结果见 表3。 本实验在测定枸杞多糖时先用80,乙醇沉淀多糖‘?。121。 衰3枸杞子提取物?总黄酮的含量测定结果 避免受单糖影响而致结果偏高，为进一步有效控制枸杞子提取 物的质量，并在此基础上研发枸杞子保健食品，为实现枸杞子种 植的产业多元化发展奠定基础。 参考文献: [1】周晶。李光华(枸杞的化学成份与药理作用研究综述[J](辽宁中 医药大学学报，2009，11 6 :93―94( [2】张云霞，刘敦华(枸杞功能性成分研究进展及深加工发展趋势 【J](食品与药品，2009，ll 5 :67-69( 5l一54( 2(3(2枸杞多糖的测定方法:精密称取本品80mg。加80,乙醇 [4]邹耀洪(枸杞叶的黄酮类化学物质[J](分析测试学报，2002。21 50raL置锥形瓶中，超声处理30min，过滤，滤渣踟,乙醇洗涤3 1 :76―18( 次，后将滤渣连同滤纸放入原锥形瓶中加水60mL，超声30min。 [5】刁兴彬，蒋海强(野菊花黄酮类抗氧化成分的提取工艺研究【J】( 过滤，滤液移置100mL量瓶中，水洗涤锥形瓶2―3次转移置量 湖北中医学院学报，2010，12 6 :31―34( 瓶中定容，取2mL置25mL比色管中为样品溶液。以减压干燥 [6】陈贵生(正交设计优选调脂胶囊中山楂的醇提工艺[J](湖北中医 至恒重的无水葡萄糖的水溶液 1mg,mL 为对照溶液，精密量 杂志，2009，31 1 :54-55( 取0(2、0(4、o(6、0(8、1(OmL置25mL比色管中为对照溶液配制 [7】叶卉，冉晓辉，俞凯(厚朴提取物工艺研究[J](医药导报，2008，27 标准曲线。在25mL比色管中加入5,苯酚溶液lmL，摇匀，迅 B :974―975( 速加入硫酸5mL，摇匀，放置lOmin，置40?水浴中保温15min，[8】何翔，黄荣增(苦丁茶总黄酮不同提取方法的比较[J】(湖北中医 取出后冷却至室温，以相应的试剂为空白。在490hm的波长处 杂志，2010。32 4 :74―75( 测定吸光度，测定结果见表4。 [9】 张义秀，佟丽华，张义英(枸杞子不同提取物中黄酮含量的比较 囊4枸杞子提取物枸杞多糖的含量 [J】(黑龙江医药科学，2007，30 6 :53―54( 【tO]金虹，李凤(天麻提取物工艺及其功效成分含量的分析[J](中药 材，2009，32 5 :799―802( [1l】中国药典一部[s】(2010:172( [12]张立，马琼。何永利(灵芝、香菇、黄芪、枸杞子提取物中多糖的含 量测定[J】(中草药，2004，35 2 :167―168( 【收稿日期:2010-11-10编辑:郑晓屏 万方数据