血清胸腺因子(fts)对荷瘤小鼠干扰素、白介素2分泌的影响
血清胸腺因子(FTS)对荷瘤小鼠干扰素、
白介素2分泌的影响
【摘要】 目的 观察 FTS对提高荷瘤动物干扰素
,IFN-ν,、白介素-2,IL-2,分泌的影响。
对荷瘤动
物皮下注射不同剂量的FTS后,取其血清~测定血清中IFN-
ν的含量~并测定其脾细胞在ConA刺激下分泌IL-2的含量。
结果 与对照组比~ FTS 2.5mg/kg、1.25mg/kg能够使荷瘤
小鼠血清中的干扰素含量显著提高,P<0.01,~同时也使
脾细胞分泌IL-2的能力提高。结论 FTS能够刺激机体提高
分泌细胞因子的能力~对抗肿瘤有着积极的作用。
【关键词】 血清胸腺因子 干扰素 白介素-2 抗肿
瘤
【Abstract】 Objective
Observation the FTS to enhance the Dutch lump animal IFN-ν~IL-2 secretion influence.Methods After Dutch lump animal hypodermic injection different dosage of FTS, takes its blood serum, in the determination blood serum IFN-ν the content, and
determines its spleen cell to secrete IL-2 under the ConA stimulation the content. Results With
the control group compared to, FTS 2.5 mg/kg, 1.25 mg/kg can cause in the Dutch lump mouse in blood serum of the interferon content remarkable enhancement ,P< 0.01,, simultaneously also causes the spleen cell to secrete IL-2 ability enhancement. Conclusion FTS can stimulate organism enhancement secretory cell factor ability, the resistance tumor has the positive function.
【Key words】 FTS;
IFN; IL - 2; anti-tumor
据报道~血清胸腺因子
,Thymulin,FTS,来源于胸腺组织~其氨基酸序列为
NH2/Glu-Ala-Lys-Ser-Gln-Gly-Ser-Asn~是一类小分子肽
,1,~对参与获得性和先天免疫的细胞FTS都能产生作用
,2,~在鸡模型中~FTS能参加IL-2R的
达~特别对CD4+
细胞~它也影响人IFN-ν受体的表达~使细胞更易被细胞因
子刺激,3,~本文通过研究FTS对荷瘤动物分泌IFN及IL-2
的影响~了解FTS对免疫低下机体的细胞因子的作用~从而
为国内进一步研究FTS在抗肿瘤方面的应用打下良好的基
础。
1 材料与方法
1.1 药物与试剂
血清胸腺因子,FTS, ~批号060821~由深圳市翰宇生物工程有限公司提供,其纯度为>96%,冻干粉末,冷冻保存~临用前取FTS 1mg~加1ml消毒生理盐水稀释为1mg/ml的原液~供皮下注射用。阳性对照药为胸腺肽~冻干粉末~200mg/支,黑龙江迪龙药业有限公司提供,批号20061001,小鼠干扰素-γELISA试剂盒~晶美生物工程有限公司提供,批号20060529,刀豆蛋白A,ConA,~SIGMA公司提供~浓度为10μg/ml和30μg/ml,MTT~SIGMA公司提供~使用浓度为5mg/ml~20μl/孔。
1.2 瘤株 小鼠H22~取接种于小鼠的腹腔第7天的瘤株,配成106/ml瘤细胞悬液~接种于小鼠前肢腋窝皮下0.2ml/鼠。
1.3 动物 实验用体重18,20g的SPF级雄性昆明小鼠,C57 BL/6小鼠~6,8W 雄性~动物合格证号:SCXK京,2005-2006,~均由中国药品生物制品检定所实验动物中心提供。饲养观察2天后使用。实
验动物室为无菌空气二级过滤~人工日光灯12h自动照明~恒温、恒湿送风~温度22,24?~相对湿度40%,45,。鼠笼具为塑料盒,不锈钢丝盖。
1.4 荷瘤动物模型 用18,20g的昆明小鼠皮下注射H22瘤株~24h后小鼠随机分组用于实验。
1.5 给药方法 分别取荷瘤小鼠~健康动物及免疫缺陷型动物各50只~均分为5组~分别按高、中、低3个剂量注射FTS~对照组注射NS~用胸腺肽做阳性对照~均皮下注射给药~每日给药1次~共给药14天。
1.6 小鼠IL-2的产生 将给药后的小鼠断颈放血~取脾置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质~研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤~将滤液1000rpm,5min离心~取上清~除红细胞后~用无血清RPMI-1640培养液洗1次~最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成0.5〓107/ml~加入24孔细胞培养板中500μl/孔~同时加入等体积的ConA,10μg/ml,~37?~5%CO2~培养24h~取出2500rpm,20min离心~收取上清~除
菌后~-20?保存备用。
1.7 小鼠胸腺细胞的制备 将C57 BL/6小鼠断颈放血~取胸腺置于无血清RPMI-1640培养液中去杂质~研磨成单个细胞后用100目筛及200目筛过滤~将滤液1000rpm,5min离心~去上清~除红细胞后~用含5% 小牛血清的RPMI-1640培养液洗二次~最终用含10%小牛血清的RPMI-1640培养液配成1.0〓107/ml。
1.8 小鼠血清的制备 将给药后的小鼠从眼静脉丛取血~待凝固
1后分离血清~-20?保存备用。
1.9 检测指标 用酶标仪测定各组的OD值~IFN-ν测定用490nm~MTT测定用550nm。实验数据用x〒s表示~组间比较用t检验。
2 结果
2.1 FTS对荷瘤小鼠IFN-ν分泌的影响 将给药后的小鼠血清稀释5倍和10倍~
按IFN-νELISA测定试剂盒的要求~测定每个小鼠血清IFN-ν的含量~10倍稀释后的血清比5倍稀释后的血清测定结果要高~结果见表1。表1 荷瘤小鼠血清,10〓,IFN-ν的含量注:与对照组比较~*P<0.05~ **P<0.01,与胸腺肽比~??P<0.01
由表1可见~与NS组比较~FTS 2.5mg/ml、1.25mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IFN-ν的分泌,P<0.01,~比胸腺肽的刺激作用强,P<0.01,。
2.2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 将含IL-2的样品倍比稀释后加入96孔细胞板~100μl/孔~每稀释度3个复孔~再加入ConA, 30μg/ml,,20μl/孔~同时设ConA对照和培养液对照~培养72h~培养结束前4h加入MTT~按MTT测定法在550nm测OD值~结果见表2。 表2 FTS对荷瘤小鼠IL-2分泌的影响 由表2可见~与NS组比较~FTS 2.5,0.63mg/ml可以极显著地增强荷瘤小鼠IL-2的分泌活性~而胸腺肽与对照组比差异有显著性~但是比FTS要弱。
3 结论
生物反应调节剂是继三大常规手段
,手术、放疗、化疗,治疗恶性肿瘤后的又一新的手段,4,~细胞因子是生物反应调节剂中最活跃的一群~大量资料表
明~干扰素和白介素-2能够促进NK细胞的杀伤活性~抑制
肿瘤细胞生长~是重要的抗肿瘤细胞因子,5,。从本文实验结果中看出~通过给荷瘤小鼠注射血清胸腺因子,FTS,~可以提高机体分泌干扰素、白介素-2的能力,P<0.01,~从而加强了机体的抗肿瘤能力。胸腺肽是目前常用的免疫增强
剂~大量用于肿瘤病人术后的治疗中,6,~从本文的实验中可以看出~FTS对细胞因子的激活能力比胸腺肽要强得多
,P<0.01,~但有效剂量要小52倍~所以将FTS开发成抗肿瘤新药是很有发展前景的~生物治疗已成为21世纪肿瘤治疗的主要方向和潮流~无疑可以在肿瘤综合治疗中发挥
更重要的作用。
【参考文献】
1 Kohda Y, Kawai Y, Iwamoto N,et al. Serum
thymic factor, FTS, attenuates cisplatin
nephrotoxicity by suppressing cisplatin-induced ERK
activation. Biochem Pharmacol~ 2005,70,9,:1408-1416.
2 D Chandratilleke, GA Marsh.The effect of thymulin on avian IL-2 receptor expression. Int J
Immunopharacol,2000, 22:887-896.
3 PG Merlino,JA Marsh. The enhancement of avian NK cell cytotoxicity by thymulin is not mediated by the regulation of IFN-γ production. Dev Com Immunol,
2002,26,1,:103-110.
4 左增艳~柳钟勋~李健蕊~等.新型生物反应调节剂、
当归多糖,ASDP,抗肿瘤作用及对荷瘤小鼠免疫功能的影响.
中国免疫学杂志~2000~16,10,:545-546.
5 徐叔云,卞如濂,陈修. 药理学实验方法学.北京:人民
卫生出版社~2002,1762-1763.
6 陈奇.中药药理研究方法学.北京:人民卫生出版社~
2006,1006-1012.