牛黄消炎片、妇乐颗粒中非法添加土大黄检查方法的建立

牛黄消炎片、妇乐颗粒中非法添加土大黄检查方法的建立 牛黄消炎片、妇乐颗粒中非法添加土大黄检 查方法的建立 中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 制病原体.另外,两者的不良反应发生率比较差异有统计学意 义(P<0.05),但患者耐受良好,停药即可恢复. 本课题比较了阿奇霉素的两种治疗,甲组痊愈率为39. 58%,与乙组的23.00%比较,差异有统计学意义(P<0.05).甲 组显效者占41.67%,乙组显效者占31.25%,两者也有较大差别 (P<0.05).本实验显示:静滴阿奇霉素3d+口服阿奇霉素4d 比口服阿奇霉素7d治疗女性生殖道支原体感染效果好. 参考文献 1.周红霞.204对不孕夫妇支原体感染临床[J].中国妇幼保健, 59 2OO6;21:2110—2111 2.顾美皎,泌尿生殖道衣原体和支原体感染的规范治疗[J].中国实用妇 科与产科杂志,2005;21:645,646 3.应王华,席亚娟.氧化氢溶液联合阿奇霉素治疗宫颈支原体感染的近 期疗效研究[J].实用妇科杂志,2006;22(8):484—486 4.张东红.女性生殖道支原体,衣原体感染及治疗[J].临床皮肤科杂志, 2008;38(8):512 5.石晶,李珍.阿奇霉素的人体药物动力及相对生物利用度[J].中国医 药工业杂志,2007;32(5):215—217 牛黄消炎片,妇乐颗粒中非法添加土大黄检查方法的建立 江苏省淮安市涟水药品检验所(223400)罗一 江苏涟水制药有限公司(223400)李林松 摘要目的:建立牛黄消炎片,妇乐颗粒中非法添加土大黄的检测方法;方法:采用薄层色谱法(TLC),硅胶G板,乙酸乙酯一丁酮一甲酸一水(1O:7:1: 1)为展开剂,在365nm下检视;采用LiehrospherC18(4.6mmx250mm,51a.m),乙腈一甲醇一水(7:3O:63)为流动相,检测波长为320nm.结果:牛黄消炎 片,妇乐颗粒中非法掺入的土大黄的指标性成分土大黄苷在365nm下显持久的蓝紫色荧光斑点,通过高效液相色谱法得到进一步验证.结论:TIc结 合HPLC法简便,快速,专属性强,能有效的检查牛黄消炎片,妇乐颗粒是否掺入土大黄. 关键词牛黄消炎片妇乐颗粒土大黄薄层色谱法高效液相色谱法r] 中图分类号:R927.1文献标识码:A 在日常检验中发现含大黄的中成药存在掺伪现象.土大黄 与正品大黄在化学成分和功能主治上有所差异,在价格上也相 差较大,大黄的价格约是土大黄的3倍,不法药商将土大黄替代 正品大黄使用,药品的药效必然不一样,会贻误病人的病情,造 成不良反应,危害较大.【2牛黄消炎片与妇乐颗粒中均含有大黄 成分,按照厂方提供国家局试行标准检验,结果符合规定,但在 检验过程中,发现薄层斑点异常,在研究其处方成分并调用其余 厂家的药品进行阴性对照,怀疑该品种掺入了土大黄.土大黄 苷为二苯乙烯的衍生物,存在于劣质大黄中,常以土大黄苷的存 在与否作为大黄质量的定性鉴别手段.-3本课题可为该类药物 的质量控制提供参考. 1仪器与试药 1.1仪器和设备Waters2690色谱仪;Waters996PDA检测 器;Empower2色谱数据处理软件;AE一240电子天平(梅特勒公 司);ZF一1三用三用紫外分析仪(上海顾村电光仪器厂);10 20em硅胶G薄层层析板(青岛海洋化工厂分厂). 1.2试剂HPLC甲醇(PromptarcompanyLtd);AR甲醇(国药 集团化学试剂有限公司);HPLC乙腈(CALENONLABORATO. RIESLTD);AR醋酸乙酯(国药集团化学试剂有限公司);AR丁 酮(国药集团化学试剂有限公司);AR甲酸(国药集团化学试剂 有限公司);纯化水(涟水药检所). 1.3试药 牛黄消炎片1(抚顺澎健药业有限公司,批号20071102) 牛黄消炎片2(哈尔滨华雨制药集团有限公司,批号 2o0810o1) 牛黄消炎片3(哈尔滨华雨制药集团有限公司,批号 文章编号:1773-5611(2010)04一(0059)一(03) 20080602) 牛黄消炎片4(黑龙江葵花药业股份有限公司,批号 20080502) 牛黄消炎片5(哈药集团世一堂制药厂,批号0805302) 妇乐颗粒1(江苏康缘药业股份有限公司,批号081004) 妇乐颗粒2(杭州天目山制药有限公司,批号20080607) 土大黄苷对照品(中国药品生物制品检定所,批号794— 200103) 2方法与结果 2.1TLC法 2.1.1溶液的配制牛黄消炎片供试品溶液的制备:取本品同 一 批号5片,除去包衣,研细,加甲醇20ral,超声15rain,过滤,滤 液浓缩至2ml,作为供试品溶液. 妇乐颗粒供试品溶液的制备:取本品4袋,研细,加甲醇 2oIIll,超声15rain,过滤,滤液浓缩至2ml,作为供试品溶液. 对照品溶液制备:取土大黄苷对照品加甲醇溶解,制成浓度 为lmg/ml的溶液. 2.1.2薄层色谱条件 硅胶G薄层层析板(1020em); 展开剂:醋酸乙酯一丁酮一甲酸一水(1O:7:1:1); 点样量:2l; 温度:25?; 相对湿度:56%. 2.1.3方法分别精密吸取供试品溶液和对照品溶液各2, 分别点于同一硅胶G薄层板上,以醋酸乙酯一丁酮一甲酸一水 (10:7:1:1)为展开剂,展开后,取出,晾干,置紫外灯(365nm)下 观察. 2.1.4试验结果牛黄消炎片1,2供试品溶液所显主斑点的 颜色呈亮蓝色,与土大黄对照品溶液的一致;测定斑点位置时, RF为0.65,与土大黄对照品一致.而牛黄消炎片3,4,5供试品 溶液所显主斑点的颜色和位置与土大黄苷对照品溶液的不一致 (见图1—1),提示牛黄消炎片1,2可能均掺入土大黄.妇乐颗 粒2供试品溶液所显主斑点的颜色呈亮蓝色,与土大黄对照品 溶液的一致;测定斑点位置时,RF为0.65,与土大黄对照品一 致.而妇乐颗粒1供试品溶液所显主斑点的颜色和位置与土大 黄苷对照品溶液的不一致(见图1—2),提示妇乐颗粒2可能掺 入土大黄. (1)(2)(3)(4)(5)(6) 图1—1 土大黄对照品和牛黄消炎片的TLC图 (1)牛黄消炎片1 (2)牛黄消炎片2 (3)土大黄苷对照品 (4】牛黄消炎片3 (5)牛黄消炎片4 (6)牛黄消炎片5 (1)(2)(3) 图1-2 土大黄对照品和妇乐颗粒的TLC图 (1)妇乐颗粒l 【2】土大黄苷对照品 (3)妇乐颗粒2 2.1.5最低检出限的测定取土大黄苷对照品配制成不同的 浓度:O.6mg/ml,0.3mg/na,0.15mg/ml,0.1mrrII,0.05mg/ ml,0.025mg/rnl,按2.1.3项检测,结果仅显5个斑点,最低检出 限为0.05mg/ml. 2.1.6样品中添加对照品测定分别精密吸取供试品溶液,土 大黄苷对照品溶液和供试品加土大黄苷溶液各21a,1,按2.1.3项 检测,结果明供试品加土大黄苷对照品后所显斑点位置一致, 且斑点明显增大. 2.2HPLC法 2.2.1溶液的制备牛黄消炎片供试品溶液的制备:取本品同 一 批号l0片,除去包衣,称定重量,研细,混匀,精密称取0.25g 置锥形瓶中.加入甲醇25ml,称定重量,加热回流1h,放冷,用 甲醇补充减失重量,混匀,滤过,取续滤液10ml置25ml容量瓶 中,用水定容至刻度,摇匀,滤过,取续滤液待测. 妇乐颗粒供试品溶液的制备:取本品同一批号l0包,称定 重量,研细,f昆匀,精密称取3g置锥形瓶中.加入甲醇25ml,称 定重量,加热回流1h,放冷,用甲醇补充减失重量,混匀,滤过,取 续滤液10ml置20ml容量瓶中,用水定容至刻度,摇匀,滤过,取 续滤液待测. 对照品溶液制备:精密称取对照品8mg于lOOml容量瓶中, 加50%甲醇溶解并稀释至刻度,摇匀,作为对照品溶液.. 2.2.2样品添加对照品溶液的制备分别精密量取供试品溶 液及土大黄苷对照品溶液各lml,混匀,即得. 中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 2.2.3色谱条件色谱柱:LiehrospherC18(4.6$250mm, 5ta,m),以乙腈一甲醇一水(7:3O:63)为流动相,检测波长: 320nm,进样量:1O1,柱温:35oC,自动进样. 2.2.4结果分别取对照品溶液,牛黄消炎片1,牛黄消炎片 4,妇乐颗粒1和妇乐颗粒2各10进样测定.结果表明:牛黄 消炎片1,妇乐颗粒2中主峰保留时间与土大黄苷对照品溶液的 色谱峰保留时间一致,通过DAD检测进一步检测,主峰与土大 黄苷峰的DAD(紫外光谱图)一致且杂质不干扰样品测定,而牛 黄消炎片4,妇乐颗粒1在土大黄苷对照品主峰相应保留时间未 出现色谱峰.对照品溶液,供试品溶液色谱图见图2,DAD光谱 图见图3. A,土大黄苷对照品 B,牛黄消炎片1 c,牛黄消炎片4 图A,B,C中1号峰为土大黄苷 图2—1牛黄消炎片中土大黄苷的HPLC色谱图 A,土大黄苷对照品 中国实用医学杂志2010年第20卷第4期(总第144期 B,妇乐颗粒2 C,妇乐颗粒1 图A,B中1号峰为土大黄苷 图2—2妇乐颗粒中土大黄苷的HPLC色谱图 2?加2'o?260加290.?300舶?3.0?3日D.0038O舶 1.土大黄苷对照品 复O.0o肿枷.?瑚舶3oo?蜘舯3.n??哪铷? 2.牛黄消炎片1 图3—1牛黄消炎片中土大黄苷的DAD光谱图 I.土大黄苷对照品 6l 2.妇乐颗粒2 图3—2妇乐颗粒中土大黄苷的DAD光谱图 经过峰纯度检测,土大黄苷峰的纯度分别为0.9985,0. 9989,说明该方法有很好的选择性. 2.2.5方法学 2.2.5.1精密度试验色谱条件:精密吸取土大黄苷对照品溶 液101~l,连续进样7次,对照品色谱峰保留时间,分别为8. 652,8.633,8.642,8.632,8.625,8.624,8.701min,RSD为0. 4%,结果表明,进样精密度良好. 2.2.5.2最低检出限的测定将土大黄苷对照品溶液进行多 次等倍稀释,信噪比为S/N为3时,最低检出限为0.5ng. 2.2.5.3样品中添加对照品测定精密吸取样品添加对照品 溶液20g,1,注入HPLC仪,记录色谱图,与供试品溶液色谱图进 行比较,结果表明峰面积明显增大,且保留时间变化在变异范 围内. 3讨论?牛黄消炎片处方中的大黄量较少(9.6g/片),在检 查土大黄苷薄层色谱中取样量为5片,斑点比较明显;在采用高 效液相色谱法进行验证时,可能掺入的量较少,色谱图中土大黄 苷的峰高较低,经DAD检测,证实为土大黄苷.?妇乐颗粒处 方中的大黄制法比较复杂,在检查土大黄苷薄层色谱中,取样量 为2包,亮蓝紫色斑点较浅;在取样量为4包时,亮蓝紫色斑点 比较清晰;再采用HPLC进行验证,可能非正品大黄掺入量较 少,色谱图中的土大黄苷的峰高较低,经DAD检测,证实为土大 黄苷. 4结论TLC结合HPLC法专属性强,能有效,简便,快速的检 查牛黄消炎片,妇乐颗粒是否掺人土大黄. 参考文献 1.中国药典2005年版第一部[M].北京:化学工业出版社,2005.384 2.卢兖伟.金钱草与土大黄有效成分研究与应用[C].北京:中国人民解 放军军事医学科学院.2003.46 3.马锦星.补充检验方法和项目是打击药品掺杂,掺假行为的有效手段 [J].中国药事,2004;18(3)