【doc】头针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠治疗时间窗研究

【doc】头针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠治疗时间窗研究 头针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠治疗 时间窗研究 - 66? 中医药信息 InformationonTraditionalChineseMedieine 2009年第26卷第2期 Vo1.26,No.2,2009 头针对局灶性脑缺血再灌注模型大鼠 治疗时间窗研究 孙晓伟,邹伟,于学平,吉训明,王冠,程化坤.,李丹 (1.黑龙江中医药大学附属第一医院,黑龙江哈尔滨150040; 2.首都医科大学脑血管病研究所,北京100053; 3.黑龙江省医院,黑龙江哈尔滨150036) 摘要:目的:探讨针刺百会透曲鬓对脑缺血再灌注模型(MCAO/R)大鼠脑保护作用的最佳治疗时机. 方法:采用线栓法复制MCAO/R模型,于再灌注后2h,6h,12h,24h,48h5个不同时间窗开始针刺,比较 术后7天MCAO/R模型大鼠的神经功能评分以及脑梗死体积的变化.结果:各针刺组的神经功能评 分,脑梗死体积与模型组比较均有显着差异(P<0.05).各针刺组间,神经功能缺损评分比较,48hR针 刺组与其余四组存在显着性差异(P<0.05),而该四组间无统计学差异(尸>0.05).脑梗死体积测定 明,2hR,6hR针刺组脑梗死体积最小,且两组无明显差异(P>0.05);12hR针刺组脑梗死体积比 2hR,6hR针刺组明显增大(P<0.05);而24hR,48hR针刺组脑梗死体积最大,与前 三组比较有统计学 差异(P<0.05).结论:针刺百会透曲鬓对MCAO/R模型大鼠具有脑保护作用,并且 超早期治疗更有 意义. 关键词:脑缺血;头针;治疗时间窗;脑保护 中图分类号:R245.321文献标识码:A文章编号:1002—2406(2009)01—0066—03 缺血性脑血管病是常见病,多发病.中医学的针 刺疗法对其治疗取得了比较满意的效果.在过去,针 刺疗法主要针对于缺血性脑血管病后遗症期的治疗, 而目前研究表明,早期或超早期应用针刺治疗急性缺 血性脑血管病对于提高治愈率,减少致残率具有重要 作用. 本实验通过复制大鼠大脑中动脉局灶性脑缺血再 灌注模型(MCAO/R),探讨不同时间窗针刺百会透曲 鬓对MCAO/R大鼠神经功能缺损及脑梗死体积的影 响,针刺百会透曲鬓对MCAO/R大鼠脑保护作用 的最佳治疗时机. 1实验材料与方法 1.1实验动物及分组 基金项目:黑龙江省科技攻关计划项目(GCD8C424);黑龙江省研究生 创新科研项目(YJSCX2008—136HLJ) 作者简介:孙晓伟(1979一),女,博士,主要从事脑血管病的中西医结合 治疗与基础研究. 收稿日期:2008—11—13 修回日期:2008—12—05 SPF级SD雄性大鼠48只,体重270,300g,由北 京维通利华实验动物技术有限公司提供,动物许可证: SCXK(京)2007—0001.术前禁食,但自由进水12h. 将48只大鼠随机分成模型组(A组)及针刺组(其中 又根据再灌注时间分为2hR,6hR,12hR,24hR,48hR 针刺组五个亚组,分别为B组,C组,D组,E组和F 组),每组8只大鼠.针刺组:制作MCAO模型,堵塞 2h后行再灌注,在再灌注术后1h进行神经功能缺损 评分,分别在2hR,6hR,12hR,24hR,48hR即开始给予 针刺处理,每12h针刺1次,术后第7d进行神经功能 缺损评分,处死动物.模型组:制作MCAO模型,堵塞 2h后行再灌注,在再灌注术后1h进行神经功能缺损 评分,并且每12h也抓取大鼠1次不给予任何处理,第 7d时进行神经功能缺损评分后处死动物. 1.2动物模型制作及判定标准 参照ZeaLonga法,建立大鼠MCAO/R模型. 在模型建立时,本研究不同于以往应用水合氯醛腹腔 注射麻醉,而是应用显微镜下直视气管插管全身麻醉, 同时全程监测各组大鼠的肛温,血气,血压等生理指 标,使之保持在正常范围内.在术后大鼠清醒后采用 ZeaLonga?评分法判定模型制作是否成功,以3,4 2009年第26卷第2期 Vo1.26,No.2,2009 中医药信息 InfnrmationonTraditionalChineseMedicine?67? 分为标准. 1.3针刺穴位选择及操作 针具:28号1寸毫针(华佗牌,苏州针灸器械厂). 选穴:取百会穴,曲鬓穴.大鼠取穴参照华兴邦《大 鼠穴位图谱》.操作:将大鼠同定于板上,在所选穴位 处常规剪毛消毒,在百会穴处快速刺人皮下并向右下 方达曲鬓穴,实施捻转手法200r?min,,持续5min, 每问隔5min重复捻转1次,共留针30rain. 1.4神经功能评分 分别在术后1h及7d,在大鼠饲养环境下,采用 LudmilaBelayerl312分评分法进行神经功能缺损评 定,功能损伤越重,其得分越高. 1.5脑梗死体积的测定 大鼠7d后处死,取脑,均匀切片,每片厚约2mm, 2%TTC染色数码相机拍摄,使用Image—ProPlusA— nalysisSoftware计算机图像分析系统计算脑梗死体积. 为避免因脑水肿产生数据误差,本研究使用梗死面积 = 对侧半球面积一患侧正常脑组织面积,并且计算相 对梗死体积,即[相对梗死体积:微梗死体积/总体积 = (S1+S2+s3+…SN)H/(S1总+S2总+…sN总) H,S表示每片的梗死面积,H表示每片厚度]. 1.6统计学处理 采用SPSS11.5对数据进行统计,各组大鼠血气, 平均动脉压,脑血流值,肛温,神经功能评分,脑梗死体 积均用均数?标准差(元?s)表示,各组数据组问比较 使用one—wayANOVA方法统计,多个均数之问的比 较应用S—N—K检验.P<0.05说明有统计学意义. 2结果 2.1生理指标监测结果 术前基础值,术中及术后各组大鼠生理指标均维持 正常.大鼠血气(见表1),肛温及平均动脉压(meanar— tefialbloodpressure,MABP)(见表2),组间及组内均无 统计学差异. 表l各组大鼠不同时间血气监测结果(莺?S,n=8) 注:组『司及组内各时间点比较肛温和MABP,尸>0.05. 2.2脑血流监测结果 本实验在手术过程中动态监测了脑血流的变化, 发现梗死即刻六组大鼠脑血流较缺血前基础值分别下 降了77%,74%,76%,74%,75%,75%,说明栓子成 功插入了大脑中动脉;拔栓即刻各组脑血流较基础值 分别增高22%,26%,19%,24%,17%,14%,实现了 缺血再灌注;统计分析显示,在各个时间点六组大鼠的 脑血流百分比无明显差异(P>0.05),保证了整个模 型制作的稳定性. 2.3大鼠神经功能缺损评分结果 各组大鼠于术后1h和7d测定神经功能缺损评分 (见表3).其结果显示,术后1h六组大鼠神经功能缺 损无明显差异(P>0.05).术后7d时,各组大鼠神经 功能缺损均较1h时明显减轻(P<0.05);各针刺组与 模型组比较均有统计学意义(P<0.05);各针刺组间 神经功能缺损评分比较显示,2hR,6hR,12hR,24hR针 刺组四组间神经功能缺损评分差异无显着性(P> 0.05),48hR针刺组与这四组神经功能缺损评分比较 ? 68? 中医药信息 InformationonTraditionalChineseMedicine 2009年第26卷第2戡 Vo1.26,No.2,2009 有显着性差异(P<0.05). 表3各组大鼠术后1h和7d神经功能缺损评分 (面-4-S,n:8) 注:与术后1h各组比较,'P<0.05;与术后7dA组(模型组)比较,P <0.05;与术后7dF组(48hR针刺组)比较,P<O.05. 2.4大鼠脑梗死体积测定结果 模型组大鼠脑组织出现较大面积梗死,梗死范围 涉及皮层,皮层下区,纹状体等部位.而各针刺组的脑 组织梗死体积均有所减小,与模型组比较差异显着(P <0.05).其中,2hR针刺组大鼠脑梗死体积与6hR 针刺组比较无显着性差异(P>0.05);12hR针刺组大 鼠脑梗死体积与其它四组比较差异均有显着性(P< 0.05);24hR针刺组大鼠脑梗死体积与48hR针刺组 比较无显着性差异(P>0.05);且这两组与2hR,6hR 针刺组比较差异有显着性(P<0.05)(详见表4). 表4各组大鼠术后7d脑梗死体积检测结果(?S,n=8) 注:与A组(模型组)比较,P<0.05;与B组(2hR针刺组),C组(6hR 针刺组)比较,P0.05;与D组(12hR针刺组)比较,P<0.05. 3讨论 缺血性脑血管病属于中医学"中风"范畴,亦称 "卒中".中医学的针刺疗法是目前治疗缺血性中风 行之有效的治疗方法之一,然而在临床治疗中发现影 响针刺疗效的因素较多,如针刺治疗的时机选择,留针 时间,治疗间隔时间及疗程等时间因素对疗效产生了 较大的影响.其中,中风病针刺时机的选择,是影响中 风病针刺疗效的一个非常重要的因素J,因而探讨中 风病针刺的治疗时机,准确把握最佳治疗时间窗,具有 重要的临床应用价值. "治疗时间窗"是指在脑缺血发作后一定时间内 可以通过治疗减轻脑损伤的程度,促进机能恢复,改善 长期的预后,这个允许的时间称为治疗时间窗].这 一 概念最早被应用于脑梗塞的溶栓治疗中,而目前治 疗时间窗的概念13益受到重视已不再局限于溶栓治 疗.最近有些学者提出针刺治疗脑缺血应"超早期" 介入,但对急性期的具体干预时间与疗效关系问还 缺乏量方面的深入系统研究.本实验基于课题组在长 期临床实践中运用头针透刺法结合快速提插捻转手法 治疗缺血性脑卒中的显着疗效,采用线栓法复制了大 鼠MCAO/R模型,以神经功能缺损评分及脑梗死体积 为观察指标,初步探讨了不同时间窗针刺对MCAO/R 模型大鼠的脑保护作用. 本实验在整个造模过程中,应用严格的监测系统 全程监测了各组大鼠的体温,平均动脉压,血气等生理 指标,维持大鼠的各项生理指标在正常范围内,排除了 一 些外界因素的干扰;同时在手术过程中动态监测脑 血流的变化,保证了整个模型制作的稳定性和各组模 型大鼠的可比性. 各组大鼠神经功能评分结果显示:术后7d,六组 大鼠的神经功能缺损均较术后1h有明显降低,其中针 刺干预的五组效果明显优于模型组,说明针刺百会透 曲鬓治疗可以有效改善MCAO/R大鼠的神经功能缺 损评分,促进其神经功能的恢复;由于48hR针刺组神 经功能缺损评分与2hR,6hR,12hR以及24hR针刺组 比较存在显着性差异,故认为及早进行针刺百会透曲 鬓治疗对促进MCAO/R大鼠神经功能的恢复是有意 义的. 再灌注7d后脑梗死体积测定结果显示:各针刺组 大鼠的脑梗死体积均较模型组减小(P<0.05).其 中,2hR,6hR针刺组脑梗死体积最小,分别为(16.48 - 4-1.63)%和(17.094-1.30)%,且两组比较无统计学 差异(尸>0.05);12hR针刺组脑梗塞死体积比2hR, 6hR针刺组脑梗死体积增大,其相对梗死面积为 (20.89?1.62)%,且与前两组比较有统计学意义(P <0.05);而24hR,48hR针刺组脑梗死体积最大,分别 为(31.264-2.00)%和(31.87?2.46)%,与模型组的 梗死体积比较接近,且与前三个针刺组比较,差异显着 (P<0.05).此结果说明:在再灌注2h或6h即开始 给予针刺百会透曲鬓治疗能明显减小MCAO/R大鼠 脑梗死体积,在再灌注12h给予针刺仍能有效减小脑 梗死体积,但超过12h后给予针刺只能轻度减小脑梗 死体积.故认为及早进行针刺百会透曲鬓治疗,尤其 在大鼠MCAO/R术后12h以内治疗,对减小MCAO/R 大鼠脑梗死体积是最有意义的. 综合上述实验结果不难发现,超早期应用针刺百 会透曲鬓对MCAO/R模型大鼠具有肯定的脑保护作 用及临床应用价值,但其作用机制还有待我们进一步 研究. 参考文献: [1]马玉侠,王舒,倪光夏,等.醒脑开窍针刺法对不同时间局灶性脑 缺血再灌注损伤时活体脑片海马神经元[ca.]i的影响[J].中 医药,2007,35(5):9—11. 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