[word格式] 莲芝消炎分散片等中成药微生物限度检查法的建立

[word格式] 莲芝消炎分散片等中成药微生物限度检查法的建立 莲芝消炎分散片等中成药微生物限度检查 法的建立 第22卷第5期 2006年10月 广东药学院 JOURNALOFGUANGD0NGCOLLEGEOFPHARMACY V01.22No.5 0ct.2006 莲芝消炎分散片等中成药微生物限度检查法的建立 林丽英,陆广欣,湛文青(广东省药品检验所,广东广州510180) 摘要:目的建立莲芝消炎分散片等10种中成药的微生物限度检查法.方法测定各品种对5个规定试验菌株的回收率;对必检 控制茵的检查法进行验证.结果复方天麻颗粒,当归南枣颗粒,复方南板蓝根颗粒无抑茵作用;安胃片,银黄颗粒,消渴片,金 佛止痛颗粒和鼻咽灵颗粒等对细菌有一定的抑茵作用;莲芝消炎分散片和七叶神安片对细菌的抑茵作用很强.结论无抑茵作 用品种用常规法检查微生物限度;有一定抑茵作用的品种可用培养液稀释法检查;抑茵作用较强的品种用沉降法+薄膜过滤法 检查;各个品种的控制茵检查均用常规法. 关键词:中成药;微生物限度检查;培养基稀释法;薄膜过滤法 中图分类号:R915文献标识码:A文章编号:1006—8783(2006)05—0505—03 根据《中国药典))2005年版规定,检查供试品中 污染的细菌,真菌及酵母菌数和控制菌应采用验证 的方法,方法的验证是确认供试品在所采用的检查 方法和检验条件下无抑菌作用,以保证供试品所污 染的微生物能充分检出?J.对于具有抑菌作用的 中成药,由于抑菌活性的干扰,用常规法检查微生物 限度的结果不能真实反映药品微生物污染的情况, 须先消除供试品中的抑菌活性,再根据《中国药典》 规定的方法进行检查.因为各品种的抑菌作用强弱 不同,进行微生物限度检查时,要消除其抑菌活性所 采用的方法也不相同,因而须对每个品种建立适宜 的微生物限度检查法.本文对莲芝消炎分散片等 10个品种的微生物限度检查法的建立,可为各类药 品的微生物限度检查法提供科学的实验依据. 1实验材料 1.1菌种 大肠埃希菌[CMCC(B)44102],枯草芽孢杆菌 [CMCC(B)63501],金黄色葡萄球菌[CMCC(B) 26003],乙型副伤寒沙门菌[CMCC(B)50094],白 色念珠菌[CMCC(F)10123],均为国家菌种保藏中 心提供;黑曲霉(ATCC16404)为广东省微生物研究 所提供. 1.2培养基 使用符合《中国药典》2005年版的各种干 燥培养基. 1.3样品 七叶神安片(批号:050915),复方天麻颗粒(批 基金项目:广东省中医药管理局资助项目(1050038) 作者简介:林丽英(1962一),女,副主任药师,主要从事药品 微生物检查研究工作. 号:050501),安胃片(批号:051024),当归南枣颗粒 (批号:20050311),银黄颗粒(批号:050301)均是广 州市白云山和黄制药有限公司产品;复方南板蓝根 颗粒(批号:6168)是广州奇星药业有限公司产品; 消渴片(批号:050601),金佛止痛颗粒(批号: 050002),鼻咽灵颗粒(批号:050706)为广州中一药 业有限公司产品;莲芝消炎分散片(批号:050510) 是惠州九惠制药厂产品. 2方法与结果 2.1菌液的制备…按《中国药典))2005年版一部 附录”微生物限度检查法”项下,制成50—100cfu/ mL的菌悬液. 2.2供试液的制备称取样品10g,加0.9%无菌 氯化钠-蛋白胨缓冲液至100mL,制成1:10均匀的 供试液. 2.3方法验证 2.3.1细菌,真菌和酵母菌计数法回收率的测定 试验组:?常规法:取1:10供试液1mL(培养 基稀释法:0.5mL/l~,0.2mL/rm)和菌悬液1ml 注入1个灭菌平皿中,迅速倒入15—20mL的琼脂 培养基(45?左右),每个菌株做2mL,待凝.细菌 在30—35?培养箱中培养48h,真菌在23—28? 培养箱中培养72h,点计菌落数,取均值.?沉降法 +薄膜过滤法L3J:将配制好的1:10供试液静置3— 5min,取上层液1mL加入100mL稀释液中,减压 或加压抽滤,然后用300mL稀释液分3次冲洗滤 膜,在最后一次冲洗液中加入菌悬液1mL,滤干后 取出滤膜,菌面朝上分别贴于已制备好的相应琼脂 培养基平板上,培养,计数;每株试验菌至少制备1 个膜. 505 广东药学院,2006,22(5) 菌液组:测定加入的试验菌数. 供试品对照组:按试验组的方法,不加菌液,测 定供试品菌数(本底菌). 用常规法测定各品种对5个试验菌株的回收 率,以确定其抑菌程度.结果见表1. 表1常规法测定各试验菌株的回收率 Tab.1Recoveryratesofteststrains% 从表1可知:复方天麻颗粒,复方南板蓝根颗消炎分散片抑菌作用较强,其中莲芝消炎分散片对 粒,当归南枣颗粒等品种无抑菌作用,对各菌株的回金黄色葡萄球菌和枯草芽孢杆菌的回收率均低于 收率均高于70%;安胃片,银黄颗粒,消渴片,金佛5%;各品种对白色念珠菌及黑曲霉均无抑制作用. 止痛颗粒,鼻咽灵颗粒等品种对金黄色葡萄球菌和用培养基稀释法测定上述有抑菌作用品种对各抑菌 枯草芽孢杆菌有一定的抑菌作用;七叶神安片,莲芝菌株的回收率,结果见表2. 表2培养基稀释法测定各抑制菌株的回收率 Tab.2Recoveryrateofdilutionmethod% 由表2可见:?安胃片,银黄颗粒,消渴片,鼻咽 灵颗粒,金佛止痛颗粒由于抑菌作用较弱,将1mL 供试液分注到2个平皿(0.5mL/I111)中,通过培养 基将供试液稀释后,抑菌作用即可消除;?而对七叶 神安片,莲芝消炎分散片,由于抑菌作用很强,将1 mL供试液分注入5个平皿(0.2mL/皿)中,仍不能 完全消除其抑菌作用.再用沉降法+薄膜过滤法对 此两个品种进行试验,结果见表3.结果表明,用此 方法可有效消除药品对各试验菌株的抑制作用. 2.3.2控制菌检查的方法验证试验组:取规定量 供试液及10,100cfu试验菌株(验证大肠菌群时用 大肠埃希菌),加入相应规定量的增菌培养基中,按 各控制菌检查法检查. 506 表3沉降法+薄膜过滤法测定七叶神安片,莲芝消炎分散 片对各抑菌菌株的回收率 Tab.3Recoveryrateofsedimentationandmembrance filtrationmethod 阴性对照组:取规定量供试液及10,100cfu阴 性对照菌,按试验组操作. 结果:阴性对照菌组未检出阴性对照菌,试验组 检出试验菌.即方法成立. 本文10个品种均为中成药口服制剂,按《中国 第5期林丽英,等.莲芝消炎分散片等中成药微生物限度检查法的建 立 药典))2005版一部规定,每g(mL)不得检出大肠埃 希菌;有动物药投料的,每10g(mL)不得检出检沙 门菌:有原药材粉末投料的应检大肠菌群(每g不得 过100个).结果各品种控制菌检查均可用常规法 检查. 2.4微生物限度检查法的建立 2.4.1细菌计数检查法当大肠埃希菌,金黄色葡 萄球菌和枯草芽孢杆菌3个菌株的回收率均达到 70%以上时,说明样品中污染的各类细菌均能充分 检出,可用该法检查本品的细菌数.因此本实验中 1O个品种的细菌计数检查法为:复方天麻颗粒,复 方南板蓝根颗粒,当归南枣颗粒等3个品种可用常 规法检查;安胃片,银黄颗粒,消渴片,金佛止痛颗 粒,鼻咽灵颗粒等用培养基稀释法(0.5mL/lm)检 查;七叶神安片,莲芝消炎分散片应用沉降法+薄膜 过滤法检查. 2.4.2真菌和酵母菌计数检查法各个品种均可 用常规法检查. 2.4.3控制菌检查法各品种必检控制菌均可用 常规法检查. 3讨论 在颁布2005版《中国药典》前,中药制剂的微生 物限度检查通常是按常规的药品卫生检查方法?进 行细菌,真菌和酵母菌计数的.由于中成药是含有 多种成分的复合制剂,其中任何成分具有抑菌作用 或由于成分之间的相互作用均可影响微生物限度检 查的准确性.因此,有文献就具有抑菌成分的中 成药的微生物限度检查法进行了探讨,但对各种试 验菌株作回收率和控制菌检查系统进行验证试验的 文献报道并不多.本文按照《中国药典))2005年版 要求,对莲芝消炎分散片等10种中成药的微生物限 度各个卫生指标的检查法进行了建立和验证. 从本实验结果来看,对有抑菌作用的中成药,可 通过对供试品作相应的处理,以消除供试品的抑菌 活性,再进行微生物限度检查,从而保证结果的可靠 性.对于抑菌作用较弱的中成药,用培养基稀释法 简便有效.但是,当供试品的抑菌作用较强时,用稀 释法难以消除供试品的抑菌作用,可考虑采取沉降 法,离心沉淀法,薄膜过滤法等或几种方法联用,以 达到消除其抑菌作用,提高微生物检出率的目的,使 检查结果更真实反映药品的污染情况. 通过各品种对规定试验菌株的回收率实验可 知,具有抑菌作用的中成药品种,多数是对金黄色葡 萄球菌和枯草芽孢杆菌有抑制作用,对白色念珠菌 和黑曲霉几乎无抑菌作用,说明大部分中成药的抑 菌谱是以革兰阳性菌为主的.这一结果可为各种中 成药品种微生物限度检查法的建立研究提供有效的 参考价值. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华A-R,共和国药典:一部[S].北京: 化学工业出版社,2005:附录7l一74. [2]林丽英,湛文青,饶春意,等.野牡丹止痢片微生物限度检 查法的建立[J].中药材,2006,(3):299. [3]马越,特玉香,杜平华,等.16种中成药微生物限度检查法 方法验证[J].中国药品标准,2005,(6):12. (收稿日期:2006—06—12) (上接第504页) 4.2将薄层色谱扫描法和文献[7]报道的反相高 效液相色谱法进行比较,检测了5批产品,结果差异 无显着性,说明用薄层色谱扫描法检测冯了性风湿 跌打药酒方法的可行性. 4.3通过对冯了性风湿跌打药酒中东莨菪内酯含 量测定,可以控制该药制剂的内在质量,并对其生产 和工艺具有指导意义. 参考文献: [1]宋蔚,金蓉鸾.光叶丁公藤化学成分的研究[J].中国中药 杂志,1997,22(6):359. [2]叶惠珍.丁公藤抗风湿有效成分的研究[J].中草药, 1981,12(5):5. [3]国家药典委员会.中华人民共和国药典:一部[s].北京: 化学工业出版社,2o05:3. [4]曹红,泰红霖,钟晓峰,等.高效液相色谱法测定藤络宁 胶囊中东莨菪内酯的含量[J].中国药学杂志,2001,36 (6):41l一414. [5]李梅,陆敏仪.HPLC法测定丁公藤中总东莨菪内酯含量 [J].中国中药杂志,1999,(1):41-43. [6]李玲,刘明珠,徐卫明.薄层刮板一荧光分析法在中药复 方制剂质量控制中的应用[J】.中草药,1996,27(5):275. [7]梁兴.反相高效液相色谱法测定冯了性风湿跌打药酒中 东莨菪内脂含量[J].佛山医药,1995,14(13):225. (收稿日期.2006—07—06;修回日期:2006—09—15)