【doc】新疆三种无尾两栖类乳酸脱氢梅（LDH）同工酶酶谱的比较研究

【doc】新疆三种无尾两栖类乳酸脱氢梅（LDH）同工酶酶谱的比较研究 新疆三种无尾两栖类乳酸脱氢梅(LDH)同 工酶酶谱的比较研究 弟7卷第4期 199Ol1月 新量大学学撮(自{蠡学版) JournalofXinjlanKUniversity V01.7.NQ.4 No..1990 新疆三种无尾两栖类乳酸脱氢酶 (LDH)同工酶酶谱的比较研究. 黄人鑫吴霞姜涛邵红光 (新曩大学生曲幕) t 一 ' 捆.要 ,… {掇导了缘蟾蟑(Bafo--),中国韩蛙(Rum'嗍,凸el辅I)和湖蛙(rMd~n正I) 新疆三种尢尾两牺类的晶体,舌,肝,胃最后破丰蕞蠢赤种鲺级毳醴脱氢酶(LDe1)同工醇景丙蛘 蘸胺凝腔电谛图谱的I匕轻研究,从碑谱的匹带目,迁移率爰扫描匿谱来看,三种动转的酶{其肓 明显种的骑并性.酶谱的相似程度同袖种搠的泰埠黄暮有关;酶谐弈明星反映器官蛆级的特异性 关键词两牺类;,L睦脱氢鸶(LDH)同工一I电诛II曝 瓤疆着无尾两栖类已知仅{种,其中除中国林蛙尚产于内地十余吉区外,其余3种在田I 怖iJ产于新疆.用电沫技术对无尾两栖类的生化特征进行比较研究,国外已撇了不少工作 ….Iirt.1973;Rogers,1973;?I岫c.1975;Maxson,1981等),国内也青几剜报导(杨节华r973 ,戆时新疆无尾两栖类,却至今无^,同津.本文报导了采用聚烯酰艘凝艘屯酶技术对绿蟾 竹?}围林蛙和湖蛙三种新疆无尾两牺类乳酸脱氢酶(LDH)同工醇电泳酶谱的比较研宄结果. 村判与 II材料以成体为实验对象,每种动物雌雄各5只.中国林蛀和湖蛙于1989年d丹】R,26}j 甲n伊犁地清水M镇;绿蟾蜍于1989年5丹20日自新疆大学红湖附近. 1.2试样制备将活体动物断头处死,放血后迅速取出暖球品体,舌,心,肝,肾及后肢半膜肌 R{,纽纵.用0.71《两牺粪生理盐水洗净放在顶玲的研磨巾.加入d?TrisGly缓冲渍,在珠潜条 1,匀裴后,将组织匀壤蔽lHS(.20R高速玲抹离心机于25063s.d?条件F离心2Omn取} 置青霉紊小瓶,并放置枉一20L,冰箱中冷冻藏待用.? I电泳采用聚烯酰胺管状凝胶电泳,方法参照胡能等着《同工酶技术与应f}j》井稍作 0蔓.1}!淋仪为DYV一啊型匏稳流li土泳仅,电极缓冲液为p{8.3的TrjsGly溶液.每蒋加样 I.b20~,1,以浪酚兰为指示剥,l流强度4,5mA/管,电压维持在I?V,待滇酚兰接近管农约 卜?If停lIll三泳,时J约2hJhf^结求后,取出胶条浸入啊基腹色液的培养皿噜I,置37(似 确1j孵育lO,2(;rain,}5-谱咒川燕镐玳冲洗.然后放住7的醋酸液中脱色耐定 II扫描与照相胶条IIj阳,【)<l型tU沫光密度扫描仪进}扫描,同时对胶条进行 刚. 结与I 一 同,动物不组缎1?j甑的瞒诺L较 - f_】^__'1J;:_II 第{期新疆三种无尾两栖类乳酸脱氢酶(DH)同工酶酶谱的比较研究. 中园林蛙,湖蛙和绿塘蟓的6种组织LDH同工酶的电泳酶游见罔l,3,从正极端 起依次为 LDH,LDII2,LDI{.…),色谱扫措结果见图4,6,相对迁移率列示于表1. 品舌心肾盯足 l_Il国林蛙LDII I.j —t l 晶舌心肾|干足 2瑚蛙u)}l 一 |9i露离 晶舌心肾肝足 I鲁I3辅蜍TJ)H , 5 匾4中国悻蛙各组织n盯同工畴色谱扫描鲒毛 n品体b舌c心d肝脏e肾脏t半膜I,L {-|,j鸸, :J-?-"0? n n 3r . 一 3I___ ,?1 f , 2 .-二_二?. 二二二=?:.3{?... 2 2^0 月?===. 60新疆大学(自然科学版j 3 』l 图6埠蟾蜍各组织LDH同工啤色谱扫描鲒襄 B晶体b舌c心睢Ed肝脏e肾脏f半膜叽 由图l可见,在中国林蛙6种组织的LDH而工酶谱带中,品体,占和后肢膜肌为5条带.…】 心,肾和册却为4条带.扫描结果表明(罔1),在不同组织中,LDH同工酶的相对活性也是响很 大差异的,品体为LDH3>LDH'>LDH1,)LDHz>LDH5,舌为LDH,I,DH>IDH4LDtI,> LDH脏肌为LDH1>LDH2>LDH3>LDH,肾为LDHL>LDH'>LDH3>LDH.肝为l'Dtl-> LDtlT>LDl{3~LDHz,后肢芈膜肌为 LDH5>LDH>LDl{3>l_DHz>lDHf. 表1三种无尾两栖类6种组织LDH同工酶的桕对迁移率 组织U)|11LDH2LDlt3I|)H?)H51.1l名 l}f茸林蛙D.53士O.040.49士06O.38士0.0O32士000.28,00 湖蛙O.53士0.030-19土0.03016士O.I)30.31土00.27士0.114晶悻 绿蟾蜍O.37士0.O10-29士0.010.22士O.05 lf】林蛙0.57士O.020.53,0.030.帅士n?O.31士0.03027士O.03 『觇蛙0.士0.02O.28士o^020.25士0.1)20.21)土0.02O.I6士002舌 绿蟾蜍O.37士0.010.21士0.0t)90.22士0.010.15士0.008 lII国肺蛙O.59土0.O10.43土0.030.35士0.O20.23土0.O5 湖蛙0.38士0.O3O.3I士0.O2O.27士0I)30.22i0.0d心 绿螗蜍0.5I士003O.d3士00,t0土0.(13O.28+0叫0.22上00ll{l七c『.uI 一Ir[目林蛙0.5,t士0.05O.10士0.010.31土m01O.27土0.O^ 糊蛙0.^O土0.010.2d土0.0l0.I8士0.020.07上0008肝 绿蟾蜍0.51士O02O.38士0030.30士O.020.24-101t2(『?In03014I-0.n_ lfl国林蛙O.57士mO0m43士0.o8O.35土0.070.28土0.(15 胡蛙0.38士O.O5O.27士0.030.22士O.030.17士O03肾 绿蟾蜍0.42士0.03O.31士0.030.28士0.030.2I士0.02O.I5士0.0I {r崮林蛙0.58士0.040.dI士0.030.3,1士n03028士0.O2n.?3}005 湖蛙0.38士0.02032士0.02023士0.010.16,001足半膜肌 绿蟾蜍O40士0.020.32土0.010.24士0.OI(}.I600I (计一i土S.D) 第4期辆疆三种元尾两栖类乳酸脱要酶(LDH)同_[酶酶谱的也较餐 在谢蛙的6种组织中,除晶体和舌为5条带外,其它d种组织均为4条舟L围Ij.扫描结果表明 (图5).晶体中LDH同工酶的相对活性为 LDH.>LDHI>LDH2>!.Dhj>LDHst舌为LDHs> LDH1>LDH'>LDH{>-LDH2,心脏肌为 LDHl>LDHt>LDHz>LDH3.肾为LDH1>LDHs)LDIl >LDH2,肝为LDH'>LDI{I>LDH2>LD|11.后肢半膜肌为LDH~i—DH,>LDt{~,LDHz 绿埔蛛6种组织的LDH同工酶的酶谱差异更大(圈3),除倚为5条带外,多髫知1lI午u肝都为 6条带.步者如舌和后肢半膜肌为4条带.最少的如晶体只雷3条带.扫描结果表明}5,.晶体中 LDIq同工酶的相对活性为LDH{>LD>LDHI,舌为?j}{{>LDH,>LDH')LD1{l~_脏肌为 iDtjL眺T,,,LD]Is:l{1>LDH{LDHB.肾为LDt{6LDII.,LDHI0{:2,,I.DH,肝 LDH5,)LDi{LDH.>Li)tt.>LDitLI)It.唇肢半膜肌为LDH.LDH,LDH?lIi_i)l{ 在同一动物不同组织之闷LDH同工酶的相对迁移率(,值)也是不同的'表I),妃中国林 蛀的一,肾,后肢牛膜肌和舌咔I的LDtl值明显大于品体和卅中LDH酌,值;湖蛀体中 的LDH的?值远?于湖蛙其它组织中的,值}绿蟾蟓的心干【I册中LDH的町值叫显太于其 它组织中的LDH的可值 表2三种无尾两柄盎同一组织LDH同工酶迁移卓的差异性 注t.表示不显着(P>0+05)-+表示差异曼着(P<0.05)I.++表示差异扳显着<0.叭1 阻卜研究结果均表明.LDH同工酶具有组织器官特异性.这一特征是同该组织器育所处 的生理条件乖?机能相一致的,因为LDH同工酵是由H和M两种不同类型的蛋白亚基组成的 四聚体,H和M两种亚基可按同比例聚合为五种不同的LDH同工酶:LDH.fH.,LDH (H3M,LD1l3(H=M2),LD[,I(HMI和LDHs(M)中国林蛙与湖蛙的心脏和肾氧强'?较高所 含LDH同一r.酶的相对活性较大,说明富含H亚基+能有效地催化乳酸转弯为酮 醑进Im参 加三羧酸循环.以产生较多的能量IATPj供应该两种组织器官的需要;相厦.存芭绍巾葛 新疆大学(自然科学版)990址 张力较低,LDH干lILDH.的相对活性较高,富含M亚基,适于催化丙酮酸转变成乳酸及NAD, NAT)+又进一步促进酵解进行.为这些组纵器官的活动提供能量, 值得指出的是,在绿螗蜍的六种组织中.富含M亚基的LDHsLDH的相对活性往往高 于甯占H亚基的LDH和LD的相对活性,就连通常为耗氧塑的,Ii.脏和肾脏也基本L是如此. 绿蟾蜍是蒙新区西部荒漠亚区的代表动物之一.同其它两栖类比较起来,皮肤呼吸也很重要, 但较能耐旱,能到离水较远的地方生活,但行动迟钝述特征是否同它这样的生活方式和习. 性响关.是一种生态生理适应现象?尚有待进一步研究, 22不同动物同一组织LDH同工酶的酶谱比较 表2列示了三种动物同一组织LDH同工酶迁移率的差异性.从中可见,其I的差异是非常 叫的,在中囤林蛙同胡蛙相比较的25项指标中,仅品体的LDHt.LDHz利LDH?为差异不显着 (P,,0.05),I.Dt|为差异显着(P<0.05).其它2l项指标均为差异极显着(P<0.0】);在瑚蛀 网球楠蟓丰仃比较的22项指标中,仅舌的LDH,肾的LDH,,后肢半膜肌的LDHz和l阱?为差异 小并,舌的LDH利后肢半膜肌的LDHa为差异显着,其余I6项指标均为差异极硅着;在中田 林蛙同绿蟾蜍相比较的23项指标中,仅心脏的LDH:和LDH,肝脏的LDH和LD}fz 为差异显 着,心}l},的IDI.菁1JHf的LDH为差异显着.其余17项指标均为差异极显着, 酶{的区带数目l卜,中同林蛙干lI潮蛙十分接近,品体,舌,心,肾,肝都为5:s:^:d:d,},仃 后月EI瞒肌fI昕R,中国林蛙为5条.湖蛙为4条.绿螗蜍与两种蛙类截然不同,品体,舌,心, .HI的带匏为3d6;5t6,睫后肢牛膜肌同j《lj蛙为4条带. 绿瞻蜍的心脏和肝的LDH同工酶谱多于5条带.这种情况称为酶谱的多样性,衔千'# I"I)叶}咒我耐蟾蟓(B~foh1的三个亚种时便已发现,其他作芹(Rogers,1g7:等)也行 州咒{}{导. 组成1Dl1同T酶四聚体的H和M两种不同类型的蛋白亚基分别是由B,A两种基因所决 定nI.DH同工酶I泳图谱的特征反映了基因的活动与调控状况,即反映了遗传本质,所H 说.I形相似刚亲缘关系较近.中国林蛙同湖蛙十分接近,绿蟾蟓则同这两种蛙娄截然l小同,这 lf:}娄所定的亲缘关系是相一致的. 3站论 3l诵过同一动物不同组织器官(品体,舌,心,肾.肝和后肢半膜肌)LDH同工酶酶谱的比较 ?,E论酶谱的带数日,各种I.DH同1:酶的相对活性干?秆】对迁移率(R:值)I-,部存在 flJ]肇j},丧【UILD}{同工酶具f『明显组织器官特异性. 3.2浦过小同动物同组势l器官LDH同]:酶的比较研究发现,在相对迁移率上都存在订撤 着的差异多为P<0.01),但在酶谱的区带数目.中国林蛙和湖蛙十分接近,晶体,舌,心, 肾,HF部为5;8;4叫4,只后肢半膜肌有所不同,中围林蛙为5条带,湖蛙为4条带. 绿蟾赊与这两 种蛙类截然同,品体,舌,心.肾,肝和后肢半膜肌为3—4t6t5t6;4.表明中国林蛙和湖蛙的亲 缘蔓系较诟.绿蟾蜍同这两种蛙类的亲缘关系较远 33绿螗蟓在酶谱区带J一呈现多样性.匈条带;LDtl1酶的桕对活性亦f1 卿ll精,耗钮的心脏和肾脏高含H亚基的11JII.lII)}l的相对活性较骶.其原国有待进一 券 第4期新疆三种无尾两牺类乳馥脱氢酶(L工,H)同工酶酶谱的比较研究63 参考文献 捌承制.胡彀琴.中罾无局两栖类.北赢t科学出版牡.19601183~188 冯厢罩两瓶睫行动物.1986~5(2).81~8S 向札陂.黄人盎.新曩大学(自然科学版).1980~Itg2~85 胡扼书.万贤国.同工鸯拄术及其应用. 张龙舞生化实验方洼和技术'人民教青出版社,1981 拓玉华.两瓶睫行动自学撤.1983~2(2).2,9 赵尔密等.动物,1981j27t213~217 ?Lc}薜坊承生钧科学动态.19"78~6t69,-~73 MaEd]ew8TCo,1975j3;454~465 M?.onLRM?mACCopra.1974I'l833~838 PoLla~6Mta1.H坤岫10盟,1973I2gl251~2S3 P~I'BSJ.o叩EIa.1973}2l322,330 ACOMPARATIVESTUDYOFLDHls0EI2:YMEs FR0MTHREEK【NDS0FAMPHI瑚A玎?N?^NG Ab~ract TrTepofh出曲聃舛嘟ofde姆血o.蛐蛳?工幽哪a.fo,J'田唧: —曙?and-面时m蛐ofp.巧D吐缸Peld瞳?呷bct_tT,垮rmb墨田meInd.nlan忡f ~aeonfale.scermlngcu~ee8havebeen睁?d.T"鼬妇'that_吐am~rmland_吐tlmu~of^emln-mlaJ1 岫曲艄姻可maE咖I?lindl口协D|Iha甜础嘻r啦州岫toTt抽卸0tIha呲|p池1l lh址tha哇】呵h椰吨rI帆ofIt聃妇叩.fIarI.曲啪神?腓"ID岫of商岫凼丘n【o柚' 幽. 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