针刺足三里穴对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的影响

针刺足三里穴对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的影响 针刺足三里穴对吗啡依赖大鼠条件性位置 偏爱的影响 第26卷第2期2007年4月安徽中医学院 JOURNALOFANHUITCMCOLI正GE V01.26No.2 Apr.2007 针刺足三里穴对吗啡依赖大鼠条件性位置偏爱的影响 棠小鸽,张壶,朱永磊,刘先华 (安徽中医学院针灸经络研究所,安徽合肥230038) 摘要:目的:探讨针刺对吗啡依赖性的影响.方法:复制吗啡依赖大鼠模型,观察针刺足三里穴 对吗啡依赖大鼠戒断症状及吗啡条件性位置偏爱的影响.结果:针刺组比模型组戒断症状积分明 显减少(P<0.01),治疗后针刺组比模型组大鼠在白箱内停留时间减少,差异有显着性.结论:针 刺具有抑制吗啡依赖性,对复吸行为具有潜在的干预作用. 关键词:针刺疗法;足三里;吗啡;药物成瘾;复吸干预 中图分类号:R245.31文献标识码:A文章编号:1000—2219(2007)02—0021一O3 近来针刺疗法缓解心理渴求的临床与机制研究 偶见报道,针刺在康复期改善稽延性戒断症状,缓解 心理渴求的作用已经逐渐受到关注口-2].针刺在康 基金项目:安徽省重点科研项目(05021004);安徽省高等学 校自然科学研究项目(2005KJ275);安徽省合肥市重点 科研项目(2004—1003) 作者简介:宋小鸽(1953一),女,研究员,硕士研究生导师 复期是否具有降低依赖性,干预复吸的作用,值得观 察研究.为此,笔者观察了针刺足三里穴对吗啡依 赖大鼠戒断症状及条件性位置偏爱(conditioned placepreference,CPP)的影响,以探讨针刺对吗啡 依赖性的影响及干预复吸的作用.现报告如下. 1材料 1.1动物sD大鼠3O只,雌雄各半,体质量180, StudyonHypothalamus'SGeneExpressionofElectroacupunctureatthe HeartMeridianofHand-ShaoyinandtheSmallIntestineMeridian ofHand-TaiyanginInterveningAcuteMyocardialIschemiainRats ZHOUMei—qi,ZHOUYi-ping,WANGKe—ming,HULing, SHENXiao—ming,WANGYue—lan,CHENYe—nong (ReseachCenteronCorrelationbetweenChannelsandViscera,Anhui Col~geofTraditionalChineseMedicine,AnhuiHefei230038,China) Abstract:Objective:ToinvestigatehypothalamusseffectofeIectroacupunctureinterveningacutemyocardial ischemia.Methods:TwentySDratswereevenlyrandomizedintomodel,LungMeridian,HeartMeridianandSmall IntestineMeridiangroups.Amodelofacutemyocardialischemiawasmadebyligationofleftanteriordescending branchofthecoronaryartery.AcomparativestudyonchangesofgeneexpressionpatternofLungMeridiangroupVS modelgroup,HeartMeridiangroupVSmodelgroupandSmallIntestineMeridiangroupVSmodelgroupinhypothal— anluswasdonetofindcommonanddifferentialexpressiongenes.Results:Differentialexpressedgenesandex— pressedsequencetags(ESTs)were26withsignallogratio?一1and57withsignallogratio? 1inLungMeridian groupVSmodelproup.34withsignallogratio?一1and190withsignallogratio? 1inHeartMeridiangroupVS mode1groupand97withsignallogratio?一1and122withsignallogratio? 1inSmallIntestineMeridiangroup VSmodelgroup.respectively.Up—regulatedthyrotropinreleasinghormone(Trh)geneanddown—regulatedcortico— tropinreleasinghormone(Crh)genemarkedlywereonlyfoundinHeartMeridiangroupVSm odelgroupandSmall hatestineMeridiangroupVSmodelgroup.Conclusion:Differentialexpressiongenes,espec iallyTrhgeneandCrh geneinhypothalamus,mayparticipateinprotectiveeffectofelectroacupuncureattheHeart MeridianofHand— ShaoyinandtheSmallIntestineMeridianofHand—Taiyangagainstacutemyocardialischemia. Keys:Acutemyocardialischemia;Electroacupuncture;Hypothalamus;Geneexpress ionpattern 21 200g,由安徽医科大学实验动物中心提供. 1.2药品与仪器盐酸吗啡由辽宁省沈阳第一制 药厂提供,批号000606.条件位置偏爱箱(cPP), 由安徽省淮北正华生物仪器设备有限公司提供. 2方法 2.1复制吗啡依赖大鼠模型连续递增给予动 物注射吗啡20d,第1天皮下注射吗啡5mg/kg.从 第2天起,每天吗啡剂量增加5mg/kg(每天上,下 午各1次),第20天的给药量达100mg/kg.连续 给药20d,末次给药剂量为100mg/kg,复制成吗啡 依赖大鼠模型.于实验第21天突然停药,动物则出 现戒断症状. 2.2CPP测试CPP箱由黑色和白色两种颜色的 箱子组成,在黑色和白色箱子的中间,有一个灰色的 通道,两端分别与黑色,白色箱子相通.大鼠具有喜 暗避明的行为习性,正常情况下把大鼠放在灰色的 通道中,任其自由跑动,它往往会向黑色箱子方向爬 行并停留.在模型复制前无药状态,观察15min,自 动大鼠在白色箱内的停留时间,连续6d,测试 大鼠对黑色或白色箱子的天然偏爱.在复制模型时 封闭灰色通道,给予正常组大鼠注射9.0g/L氯化 钠注射液,给予模型组和针刺组大鼠注射吗啡,立刻 放人白色箱内,停留45min,连续20d.在模型复制 ,开放灰色通道, 结束和针刺治疗后,为CPP测试期 将大鼠置于通道内,任其在黑色或白色箱中自由跑 动.记录其15min内在白色箱中的停留时间,观察 大鼠行为习性的变化. 2.3实验分组实验分3组,每组8只,雌雄各半. 正常组:皮下注射注射用水0.5ml,每天1次,连续 20d,常规饲养观察7d;模型组:模型复制后不予任 何治疗,常规饲养观察7d;针刺组:模型复制后,于 实验第21天给予电针双侧足三里穴(PCE.88A型 程控电针仪,采用2Hz和100Hz交替,强度为10mA 的连续波),每天1次,每次30min,连续治疗7d. 2.4观察指标 2.4.1戒断症状:于实验第21天,观察记录各组大 鼠戒断症状并评分(异常姿势3分,激惹4分,腹泻 4分,舔阴4分,抖动3分,嗜睡1分,咬牙1分,频繁 洗脸1分). 2.4.2CPP测试:运用CPP箱对各组大鼠在模型 复制前,模型复制后和针刺治疗后3个阶段进行 测试. 2.5统计学方法实验数据采用"4-s"示,组 问差异性比较用t检验,方差分析,所有统计数据均 用SPSSl1.0统计软件分析. 22 3结果 3.1各组戒断症状积分比较模型复制后突然停 药,模型组和针刺组大鼠出现激惹,腹泻,扭体等戒 断症状.停药后12,24,48h,针刺组戒断症状积分 显着低于模型组(P<0.05,P<0.01).同组比较 显示,戒断症状积分逐渐下降,表明随着时间推移, 戒断症状有所减轻,但第3天针刺组比模型组戒断 症状积分显着减少(P<0.01).见表1. 表1停药后戒断症状积分比较(分,n=8,?s) 绡-异lf堕堑垂坌 ….停药后1h停药后12h停药后24h停药后48h 模型18.75?1.9114.88?1.3610.86?1.463.86?1.25 针束018.36?1.5111.50?1.77'7.25?1.98'1.25?0.71" 与模型组比较,}P<0.05,}{P<0.01(下同) 3.2CPP测试比较在模型复制前后和针刺治疗 后3个阶段的测试结果表明,模型复制前各组大鼠 在白箱停留的时间基本相同,差异无显着性,表明动 物对黑箱趋向依赖的习性.模型复制后模型组和针 刺组大鼠在白箱停留的时间基本相同,差异无显着 性,并明显比模型复制前延长,表明两组动物对白箱 产生的依赖性接近.模型复制前后同组CPP 时间相比,正常组差异无显着性,表明正常大鼠保持 了对暗环境喜好的行为习性,对白箱未产生依赖性; 而模型组和针刺组大鼠在白箱停留的时间明显延 长,与模型复制前比较,差异有显着性,提示模型组 和针刺组大鼠对白箱产生依赖性,出现了吗啡条件 性位置偏爱.与模型复制后比较,治疗后模型组大 鼠在白箱停留时间虽有减少,但差异无显着性;针刺 组大鼠在白箱停留的时间明显减少,差异有显着性; 正常组大鼠在白箱停留时间显着延长,差异亦有显 着性,可能与模型复制后多次被放人白箱内,使其对 明环境相对习惯有一定关系.治疗后针刺组比模型 组大鼠在白箱停留的时间减少,差异有显着性,提示 针刺具有减轻吗啡条件性位置偏爱,抑制吗啡依赖 大鼠对白箱依赖行为的作用. 5) 表2CPP检测时间比较(n=8,? 与模型复制前比较,?P<0.05; 与模型复制后比较,?P<0.05 4讨论 条件性位置偏爱体现了复吸行为的基本生物学 特征,在国内外有关复吸机制研究中的应用正逐渐 增多.CPP测试的基本原理是巴甫洛夫的经典条件 反射学说,即把奖赏刺激或厌恶反应与中性刺激反 复联系,使其形成相对稳定的行为模式]. 实验观察到,连续注射吗啡造成大鼠对吗啡成 瘾,产生了依赖性,突然停药大鼠出现戒断症状,与 机体内外阿片类物质缺乏,造成各系统功能紊乱有 关.针刺具有调节内源性阿片肽释放的作用,使戒 断症状减轻,对脱毒起到促进作用. 大鼠对吗啡形成依赖的同时,在白箱滞留时间 延长,表明大鼠对给吗啡的特定环境产生了依赖性, 改变了喜暗避明的行为习性.针刺足三里穴后,大 鼠在白箱滞留时间明显缩短,对伴药特定环境的依 赖性降低,逐步恢复了喜暗避明的行为习性,表明针 刺治疗具有削减依赖性,对复吸依赖行为具有潜在 的干预作用. 有研究资料表明,复吸与中脑边缘多巴胺(do— pamine,DA)奖赏通路(主要由腹侧被盖区(ventral tegmentalarea,VTA),伏隔核(nucleusaccumbens septi,NAc),杏仁核(amygdala,Amyg)等构成)有关. 杏仁复合体发出谷氨酸能神经冲动直接激活VTA, 也可以通过额叶皮质激活VTA的多巴胺能神经细 胞,最终导致NAc的多巴胺释放增加,介导了吗啡 的奖赏效应. 针刺对神经系统的影响不仅局限于对内源性阿 片系统的调节,还可影响其他非肽类递质,如DA, 5-羟色胺(5-HT),缩胆囊素(cholecystokinin,CCK), 谷氨酸(glutamicacid,Glu)等,而这些递质也参与了 吗啡的条件性位置偏爱效应.针刺具有多系统,多 水平,多环节,多靶点的作用特点,其抑制吗啡依赖 性,干预复吸的作用,可能与激发经气,疏通经络,调 节气血,扶正祛邪的作用有着密切的关系,从而调动 自身调整能力,促进机体内环境稳定,使病理状态向 健康状态转化.其作用机制尚待进一步深入研究. 参考文献: [1]吴俊梅,魏东焰,罗永芬,等.针刺对海洛因依赖的 脱毒疗效及其防复吸潜力的临床研究[J].中西医结合, 2003,1(4):268. 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