【doc】巨细胞网状核与脊髓后角间的双向投射—HRP法和ARG法联合研究

【doc】巨细胞网状核与脊髓后角间的双向投射—HRP法和ARG法联合研究 巨细胞网状核与脊髓后角间的双向投射— HRP法和ARG法联合研究 ;4—;/ 第28卷第3期 1993正 河南医科大学 J0URNALOFHENANMEDICALUNIVElLSITY Vo1.28.No.3 l993 巨细胞网状核与脊髓后角间的双向投射 ARG法联合研究 HRP法和 争妊滨颧生占f . (河南医科丈学人体解剖学教研室),,f-'一 提要动物经戊巴比妥钠麻醉,于立体定位仪上将内古20HRP(注入2O只大鼠)或1O0 /fll~H一亮氨酸(注入12只大鼠)的微玻管插入巨细胞网状棱(NCC),标记物注射持续45ram.动物 存活2d(注入ItRp)或l周(注入亮氨酸)后.动物探麻,灌注,脑干或脊髓冰冻切片.分别进行 TMB呈色或D19显影.结果显示:脊髓板层?,?内的HRP标记细胞较板层I,V和IX为多.在 板层I,,?,?和?内可见散在的HRP标记终末..亮氨酸注入NGC后.下行放射自显影标 记终束在脊髓内出现的部位与上述HRP终末出现的部位基本一致.提示tNGC和 脊髓间存在着双 向投射芰系,并且此种形态学方面的投射特点为NGC在疼痛方面反馈性调节功 能提供理论依据. 关键词HRP;Ao;巨细胞阿状蓝;脑于;脊髓'',一_?.一 中国分类号R322 巨细胞阿状核(NucleusReticularisGigan— tocelluads.NGC)是延髓嘴侧网状结构的重要 组成部分之一.NGC主要由大型多极神经元 构成,细胞排列较稀疏.目前.神经生理学研 究已证明NGC与内源性镇痛],及其他多 种生理功能调节有密切关系,孙吉林 等曾观察到鸡NGC与脊髓问存在着双向投 射关系.但是在种系发生上,高等的哺乳类动 物是否亦保存着NGC与脊髓的双向投射关 系.目前尚未见报道.作者用辣根过氧化物酶 (HorseradishPeroxidase,HRP)法和放射自显 影(Autoradiography,ARG)法对大鼠NGC与 脊髓问的双向投射进行较系统地观察.以期 为比较神经解剖学及其生理机制提供新的研 究资料. 1与 实验用大鼠32只(280~320g),雌雄不 拘l戊巴比妥钠腹腔麻醉(35,40ms/ kg).在立体定位仪上将大鼠头前倾30.(齿杆 低于耳杆平面约15nun),切开环枕后膜,暴 露闩部.在闩平面旁开中线1ITlm,直视下将 *88级学生 - 224? 内含示踪剂的微玻管(尖端外径40~50m) 插入4.6,5.0mm,此时微玻管尖端正处于 NGC的中心处.示踪剂有二种.因实验方法 有别.故分述如下: 1.1ItRP法将0.1,0.5LLlHRP(20, SigmaVI)注入20只大鼠的NGC中,注射时 问为20,30rain.原处保留微玻管20,25 min,术后存活2,3d.深麻下依次经心脏灌 注:?0.9NaCll00,J50ml;?3.5多聚 甲醛0.1MPaS(pH7.4)300~500ml;?l0 蔗糖0.1MPaS(pH7.4)200~300ml.取材后 置入2O,30蔗糖0.1MPBS(pH7.4)溶 液中至组织块下沉,冰冻连续切片.片厚50 LLm,隔3片取1,TMB呈色.中性红复染.光镜 下观察HRP标记细胞及其终末在脊髓内的 分布. 1.2ARG法将0.05,0.23}I一亮氨酸 (100,l50LLci/LL1)注入l2只大鼠的NGC中, 注射时间为45min.动物存活l周.灌注同上 述.取材后需固定l周,冰冻连续切片.隔3 片取1.在暗室(恒温,恒湿)内涂核t型乳胶, 曝光6周,用D一19b显,定影,甲苯胺兰 巨 复染在光镜下用明,暗野观察银越在脊髓内 的分布 2结果 2.1HRP法在TMB呈色的切片可观 察到HRP的注入位点均局限于NGC中.从 浓染的注入位点中心到淡染的周缘医,其半 径约20O,250m.注射针道几乎投有明显 的柠染.在脊髓出现的HRP逆行标记细胞主 要位于颈髓,胸,腰髓的标记细胞极少见.脊 髓的标记细胞双侧均有,但以对侧为优势.在 颈髓(c,ce)的断面上,灰质板层vI和板层 ?中的HRP标记细胞较为集中,胞体为中等 大小,呈多极形.在?,V层及?层中亦可见 到少量的散在分布的中,小型多极标记细胞. HRP顺行标记终末在颈,胸,腰髓各节段的 I,?层均可出现,其中以颈髓(c,cs)对 侧灰质I,11层较为密集. 2.2ARG法.H一亮氨酸的注射区局限于 NGC内,其顺行标记纤维主要在脊髓腹侧索 和外侧索内下行,终末主要分布至颈髓c, Cs(对侧)的I,?板层内,而板层l,?,? 仅见少量银粒,放射自显影银粒的分布区与 HRP终末的分布区基本一致. 双向投射——HRP法和ARG 关于大鼠NGC向脊髓的纤维投射以往 的文献中曾有报道.MartmI用ARG法观察 到NGC向脊髓的下行投射主要到达颈,胸段 的灰质板层I,I和?层,而Frank用类似 方法却在脊髓内观察到与上述不尽一致的结 果:NGC向脊髓的下行投射主要局限于双侧 的灰质?和?层.作者用ARG和HRP顺行 追踪技术,均证明NGC的下行投射主要终于 脊髓的?,?板层,并且在I,IX板层亦有少 量分布,该结果与Martin的观察较一致. NGC内的大型多角细胞主要是5一羟色胺神 经元1",并且在脊髓的灰质l,?层中有丰 富的5一羟色胺能轴突终末.结合上述神经通 路的有关研究,作者认为,灰质中?,x层中 的5一羟色胺能神经终末可能有部分来源于 NGC中的5一羟色胺能神经元.另外.困NGC 的下行投射亦终止在板层l,?层.而该层 主要是调控躯体及内脏的感觉传人,故NGC 对脊髓的投射可能是实现其对疼痛的下行性 抑制的形态学基础. 5讨论2 NGC不仅是下行抑制的较高级中枢,也 是网状脊髓束的主要发源地[.Willam和 Mehjiler切除一侧脊髓腹外侧索后,在猫和猴 的NGC内发现了许多溃变的纤维和终末... Abols将HRP注入猫的NGC后,在脊髓灰质 内(以?,?板层为主,对侧多于同侧)发现了4 大量的标记细胞.本实验观察到大鼠NGC 内注入HRP后,标记细胞不但出现在颈髓灰 质vl和?层.还可出现在?,v层及?层中. 上述结果明:虽然哺乳动物与鸟类动物 的NGC均接受脊髓奸维投射,但是该种投射 的起源可因种类及种属的差异而有明显不R 同,此种差异可能反映了脊阿束从低向高级 的进化过程.7 参考文献 Takg1H.Analgesiabyenkephalinsinjectedintothe nucleusreticularisglgantocelluharlsofratmedulla ol~ongataEurJPharm?1978.49;儿3,116 JensenLYal~hT.Comparisionofantonc~iceptive actionofmorphinetheperiagueductalay,medial andparamdialmedullaintherat.BrainRes,1986, 363{9g,I13 D呲ald豫.MiehelCTonici兀flueneeofrostral brains~ructuresonpressureregulatorymechanisms inthecat.Scienee,196_.145{64--65 TovikA,BrodalATheofinofretico-Spinalinthe eat!Anexperimem~studyAnatRec,1957,128: 135 l13, VettesRP.Brainstemgigantocellular[i~llronsPat- ternsofacfivi~duringbehaviorandsleepinthe freelymovmgrat.JNeurophy.1979.42}214, 228 孙吉林鸡脊髓上行投射在蝤干的分布,神经解 剖学杂志,1986.2(2):177~182 孙吉林.鸡蝤干下行投射至脊髓的神经元分布, ?225? 第28卷第3期 1993监 河南医科大学 JOU~ALOFHENANMEDICALUNIVERSITY Vo1.28+No3 1993 186 神经解剖学杂志,1986,2(2):183, 8张香桐.针刺镇痛的神经生理学基础+中国科学, 1987,4:465 9WilLamRM.MactthEAscendingaxondegeneration followinganteroLateralcorodotormy.Anexperimen— talstudyinthemonkey.Brain.196O.83:718,750 l0AbdisrA.BashatimA1.Afferentconnectionsofthe rostralmeddilsofthecLAnettralsubstratformid— brain-medullaryinteractionsinthemodulationof pain.JCampNeural,l991,201l285~297 1lMartinGF,VertesRP.Waltzer.Spinalprojections ofthegigantoeelluLarreticularformationintherat: EridenceforprojectionsfromdifferentareastoLain— .ExoBrainRes一 irmeIand口叽dLamina? 1985.58:154,162 12FrankP.Ascendinganddescendingpr讲ectionsfrom nucleusrefieuLarlsmagnccelluLarisandnucleus retieularisgigantocellularis:Anautoradingraphie andHRPstudyintherat.BrainI.1984.292: 207,220 13BowerRM,Organizationofdescendingsetotonergic projectionstothespinalcord.BrainRe8+1982,257 :185,217 (1992一帽20收稿) Theefferentfibersandafferentfibersbetweennucleusreticularisgi— gantoeellularisandspiIlalcordoftherat:acombinedstudyofHRP andARG Jmy,W.g,耳l唧别k?,mXuefei,Maz^?,1阱..van蛳s(艇耐of mao~) AnimalswereanesthetizedwithsodiumpentobarbitoIandmountedinastereomxicjnstrume nt. Thenthemicropipecontaining20HRP(for20rats)or100uci/ul3l-I-leucine(for12rats)Wasi n— sertedintonucleusreticalarisgigantoceUularis(NGC).Theinjectionlasted45min.Twodays after beingtreatedwithHRPor7daysaftertheinjectionof一 Ieucine.animalsweredeeplyanesthetized andperfused;frozensectionsofthebrainstemandspinalcordweretreatedwithTMB(HRPm ethod) ordevelopedwithD一 19Hedeveloper(ARGmethod).TheresultsoftheHRPmemodjndicatedthat moreHRPlabelingceilswereobservedinlaminaevlandWthaninlaminae?一Vand ?.eHRP labelingtermina1wasobservedinI一?.vI.?and?ofC2-Cs.Injectionsof一 leucineintoNGC producedthedescendingautoradiographiclabelingterminalinthes,ameplacewhereHRPte rminalwas found.ThepresentresultsindicatethattheefferentfibersandtheafferentfibersbetweenNGC and s0inalcordserveasafeedbackreflexcireulationfor?inContrOI. Keywords:HRP;ARG;nucleusreticularisgigantoeellularis;brainstem;spinalcord 胎盘植人致子宫穿孔一例 李玉瑞李国廷(郏县人民医院)赵艳利(郏县幂头医院) 患者28岁,孕5个月,劳累后出现腹疼, F坠感,4h后娩出一死胎,3h后胎盘未剥 离,用卵圆钳钳夹胎盘,不易钳出,行后穹隆 ? 226? 穿刺抽出血性腹水,剖腹探查:宫体右上角胎 盘已穿透子宫全层,诊断为胎盘植入致子宫 穿孔.