分光光度法同时测定维生素C和维生素E

分光光度法同时测定维生素C和维生素E 中级化学实验(?)教材:中级化学实验(雷群芳主编)实验一 分光光度法同时测定维生素C和维生素E 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器与试剂 四、实验步骤 五、数据记录及处理 六、思考题一、实验目的 (1)掌握UT-1800紫外-可见分光度计的使用。 (2)学会在紫外光谱区同时测定双组分体系-维生素C和维生素E。二、实验原理 维生素C(抗坏血酸)和维生素E( 生育酚)起抗氧剂作用， 即它们在一定时间内能防止油酯变酪。两者结合在一起比单独使用 的效果更佳，因为它们在抗氧剂性能方面是“协同的”。因此，它们 作为一种有用的组合试剂用于各种食品中。 抗坏血酸是水溶性的， 生育酚是酯溶性的，但它们都能溶于无水乙 醇，因此，能用在同一溶液中测定双组分的原理来测定它们。三、试剂和仪器 试剂:抗坏血酸:称0.0132g抗坏血酸，溶于无水乙醇中，并用无水 乙醇定容于1000mL(7.50×10-5mol/L);生育酚:称0.0488g 生育酚 溶于无水乙醇中，并用无水乙醇定容于1000mL(1.13×10- 4mol/L);无水乙醇。 仪器:UT-1800紫外-可见分光光度计;石英比色皿2只;50mL容量瓶 9只，;10mL吸量管2只。四、实验步骤 1.配制标准溶液 (1)分别取抗坏血酸贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于4只50mL 容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。 (2)分别取生育酚贮备液4.00、6.00、8.00、10.00mL于4只50mL容 量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。 2. 绘制吸收光谱 以无水乙醇为参比，在320220nm范围测绘出抗坏血酸和生育酚的 吸收光谱，并确定λ1和λ2 。3. 绘制标准曲线 以无水乙醇为参比，在波长λ1和λ2 ，分别测定步骤1配制的8个标准溶液的吸光度。4. 未知液的测定取未知液5.00mL于50mL容量瓶中，用无水乙醇稀释至刻度，摇匀。在λ1和λ2分别测其吸光度。五、数据记录与处理 1. 绘制抗坏血酸和生育酚的吸收光谱，确定λ1和λ2 2. 分 别 绘 制 抗 坏 血 酸 和 生 育 酚 在 λ1 和 λ2 时 的 4 条 标 准 曲 线 ， 求 出 4 条 直 线 的 斜 率 ， 即 εxλ 、εyλ 、εxλ 、εyλ 。 1 1 2 2 3. 计算未知液中抗坏血酸和生育酚的浓度。 Aλ1 εxλ1bcx，εyλ1bcy Aλ2 εxλ2bcx，εyλ2bcy求解联立方程组就能得出各组分的含量. 休息 9 返回节六、思考题 1. 写出抗坏血酸和生育酚的结构式，并解释一个是“水溶性”，一 个是“酯溶性”的原因。 2. 2.使用本方法测定抗坏血酸和生育酚是否灵敏,解释其原因。实验二 萃取分光光度法测定 阴离子表面活性剂的浓度 一、实验目的 二、实验原理 三、仪器与试剂 四、实验步骤 五、数据记录及处理 六、一、实验目的 (1)熟悉分光光度计的使用方法和分光光度定量方法。 (2)学习萃取分光光度法测定阴离子表面活性剂的原理。 (3)了解分光光度分析中常见的干扰以及提高测定选择性的方法。二、实验原理 二乙二胺合铜分子体积较小，电荷密度较大，疏水性较小，因而 该阳离子配合物与水体中的小体积阴离子形成离子对化合物的能力 较小，它只能将分子体积较大的长链阴离子表面活性剂定量萃取入 有机相中，因而受到的干扰大大减小。但由于该配合物不含有离域 π键，其与阴离子表面活性剂形成的离子对化合物摩尔吸光系数很 小，测定的灵敏度较小。 为了克服这一缺点，本实验用二乙二胺合铜将阴离子表面活性剂萃取入有机相后，在有机相(三氯甲烷)中加入1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN)试剂作为显色剂，该试剂能与铜离子形成更稳定的且摩尔吸光系数较大的黄色配合物，在三氯甲烷液中该PAN-Cu配合物的ε4.1×104，λmax 560 nm，因而方法的灵敏度也大为提高。由于铜离子的浓度与阴离子表面活性的浓度存在定量关系，因而测得了铜的浓度也即间接测定了阴离子表面活性剂的浓度。三、仪器与试剂 瞧鳎分光光度计;250mL分液 漏斗;200mL量筒;移液管;分析 天平;离心机。 试剂: 阴离子表面活性剂标准溶液(1000 mgL-1十二烷基苯磺酸钠 标准储备液);二乙二胺合铜试剂:称取62.3 g硫酸铜晶体和49.6 g硫 酸铵溶解于蒸馏水中，加入45.1 g50 mL乙二胺然后用蒸馏水稀释至 1L，该试剂可以稳定数个月;1-(2-吡啶偶氮)-2-萘酚(PAN， AR)。四、实验步骤 (1) 被测试样溶液的配制 用量筒量取150 mL含有阴离子表面活性剂的水样，置于250 mL分 液漏斗中，将水样的pH调至59。加入10 mL乙二胺合铜剂及20 mL三 氯甲烷，振荡约1 min，在分液漏斗中静置，直至有机相与水分离。吸 取约13 mL的三氯甲烷层至15mL的离心管中，盖上盖后，2500 rmin-1 的转速下，离心分离5 min，用移液管吸取10 mL上层清液于20 mL比色 管中(注意溶液必须澄清)。离心管中残留的水珠可用吸水纸擦干。 在比色管中加入1 mLPAN试剂，盖上比色管塞子后，振荡，然后将显 色后的溶液用1 cm比色皿在560 nm下测定吸光度，参比液用10:1的三 氯甲烷乙醇混合液。(2)标准曲线的制作 取1.00 mL1000 mgL-1的LAS标准储备液置于100 mL容量瓶 中。用蒸馏水稀释至刻度，得10 mgL-1LAS标准溶液。分别吸取 4.00 mL、8.00 mL、12.00 mL、16.00 mL、20.00 mL该标准溶液于 100 mL容量瓶中，得0.4 mgL-1、0.8 mgL-1、1.2 mgL-1、1.6 mgL- 1、2.0 mgL-1LAS标准溶液。分别将上述标准溶液置于250 mL分液 漏斗中，并用50 mL蒸馏水洗涤各容量瓶，与分液漏斗中的标准溶 液合并，按上述水样测定同样方法进行分析测定。(3)空白值的测定 用150mL蒸馏水代替水样，按步骤12同样方法测定空白值。空白值的吸光度值应在0.0000.001之间。(4)样品的测定 将样品的吸光度值减去空白值后，所得的吸光度值与标准曲线对照， 计算水样中阴离子表面活性剂的浓度。五、 数据处理 测得标准溶液的吸光度后，以吸光度对LAS浓度作标准曲线。同 时测定被测试样溶液的吸光度。从标准曲线上查出待测试液LAS的 浓度，再计算出原试液中LAS浓度。六、注意事项 1. 注意吸量管的使用，准确吸取标准溶液和试液的体积; 2. 启开仪器的电源开关，调波长选择钮至所需波长处; 3. 要注意保护比色皿的光玻璃面; 4. 用待测液将吸收池洗涤3次，然后用擦镜纸轻轻擦干 净吸 收池 外表。测量时注意将盛放待测液与空白试液的吸收池须方向一 致放入吸收池架，吸收池架应恰好在凹槽位置; 5. 测量完毕，必须及时切断电源，开关放在“关”。吸收池用蒸馏 水洗干净，登记使用情况，盖好防护罩。