罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究的论文

罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究的论文 罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究的论文 罗布麻叶顶空气相色谱—质谱指纹图谱的研究的论文 作者:相淞华,宋建平,刘训红,张月婵 【摘要】 【目的】建立罗布麻叶挥发性成分顶空气相色谱—质谱(hsgc ms)指纹图谱分析方法,评价不同产地罗布麻叶药材的质量。【方法】采用hsgc ms联用技术对不同产地罗布麻叶的挥发性成分进行分析,测定其指纹图谱,确定共有指纹峰,并作模糊聚类分析和相似度评价。【结果】罗布麻叶挥发性成分中含有14个特征性指标成分,初步建立了以此14个共有峰为特征指纹信息的hsgc ms指纹图谱。【结论】本方法准确可靠,重复性好,可作为罗布麻叶质量评价的依据。 【关键词】 罗布麻叶/化学;挥发性成分/分析;指纹图谱 罗布麻叶为《中国药典》收载的常用中药,系夹竹桃科植物罗布麻apocynum venetom l.的干燥叶,具有平肝安神、清热利水之功效,1,。现代用于治疗高血压、高血脂、冠心病、哮喘、气管炎等疾病有较好的效果 ,2,。罗布麻叶挥发性成分为主要活性成分之一,如芳樟醇有镇静、降血压、抗菌等作用 ,3,,薄荷酮和胡薄荷酮有解热、镇痛、抗炎作用 ,4,,藏红花醛有较强的抗癌活性 ,5,,氧化石竹烯有平喘、镇静、抗癌作用,1 α 萜品醇有显著平喘功效 ,6,,但尚未见有关罗布麻叶挥发油指纹图谱研究的报道。WWw..Com本研究采用顶空气相色谱—质谱(hsgc ms)联用技术对不同产地罗布麻叶的挥发性成分进行分析，现报道如下。 1仪器与 试药 agilent 6890/5975b型气—质联用分析仪,g1701dad.0 3.00.611工作站,agilent g1888顶空自动进样器(美国安捷伦仪器公司),nist05质谱检索库。 罗布麻叶各产地样品为实地采集或由当地药材公司提供,编号为:s1 江西,s2 安徽,s3 吉林,s4 山东,s5 山西,s6 江苏,s7 新疆,s8 河北,s9 内蒙古,s10 天津,s11 辽宁,s12 陕西。均经研究者鉴定为夹竹桃科植物罗布麻apocynum venetom l.的叶。留样凭证存放于南京中医药大学中药鉴定实验室。 2方法与结果 2.1分析条件 2. 1.1色谱条件色谱柱:hp 5ms(涂布浓度为5%的苯甲基聚硅氧烷弹性石英毛细管柱,30.0 m×250 μm×0.25 μm);进样口温度:180?;程序升温:50?保持20 min,以4?/min的速率升至200?,保持5 min;载气:he气,流量: 1.0 ml/min,分流比15?1。 2. 1.2质谱条件电离方式:电子轰击离子源(ei);离子源温度:230?,四级杆温度:150?,接口温度:280?;电子倍增器电压:1 329.4 v;电子能量:70 ev;扫描范围:4 5.0~650.0 aum。 2.2顶空供试品制备 通过对药材粉碎粒度、体积装样量、顶空加热温度及顶空加热时间进行考察,确定罗布麻叶挥发性成分优化的顶空条件:取罗布麻叶粉末(过40目筛)3 g,精密称定,置顶空瓶中,密封,放入顶空进样器,120?加热平衡30 min,供测试。 2.3方法学考察 2. 3.12 h图取罗布麻叶挥发性成分进样分析,结果表明:60,120 min无出峰,提示50 min内挥发性成分出峰完全。 2. 3.2精密度试验取罗布麻叶(s2)挥发性成分进行分析,连续进样5次。结果表明:14个指标成分群保留时间的相对标准偏差均小于 0.21%,相对含量的相对标准偏差均小于5%,提示仪器精密度良好。 2. 3.3稳定性试验取罗布麻叶(s2)挥发性成分进行分析,分别在 1、 3、 6、2 4、4 8、120 h进样6次,得14个主要特征峰保留时间、相对含量。结果表明:14个指标成分群保留时间相对标准偏差均小于0.29%,相对含量的相对标准偏差均小于5%,提示120 h内样品(溶液)稳定性较好。 2. 3.4重复性试验取同一批次罗布麻叶(s2)5份,提取挥发性成分后分别进样分析,得14个主要特征峰的保留时间和相对含量。结果表明:14个指标成分群保留时间的相对标准偏差为0%, 1.37%,相对含量的相对标准偏差为 1.83%, 5.15%,说明重复性较好。 2.4指纹图谱建立 样品按选定的顶空条件及分析条件进行分析,测得所有供试品的气相色谱—质谱(gc ms)总离子流图;再对总离子流图中的各峰经质谱扫描后得质谱图,所有组分质谱数据经计算机处理和nist05标准质谱图库检索鉴定,并与有关标准谱图核对,初步确定出罗布麻叶挥发性成分中53种化合物。根据罗布麻叶挥发性成分hsgc ms总离子流图所给出的峰数高、峰保留时间和峰面积值等相关参数以及成分鉴定结果,进行分析、比较,制定hsgc ms指纹图谱(图1，见彩图页第666页)。 2.5指纹图谱分析 2. 5.1共有指纹峰的标定经对挥发性成分gc ms总离子流图的分析、比较,罗布麻叶标定14个共有峰作为指纹图谱的特征峰,1,14号峰化学成分依次为:2 戊烯 1 醇、未鉴定、1,2,5,5 四甲基1,3 环戊二烯、3,5 二甲基苯酚、安息香醛、2 戊基呋喃、顺式氧 化芳樟醇、2,6 二甲基环己醇、薄荷酮、藏红花醛、β 环柠檬醛、胡薄荷酮、大马酮、5,6,7,7a 四氢 4,4,7a 三甲基(4h) 苯呋喃酮。以2 戊基呋喃(6号峰)为参照峰,分别求出各共有峰与之相比的α值(调整保留时间之比)和各共有峰的相对峰面积(峰面积之比)，见表1。表1罗布麻叶挥发性成分中共有峰的相对保留时间α值和相对峰面积(略) 2. 5.2指纹图谱的聚类分析选择罗布麻叶挥发性成分中14个比较明显的共有峰,根据表1中的数据,采用spss 1 5.0软件中的hierarchical cluster analysis对12个罗布麻叶样品进行聚类分析,所用聚类方法为average linkage (between groups),距离为square euclidean distance,得不同样品罗布麻叶的聚类分析图。 图2结果显示:当距离标尺在1时,样品 5、 6、11,样品 1、 3、10,样品 2、9各归为一类;当距离标尺在2时,样品 5、 6、11与样品 4、8归为一类;当距离标尺在3时,样品 4、 5、 6、 8、11与样品 1、 3、10归为一类,样品 2、9与样品7归为另一类;当距离标尺在8时,样品 1、 3、 4、 5、 6、 8、 10、11与样品 2、 7、9归为一类;当距离标尺在25时,样品12才与样品 1、 2、 3、 4、 5、 6、 7、 8、 9、 10、11即全部聚为一类。 2. 5.3色谱峰的重叠率以罗布麻叶9号样品图谱为基准,按以下公式计算重叠率=,待测样品与标准样品共有的峰数×2/(待测样品与标准样品峰数和),×100%。分别求得另外11种样品色谱峰的重叠率依次为:6 4.0%、82.5%、72.7%、79.5%、7 8.9%、7 5.7%、7 6.3%、6 7.6%、6 4.7%、7 4.6%、92%。 2. 5.4相似度评价将测试数据导入excel表格,采用中位数夹角余弦法计算相似度,进行色谱峰差异性评价和整体相似性评价。各相似度 值如下:s1 0.95 9、s2 0.92 5、s3 0.97 7、s4 0.98 6、s5 0.99 1、s6 0.95 7、s7 0.97 9、s8 0.96 3、s9 0.97 3、s10 0.98 7、s11 0.93 2、s12 0.888。结果显示，罗布麻叶样品指纹图谱相似度较好,均在0.88以上。 3讨论 挥发性成分顶空条件的优化:药材粉碎粒度的考察结果表明,60目药材粉末所得色谱峰峰数比40目、30目药材峰数明显减少,40目所得色谱峰数峰高较30目高,故粉碎粒度选择40目药材粉末。体积装样量的考察测定结果表明, 1.5 g药材所测出的色谱峰数较少,2 g药材峰面积较小,3 g药材测出的色谱峰较多,峰面积较大,故体积装样量选择3 g。 顶空加热温度的考察测定结果表明,90?和100?加热温度下检出色谱峰的峰数明显减少,110?和120?加热检出的色谱峰中后者峰高较高,故样品加热温度选择120?。顶空加热时间的考察测定结果表明,4个不同加热时间下的峰数相差不多,加热30 min的峰高较高,故样品加热平衡时间选择30 min。 不同产地罗布麻叶中均含有2 戊烯 1 醇、未鉴定、1,2,5,5 四甲基1,3 环戊二烯、3,5 二甲基苯酚、安息香醛、2 戊基呋喃、顺式氧化芳樟醇、2,6 二甲基环己醇、薄荷酮、藏红花醛、β 环柠檬醛、胡薄荷酮、大马酮、5,6,7,7a 四氢 4,4,7a 三甲基(4h) 苯呋喃酮等14种主要成分,占挥发性总成分的60%左右,故以此14个特征性指标成分作为共有特征峰构建gc ms指纹图谱。 应用模糊聚类法分析比较,能揭示挥发性成分中特征性成分质量分数的配比关系,更能全面、综合、准确地反映不同产地药材gc ms指纹图谱的关系,本实验初步建立了罗布麻叶挥发 性成分gc ms指纹图谱分析方法,而且方法准确可靠，重复性好，为罗布麻药材的质量评价和gap实施提供了科学依据。 【 参考文献 】 ,1,国家药典委员会.中华人民共和国药典(一部),m,.北京:化学工业出版社,201X:14 7. ,2,张振杰. 药用罗布麻(红麻)叶的化学成分研究,j,.中草药通讯, 1974 (1): 2 1. ,3,姚雷.吐露芬芳却为谁,j,,生命世界,201X(12):6 4. ,4,刘森,郝保华,李伟泽,等.水凝胶型荆芥油泡沫气雾剂的制备及性质研究,j,.中草药,201X,39 (2):21 8. ,5,邓颖,郭志刚,曾兆麟,等. 藏红花的药理研究进展,j,.中国中药杂志,201X,27(8):56 5. ,6,范维刚,解成喜,李锋,等.罗布麻叶挥发油的气相色谱—质谱分析,j,.质谱学报,201X,26 (2):9 3.