体外肿瘤细胞培养及药敏试验对食管癌术后化疗的意义

体外肿瘤细胞培养及药敏试验对食管癌术后化疗的意义 12 羽 平张智 (重庆市肿瘤研究所 胸外科 重庆400030) 【摘要】目的:通过对食管癌术后体外肿瘤细胞培养以及对不同药物及化疗的敏感性 进行比较，寻找各自有效的、合理的化疗方案，指导食管癌的术后化疗。为个体化治疗提 供理论依据。方法:采用TECIA法对94例食管癌组织标本进行体外培养，并用8种常见 化疗药物进行药物敏感性试验，了解其对肿瘤的抑制率，并将结果进行比较。结果:试验 药物对食管鳞癌的抑制率各不相同，以紫杉醇类最高，阿霉素最低;单药与联合化疗方案 的抑制率比较有显著差异，联合药敏感性高于单药。结论:食管癌的术后化疗，应根据每 个食管鳞癌患者肿瘤的药敏结果，尽量选择敏感药物及联合用药的化疗方案。 【关键词】食管癌;TECIA;肿瘤药敏试验 Study on the chemosensitivity test with TECIA of esophageal carcinoma in vitro and the choice of postoperative chemotherapy YU ping, ZHANG zhi Chongqing cancer hospital, chongqing 400030, China 【Abstract】 Objective: To study the effect of chemosensitivity test in vitro for esophageal carcinoma(Methods: The sensitivity of 94 esophageal carcinoma samples for 6 (reject another 2) commonly-used Antonio plastics was determined by TECIA method. Results: Some cages were low sensitive to classical chemotherapeutic regimen, or drug resistant. Conclusion: The in vitro chemosensitivity tests have important value to determine the postoperative chemotherapy. 【Key words】esophageal carcinoma; TECIA; sensitivity of drug 食管癌我国常见的消化系统恶性肿瘤。近年来发病率呈上升趋势。虽然采取手术、放 疗、化疗等综合治疗，但疗效不理想。5年总生存率10%—20%。原因主要为肿瘤控制失败、 转移及复发。寻找有效的治疗方案，已成为医务工作者共同的目标。化疗作为一个重要的 环节，近年来取得了明显的进展。对辅助化疗和新辅助化疗价值的认识已得到充分的肯定。 如何选择有效药物，提高化疗效果，寻找用药规律，一直是肿瘤化疗非常关注的问题。我 们采用TECIA法对94例食管癌患者手术后进行肿瘤组织培养以及药敏试验。并进行相互 比较。以指导术后化疗。 1 材料与方法 1.1 标本来源 2006年6月至2009年8月。在我院胸外科行食管癌切除术94例患者的新鲜肿瘤组织标本。术后均经病理证实为鳞癌。其中食管上段癌11例;食管中段癌54例;食管下段癌29例;患者年龄20岁—73岁。男性82例;女性12例。 1.2 试剂 我们选择常用的8种药物。见表1. 表1 化疗药物品种及浓度 药物 浓度(μg/ml) 顺铂(DDP) 2.5 5氟脲嘧啶(5-Fu) 60.0 阿霉素(ADM) 2.3 长春地辛(VDS) 0.5 紫杉醇(PTX) 20 奈达铂(NED) 0.5 多西紫杉醇(TAX) 15.0 健泽(GEM) 30.0 联合药是待操作时用已配好的所要求的各单药等量混合。3种药物联合方案分别为DF方案(DDP+5-Fu)，TP方案(PTX+ NED)，TN方案(TAX +NED)。 1.3 方法 用体外肿瘤组织块培养—终点染色—计算机图像分析法(TECIA)大致流程为: 3处理收到的新鲜肿瘤组织标本(灭菌)——组织切块(0.5mm~1mm3)——吸取混有组织块的培养基滴加在培养孔内滤纸中央，每孔4~5块组织——放入培养箱(24h)——用图像分析仪测定初始面积——分组加入化疗药物，再培养96h——取出24孔板，每孔滴加25ulMTT液——继续培养4h——将每孔中滤纸连同组织小心取出，放入培养盖板的相应位置——图像分析仪测定终点面积——计算机软件分析实验结果，计算抑制率。 计算公式:S=,S-S,/SX,S/S,X100% 始终始终始i00 S——药物肿瘤抑制率 i S——无加药空白对照组始面积 始0 S——无加药空白对照组终面积 终0 S——加药试验组始面积 始 S——加药试验组终面积 终 结果判断:抑制率大于50%为高度敏感;30%,50%为中度敏感;小于30%为耐药。 总药敏感率(%)=(敏感标本/该组总标本)X100% 统计学方法采用SPSS 13(0进行统计分析，计量资料Student t检验分析单药和联合药之间 2的差异，单因素方差分析均数之间的差异及两两比较;计数资料用X检验。 2 结果 94例食管癌标本全部试验成功，我们根据情况每例标本选择4-6种化疗药物。个别药物例数太少，失去统计学意义(剔除VDS、 GEM)。有待于以后补充、完善。见表2. 表2 94例食管癌体外肿瘤细胞培养及药敏试验结果 DDP 5-Fu ADM VDS PTX NED TAX GEM <30% 8 7 15 0 0 3 0 1 30%,50% 81 78 57 2 74 73 6 0 >50% 2 8 1 0 19 13 3 1 2. 1 Student t检验 经Student t检验，单药与联合化疗方案的抑制率比较有显著差异，P=0.036，联合药的平均抑制率为(56.4?16.0), ，单药的平均抑制率为(36.6?13.3), ，联合药敏感性高于单药。 2. 2 方差分析检验 ? 以上6种药物及其组成的化疗方案抑制率个体差异显著，P<0.01，平均抑制率由高到低的顺序依次为TAX +NED>PTX+ NED>DDP+5-Fu >TAX > NED > PTX >5Fu>DDP>ADM。 ? 单药DDP(39.6?13.4),与NED(43.8?16.9),药物抑制率比较无显著差异，P=0.715 ? 单药PTX(41.8?11.2),与TAX(45.4?13.8),药物抑制率比较无显著差异，P=0.831 ? 3组联合化疗药物的抑制率两两比较均无差别，(DDP+5-Fu)抑制率为(51.6?13.3),，(PTX+ NED)抑制率为(57.3?14.2),，(TAX +NED)抑制率为(59.1?17.3),均P>0.05 2. 3 该组食管癌标本对化疗药物的敏感性结果 见表3. 表3 94例食管癌对化疗药物敏感性的比较 (%/n) 药物 高度敏感 敏感 耐药 总敏 DDP 2.2/2 89.01/81 8.79/8 91.21/91 5-Fu 8.61/8 83.87/78 7.53/7 92.47/93 ADM 1.37/1 78.08/57 20.55/15 79.45/73 VDS 0.00/0 100/2 0.00/0 100.00/2 PTX 20.43/19 79.57/74 0.00/0 100.00/93 NED 14.61/13 82.02/73 3.37/3 96.63/89 TAX 33.33/3 66.67/6 0.00/0 100.00/9 GEM 50.00/1 0.00/0 50.00/1 50.00/2 22经?检验所得6种化疗药物及其组成的3种联合化疗方案的敏感性不同(?=89.43， 2P=0.000)，其中单药组间比较，敏感性有差别(?=35.78，P=0.000);联合药组间比较，敏 2感性亦有差别(?=27.60，P=0.001)。 3.讨论 在食管癌的综合治疗治疗中，化疗是一个重要环节。由于抗肿瘤药物的不断增加，在传统化疗方案的基础上引入新化疗药物，形成一些新方案。对于这些方案及药物的疗效一直颇受关注。本组病例用94例食管癌患者手术后的新鲜肿瘤组织标本，进行肿瘤组织培养以及药敏试验。以了解常用化疗药物对每个具体肿瘤的敏感性。为术后化疗药物的选择提供理论依据。实现真正的个体化治疗。 肿瘤是一个多形态、异质性、多分化程度的细胞群体。对各种化疗药物的敏感性存在明显的个体差异。化疗疗效总体上不尽人意。临床常常发现，相同的病理类型，相同的化疗方案，甚至同一病人在不同的发病阶段，可以出现完全不同的疗效。目前还没有某一种 (、)12或几种化疗药物的联合应用，能对某一种肿瘤100%有效。因此，建立肿瘤体外细胞培养，并通过相对可靠药敏试验方法，对不同的病人准确筛选敏感的化疗药物，并确定其剂量，真正实现临床用药的个体化，以提高化疗的靶向性及疗效，减少不良反应，降低细胞耐药性，成为目前治疗肿瘤迫切需要解决的问题。近30年来，四氮唑蓝(MTT)法测定化 ()3——6疗药物的体外敏感性被广泛应用。有大量该研究的报道。这些报道观察了近期疗效及远期生存率，并与经验用药进行了对比。成为指导临床医生制定合理的化疗方案、提高 ()7——8疗效的依据。.1991年，美国国家癌症研究所(NCI)将MTT法纳入抗癌药物筛选程(9)序。 化疗药物在体内的作用和代谢是一个复杂的过程。很多因素影响化疗的效果。尽管体外肿瘤组织培养以及药敏试验有一定的意义，但也有致命弱点。它不能反映原发肿瘤的生长环境。培养成功率低。不能显示药物对正常组织的作用及毒性。没有宿主的药物代谢功 ()10—11能等。由于化疗药物在体内通过肝、肾器官对药物的修饰、排泄作用，可使药效增强或减弱。而在体外药敏试验中，药物直接作用于肿瘤细胞，这些修饰、排泄作用均无法 ()12体现。另外，肿瘤细胞的多药耐药(multidrug resistance,MDR)也是化疗失败的主要原 【】13因之一。MDR是一个多因素参与的复杂过程,可以直接影响化疗疗效。体外肿瘤组织培养以及药敏试验虽然能反映化疗药物对肿瘤细胞的敏感性，但不一定与体内的效果完全一致。但是，该试验，任然可以有效避免化疗时盲目性，对提高化疗效果具有积极的意义。 比较本组试验结果:提示6种单药对食管鳞癌的敏感性各不相同，单药以紫杉醇类最高，阿霉素最低;所有单药组间比较，敏感性不同;联合用药方案TAX +NED敏感性最高，DDP+5-Fu敏感性最低，所有联合用药组间比较，敏感性亦不同。其总体趋势为联合化疗用药的敏感性高于单药化疗的敏感性，由此亦证实了，临床化疗应尽量选择联合化疗的治疗方案。 根据Student t 检验DDP与NED比较无显著差异;PTX与TAX比较无显著差异;紫衫醇类与氟脲密啶和铂类药物组成的化疗方案对肿瘤的抑制率比较无显著差异。与目前采用的化疗方案一致。因此，我们认为在食管鳞癌的化疗中，方案5-Fu+DDP;5-Fu+NED; 2PTX+DDP;PTX+NED;TAX+DDP;TAX+NED;均有较好的疗效。根据?检验，肿瘤细胞对各单药、各联合药组间的敏感性有明显差别。也就是说，肿瘤细胞在对一种药物或方案不敏感的同时，可能对另一种药物或方案敏感。可以根据药敏试验选择抑制率相对高的药物。只是由于各药物副作用不同，我们倾向于PTX+NED;TAX+NED方案。当然，在具体治疗中还应该按照个体化治疗的原则。根据疾病分期、医疗条件、患者的体质、对药物的耐受性、经济条件、以及患者愿望等灵活应用。 小结，本研究食管鳞癌肿瘤细胞体外药敏试验所得结果与临床化疗药物治疗也是基本吻合的。化疗药物的敏感性与个体差异性、不同化疗药物以及不同化疗药物联合组合方案的实施等密切相关，因此，本研究结果提示:对食管鳞癌进行化疗时应尽量选择联合用药的化疗方案，可以到达更好的杀灭和抑制肿瘤的效果。根据每个食管鳞癌患者肿瘤的药敏 结果，研究者也将其信息及时反馈于临床，临床医师可以在患者化疗前根据相关药物敏感结果剔除耐药或不敏感的药物、选择相对敏感的药物(或联合用药方案)，真正做到了“个体化”的治疗方案，亦为“二线”、“三线”化疗方案提供了有力的理论依据。二十一世纪初的化疗模式已经从经验性化疗、方案性化疗发展为在循证医学指导下最优化的“个体化”化疗，化疗前的自体肿瘤细胞体外药敏试验不仅可以为选择敏感的化疗方案提供依据，指导临床用药，还可以发现耐药病例，为肿瘤的基因治疗寻找到可能的突破口。 由于我们这项试验的时间短，经验不多，有许多方面需要完善。如增加病例;增加化疗药种类;尽量做到化疗前体外肿瘤组织培养以及药敏试验;药敏试验前增加耐药基因检测、真正将耐药基因检测与药敏试验结合起来。相信化疗疗效能进一步提高。 【参考文献】 [1] 张银霞,于兰,吕同德,等. 肿瘤药敏试验方法与临床应用[ J ]. 医学综述, 2003, 9 ( 1) : 34 - 35. 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[13] Nishio K，Nakamura T(Conquering drug resistance in lung cancer[J](Nippon Rinsho，2000， 58(1):1 011— 1 017( 1作者简介:羽 平(1956—)男， 江苏无锡人， 副主任医师，从事胸外科临床工作 2通讯作者简介:张 智(1972—)男，重庆市人，主治医师，从事胸外科临床工作