HPLC测定荆菊感冒片中牛蒡苷的含量

檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶檶 中是否还含有其他苦参类生物碱待进一步研究。 ［参考文献］ ［1］ 吴征镒，周太炎，肖培根 ． 新华本草纲要［M］． 上海: 科 学技术出版社，1988:75． ［2］ 中国药典 ．一部［S］． 2010:186，25． ［3］ 陈猛 ． 苦木生物碱活性成分的研究［D］． 烟台: 烟台大 学，2007:1． ［4］ 陈怀侠，韩凤梅，杜鹏，等 ． 苦参生物碱电喷雾质谱分 析［J］．分析化学研究简报，2006，32(2) :205． ［5］ 国家医药管理局中草药情报中心站 ． 植物药有效成分 手册［M］．北京:人民卫生出版社，1986:700． ［6］ Akira Ueno A，Kunio Morinaga，Seigo Fukushima，et al． Stuies on the lupin alkaloids． Ⅶ ． isolation and structure of (-)-△7 -dehydrosophoramine［J］． Chem Pharm Bull， 1978，26(6) :1832． ［责任编辑 蔡仲德］ ［收稿日期］ 20110324(003) ［通讯作者］ * 马仁强，主管药师，从事新药开发工作，Tel:020-89883484，E-mail:pony213@ 163． com HPLC测定荆菊感冒片中牛蒡苷的含量 廖晓鸣1，郑丹2，宋志娟2，马仁强2* (1. 深圳市康哲药业有限公司，广东 深圳 518057; 2. 广州博济医药生物技术有限公司，广州 510620) ［摘要］ 目的:建立荆菊感冒片中牛蒡苷的含量测定方法。方法:采用高效液相色谱法，以 VARIAN Microsorb 100-5 C18 柱为分析柱，甲醇-水(40∶ 60) 为流动相，流速1. 0 mL·min － 1，检测波长为 280 nm。结果:牛蒡苷在 0. 042 8 ～ 0. 856 g·L － 1线性 关系良好，r = 0. 999 9;平均加样回收率为100. 2%，RSD 1. 45%(n = 6)。结论:该方法简便、快速、准确，可用于测定荆菊感冒 片中牛蒡苷的含量。 ［关键词］ 荆菊感冒片;牛蒡苷;高效液相色谱法 ［中图分类号］ R284． 1 ［文献标识码］ A ［文章编号］ 1005-9903(2012)04-0113-003 Determination of Arctiin in Jingju Ganmao Tablets by HPLC LIAO Xiao-ming1，ZHENG Dan2，SONG Zhi-juan2，MA Ren-qiang2* (1. Shenzhen Kangzhe Pharmaceutical Co．，Ltd，Shenzhen 518057，China; 2. Guangzhou Boji Medicinal and Biological Technology Co． Ltd，Guangzhou 510620，China) ［Abstract］ Objective:To establish a HPLC method to determine arctiin in Jingju Ganmao tablets． Method: The determination was conducted by HPLC using a VARIAN Microsorb 100-5 C18 column． The mobile phase consisted of CH3OH∶ H2O (40 ∶ 60)with flow rate of 1. 0 mL·min － 1 and the detection wavelength was 280 nm． Result:This method had good resolution and good linear relationship between 0. 042 8-0. 856 g·L － 1 ． The average recovery of arctiin was 100. 2% and RSD was 1. 45% (n = 6)． Conclusion:This method is simple，quick and accurate． It can be used for quantity control of Jingju Ganmao tablets． ［Key words］ Jingju Ganmao tablet;arctiin;HPLC 荆菊感冒片由荆芥、金银花、牛蒡子、淡豆豉、连 翘、淡竹叶、桑叶、菊花等 13 味中药组成，具有疏风 清热，发解肌的作用，用于伤风感冒，身热恶寒，头 痛鼻塞。荆菊感冒片原收载于部颁标准，未有 含量测定项，不利于产品的质量控制。牛蒡子为荆 菊感冒片中主要药物，据《中国药典》2010 年版一 ·311· 第 18 卷第 4 期 2012 年 2 月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol． 18，No． 4 Feb．，2012 部［1］记载牛蒡子具有疏散风热、宣肺透疹、解毒利 咽的作用，牛蒡苷为牛蒡子的特征性有效成分。为 控制该制剂的质量，本文采用高效液相色谱法对荆 菊感冒片中牛蒡苷进行了含量测定。 1 仪器与试药 1. 1 仪器 Dionex P680 高效液相色谱仪，ASI-100 自动进样器，UVD340U 检测器，Sartorius BS124S 型 分析天平，HU3120 型超声仪。 1. 2 试药 牛蒡苷对照品( 中国药品生物制品检 定所，批号 110819-200404)、甲醇( 江苏汉邦科技有 限公司，色谱纯)、甲醇( 广州化学试剂厂，分析纯)。 荆菊感冒片牛蒡子阴性制剂( 汕头市麒麟药业 有限公司)、荆菊感冒片( 汕头市麒麟药业有限公 司，批号 050321，050323，050329，050330，060401， 060402，060403，061001，061002，061003)。 2 方法与结果 2. 1 色谱条件 色谱柱 VARIAN Microsorb 100-5 C18(4. 6 mm × 250 mm，5 μm) ，流动相甲醇-水(40∶ 60) ，流速1. 0 mL·min － 1，检测波长 280 nm，理论塔 板数按牛蒡苷计算不低于 2 000。 2. 2 溶液制备 对照品溶液的制备 精密称取牛 蒡苷对照品 10. 7 mg，置 10 mL 量瓶中，加甲醇使溶 解，并稀释至刻度，摇匀，作为对照品溶液。 供试品溶液和阴性对照溶液的制备 取本品 20 片，除去糖衣，精密称定，研细，取约 1. 0 g，精密 称定，置锥形瓶中，精密加入甲醇 30 mL，密塞，称定 质量，超声 30 min( 功率200 W，频率 40 kHz) ，取 出，放冷至室温，再称定质量，用甲醇补足减失的质 量，摇匀，滤过，取续滤液，作为供试品溶液。另按处 方量制备不含牛蒡子药材的阴性样品，按供试品溶 液的制备方法制备阴性对照溶液。 2. 3 专属性试验 分别精密量取对照品溶液、供试 品溶液、阴性对照溶液各 20 μL，注入液相色谱仪， 按 2. 1 色谱条件进行测定，结果表明牛蒡苷与样品 中的其他成分均能完全分离，处方中其他药无干扰， 见图 1。 2. 4 线性关系 精密吸取 2. 2 项下的对照品溶液 0. 2，1. 0，2. 0，3. 0，4. 0 mL 置 5 mL 量瓶中，加甲醇 稀释至刻度，摇匀，配成不同浓度对照品溶液。精密 吸取上述不同浓度牛蒡苷对照品溶液各 20 μL，注 入液相色谱仪，以峰面积为纵坐标(Y) ，牛蒡苷浓度 (g·L － 1) 为横坐标(X) 进行线性回归，得回归方程 Y = 82. 399X － 0. 013 6(r = 0. 999 9)。结果表明牛 蒡苷在 0. 042 8 ～ 0. 856 g·L － 1呈良好的线性关系。 A. 阴性对照品;B. 荆菊感冒片;C. 对照品;1. 牛蒡苷 图 1 荆菊感冒片的 HPLC 2. 5 精密度试验 精密吸取同一质量浓度的对照 品溶液，连续重复进样 6 次，测得 RSD 0. 54%(n = 6) ，表明仪器精密度良好。 2. 6 稳定性试验 取同一对照品溶液和供试品溶 液，分别于 0，2，4，8，12，24 h 进行测定，计算峰面积 的相对标准偏差，结果对照品溶液 RSD 2. 73%，供 试品溶液 RSD 2. 09%，表明 24 h 内对照品溶液和供 试品溶液均稳定性较好。 2. 7 重复性试验 取同批样品( 批号061001)5 份，按供试品溶液的制备方法制备，依法进样测定， 结果测得牛蒡苷的平均含量为 8. 332 1 mg·g － 1， RSD 1. 91%。 2. 8 加样回收率试验 称取已知含量的荆菊感冒 片( 批号061001) 粉末共6 份，每份约 0. 25 g，精密 称定，置 50 mL 量瓶中，分别精密加入2. 23 g·L － 1牛 蒡苷对照品溶液 1. 0 mL，按供试品溶液的制备方法 制备，照上述色谱条件，每次进样 20 μL，测定牛蒡 苷含量，计算回收率，结果见表 1。 表 1 牛蒡苷加样回收率试验 No． 称样量 / g 样品中含量 /mg 测得量 /mg 回收率 /% 平均值 /% RSD /% 1 0. 241 8 2. 014 7 4. 253 7 100. 4 2 0. 257 1 2. 142 2 4. 412 8 101. 8 3 0. 235 6 1. 963 0 4. 138 9 97. 6 100. 2 1. 454 0. 253 4 2. 111 4 4. 337 5 99. 8 5 0. 258 7 2. 155 5 4. 390 4 100. 2 6 0. 240 5 2. 003 9 4. 258 4 101. 1 ·411· 第 18 卷第 4 期 2012 年 2 月 中国实验方剂学杂志 Chinese Journal of Experimental Traditional Medical Formulae Vol． 18，No． 4 Feb．，2012 表 2 荆菊感冒片中牛蒡苷含量测定 批号 称样量 / g 含量 /mg·g － 1 平均含量 /mg·g － 1 含量 /mg /片 总平均含量 /mg /片 050321 0． 491 6 8． 959 6 0． 493 3 8． 877 0 8． 918 3 2． 85 050323 0． 497 1 8． 963 6 0． 494 9 8． 756 8 8． 860 2 2． 84 050329 0． 490 3 8． 879 6 0． 501 7 8． 811 8 8． 813 8 2． 82 050330 0． 503 9 8． 089 4 0． 498 2 7． 726 0 7． 907 7 2． 53 060401 0． 490 2 8． 131 0 0． 509 3 8． 537 7 8． 334 4 2． 67 060402 0． 501 1 8． 454 8 0． 500 7 8． 366 4 8． 410 6 2． 69 2． 73 060403 0． 500 2 8． 038 3 0． 500 9 8． 269 2 8． 153 8 2． 61 061001 0． 507 7 8． 558 0 0． 508 3 8． 437 4 8． 497 7 2． 72 061002 0． 503 5 8． 991 9 0． 506 4 8． 771 0 8． 881 4 2． 84 061002 0． 503 5 8． 991 9 0． 506 4 8． 771 0 8． 881 4 2． 84 061003 0． 501 4 8． 534 2 0． 501 1 8． 756 9 8． 645 5 2． 77 注:本品包衣前素片重0. 32 g。 2. 9 样品测定 照供试品溶液的制备方法操作，精 密吸取供试品 20 μL，按上述色谱条件测定，分别测 定 10 批样品，测定结果见表 2。 3 讨论 《中国药典》2010 年版一部和文献［2］报道测定 牛蒡苷的流动相分别为甲醇-水系统和乙腈-水系 统，本研究发现调整甲醇和水比例为 40 ∶ 60 供试品 中牛蒡苷的峰形及分离度较好，保留时间较适中，故 选择甲醇-水(40∶ 60) 为流动相。比较了超声法和回 流法提取效果，结果表明超声法提取含量高于回流 法，且方便，故选用超声提取。按超声法提取，分别 超声处理 15，30，45 min，测定牛蒡苷的含量，结果表 明超声提取 30 min 的效果最佳。通过实验研究，本 文建立了荆菊感冒片中牛蒡苷含量的 HPLC 测定方 法，该方法简便、快速、准确，重复性好，可用于该药 品的质量控制。 ［参考文献］ ［1］ 中国药典 ．一部［S］． 2010:66． ［2］ 王兆华，张大军，赵玉兰，等 ． 高效液相色谱法测定蒡 勃乳蛾消颗粒中牛蒡苷的含量［J］． 中国实验方剂学 杂志，2004，10(1) :10. ［责任编辑 蔡仲德］ ·511· 廖晓鸣，等:HPLC 测定荆菊感冒片中牛蒡苷的含量