高效液相色谱法测定咳特灵分散片中马来酸氯苯那敏的含量.doc

高效液相色谱法测定咳特灵分散片中马来酸氯苯那敏的含量.doc 高效液相色谱法测定咳特灵分散片中马来 酸氯苯那敏的含量 【摘要】 目的建立咳特灵分散片中马来酸氯苯那敏的含量测定方 法。方法采用HPLC法测定马来酸氯苯那敏的含量，色谱柱为 Nucleodur C18 Gravity(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 水溶液(含0.3%冰乙酸、0.1%三乙胺)(27?73);流速1.0 ml/min;检测波长262 nm。结果马来酸氯苯那敏在0.0302,0.906μg 范围内呈良好线性关系，r=0.9999;平均回收率为99.5%， RSD=1.5%。结论该方法可准确地进行咳特灵分散片定量检测，可用 于该制剂的质量控制。 【关键词】 咳特灵分散片 马来酸氯苯那敏 高效液相色谱法 Abstract:ObjectiveTo establish a method for the determination of chlorphenamine maleate in Keteling Dispersible Tablet by HPLC. MethodsHPLC was performed on Nucleodur C18 Gravity(250 mm×4.6 mm，5μm).The mobile phase was acetonitril-water (0.3% acetic acid, 0.1%triethylamine) (27?73). The detection wavelength was 262 nm and flow rate was 1.0 ml/min.ResultsChlorphenamine maleate showed a good linearity in the range of 0.0302,0.906μg，r=0.9999.The average recovery was 99.5%，and RSD was 1.5%.ConclusionThis method is effective and can be used for the quality control of chlorphenamine maleate in Keteling Dispersible Tablet. Key words:Keteling Dispersible Tablet; Chlorphenamine maleate; HPLC 咳特灵分散片是由小叶榕干浸膏和马来酸氯苯那敏组成,具有镇 咳、祛痰、平喘、消炎的作用。用于咳喘及慢性支气管炎的治疗。 为了更好地控制产品质量, 我们对其含量测定方法进行了改进。现 报道如下。 1 仪器与试药 Agilent 1100高效液相色谱仪， DAD检测器;台式超声清洗器 (SK7200LH，上海科导超声仪器有限公司)。乙腈为色谱纯，水为 超纯水，其它试剂均为纯。马来酸氯苯那敏对照品购自中国药 品生物制品检定所。 2 方法与结果 2.1 色谱条件色谱柱为Nucleodur C18 Gravity柱(250 mm×4.6 mm，5 μm);流动相为乙腈 水溶液(含0.3%冰乙酸、0.1%三乙 胺)(27?73);检测波长262 nm;流速1.0 ml/min; 进样量10 μl 。理论板数按马来酸氯苯那敏峰计应不得低于8 000。 2.2 对照品溶液的制备 精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量，加盐酸溶液(取稀盐酸1 ml，加水稀释至100 ml)溶解制成每毫升含30 μg的溶液，作为对照品溶液。 2.3 供试品溶液的制备 取本品，除去包衣，研细，取0.3 g，精密称定，置25 ml量瓶中，加盐酸溶液振摇使溶解，加盐酸溶液至刻度，滤过，取续滤液，即得。 2.4 线性关系考察 精密称取马来酸氯苯那敏对照品适量，用盐酸溶液溶解，制成每毫升含0.15 mg的对照品溶液。分别精密吸取上述对照品溶液各1，2，5，10，15，20，30 ml置100 ml量瓶中，加盐酸溶液释至刻度，得系列对照品溶液。吸取系列对照品溶液各10 μl，按上述色谱条件测定峰面积，以峰面积积分值A为纵坐标(Y)，进样量(μg)为横坐标(X),进行线性回归，得回归方程:Y=0.496+674.42X，r=0.999 9，结果表明马来酸氯苯那敏在0.030 2,0.906 μg范围内与峰面积积分值呈良好线性关系。 2.5 精密度实验精密吸取同一对照品溶液(每毫升含马来酸氯苯那敏30 μg)10 μl，重复进样6次，测得峰面积平均值为203.38，RSD为1.02%(n=6)。 2.6 稳定性实验取同一对照品溶液,按上述色谱条件在0，3，6，12，18，24 h测定，进样量为10 μl，测得平均峰面积为203.6，RSD为1.00%，表明马来酸氯苯那敏在24 h内稳定。2.7 重现性实验取同批样品6份(批号20040915)，按拟定的含量测定方法，重复平行测定，马来酸氯苯那敏平均含量为0.637mg/片，RSD=1.0%(n=6)。 2.8 加样回收率实验称取已知含量的样品(批号20040915)约0.15 g，精密称定后加入0.8倍，1倍，1.2倍量的马来酸氯苯那敏对照品，按供试品溶液制备方法操作，各平行操作3份，吸取加样供试品溶液10 μl，注入高效液相色谱仪，按上述方法测定马来酸氯苯那敏含量，计算回收率。结果平均回收率为99.5%，RSD=1.5%(n=9)。结果见表1。表1 马来酸氯苯那敏回收率实验结果(略) 2.9 样品测定取样品3批，按“2.3供试品溶液的制备”方法制备，分别精密吸取对照品溶液、供试品溶液各10μl，注入高效液相色谱仪，记录色谱图，按外标法计算含量。结果见表2。表2 样品含量测定结果(略) 3 讨论 3.1 提取方法的选择 根据马来酸氯苯那敏易溶于水，乙醇，三氯甲烷的特点,2,，分别采用盐酸溶液(取稀盐酸1 ml，加水稀释至100 ml)、 流动相,乙腈 水溶液(含0.3%冰乙酸、0.1%三乙胺)(27?73),、95%乙醇、50%乙醇为提取溶媒进行筛选，经试验，不同提取溶媒测定结果基本一致，本研究参考药典方法，采用盐酸溶液为提取溶媒。 3.2 流动相的选择 文献,4,采用乙腈 3%冰乙酸 三乙胺(20?80?0.08)，乙酸调pH 3.0为流动相, 文献,5,采用乙腈 0.5%十二烷基硫酸钠溶液 磷酸(60?40?0.1)为流动相,经试验采用乙腈 水溶液(含0.3%冰乙酸、0.1%三乙胺)(27?73)作为流动相，在该色谱条件下，马来酸氯苯那敏峰形及分离度较好，且阴性对照无干扰。 3.3 检测波长的选择文献,4, 是采用262 nm作为检测波长，文献,5,是采用210 nm作为检测波长，《中国药典》中马来酸氯苯那敏片的吸收系数法采用264 nm作为测定波长。经DAD检测器分析，马来酸氯苯那敏有多个最大吸收波长，262 nm附近波长作为检测波长较适宜。经262，264 nm比较试验，262 nm处的峰面积稍大，故选择262 nm作为检测波长。 【