氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的体外透皮吸收实验研究

氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的体外透皮吸收实验研究 氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的体 外透皮吸收实验研究 第28卷第5期 2010年'10月 石河子大学(自然科学版) JournalofShiheziUniversity(NaturalScience) Vo1.28No.5 Oct.2010 文章编号:1007—7383(2010)05—0596—04 氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷 的体外透皮吸收实验研究 王园姬,赵海娇.,李慧玲,骆从艳,陈文 (石河子大学药学院/新疆特种植物药资源重点实验室,石河子832000) 摘要:为了考察氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷透皮吸收性能的影响,并寻找最佳的促透剂浓度,本文采用 Franz扩散池法,进行大鼠皮肤体外透皮吸收实验研究.以接收液中苦杏仁苷含量为检测指标,用HPIC测定不同 时间点透过的苦杏仁苷的浓度.实验结果明,当接收液为生理盐水时,氮酮的最佳促透浓度为4,透皮速率为 15.74ug/(cm?h);当接收液为甲醇一水(30:70)时,氮酮的最佳促透浓度为3,透皮速率为11.26g/(cm?h). 证明氮酮对复方斯亚旦生发酊中苦杏仁苷的透皮吸收具有良好的促进作用. 关键词:复方斯亚旦生发酊;苦杏仁苷;透皮吸收;氮酮 中圈分类号:R284.2文献标识码:A PromotionofAmygdalosideTransdermalAbsorptionby AzoneinCompoundSiyadanTincture WANGYuanji,ZHAOHaijiao,IIHuffing,LUOCongyan.,CHENWen' (CollegeofPharmacy,ShiheziUniversity/ Key1.aboratoryofXinjiangPhytomedicineResources,Shihezi832000,China) Abstract:InordertoinvestigatethepromotioneffectofAzoneasanadditiveinCompoundSiyadanTinc— ture,andfindtheoptimumconcentrationtopromotethetransdermalabsorption,weusedFranzdiffusion celltostudythepercutaneousabsorptionwithexcisedratskin.TheamountofAmygdalosideinthere— ceivedsolutionwasdeterminedbyHPICatdifferenttimepoints.TheoptimumconcentrationofAzonewas 49/6whenthereceptionsolutionwasSodiumChloride,andthepermeationratewas15.74g/(em?h);the optimumconcentrationwas3whenthereceptionsolutionwasMe()H— H2O(30:70),andthepermeation ratewas11.26肚 g/(cm?h).I'heconclusionwasthatAzonecouldeffectivelypromotethetransdermalab— sorptionrateofAmygdalosideinCompoundSiyadanTincture. Keywords:CompoundSiyadanTincture;Amygdaloside;transdermalabsorption;Azone 复方斯亚旦生发酮系维吾尔草药复方,收载于 中华人民共和国卫生部药品标准一维吾尔药分册中, 由瘤果黑种革子,桃,石榴予3昧药材组成,具有 育发,润发,固发之功效,,{j于秃发,秃,脂溢性脱 发以及其它不明原因的脱发?.处方中含有桃仁, 桃仁具有活I缸祛瘀,润肠通便等功效,其主要成分 为苦杏仁苷. 为了考察酊剂的体外透皮吸收情况,本实验以 收稿日期:2010一O1—13 基金项目:到家科技支撑计划项H(2007BAI48B00) 作者简介:王园姬(1984一).女.硕}:生,专业办为药物新制剂L_j新剂型. 通讯作者:陈丈(1967一).男,教授.从事药物新制弃4Lj新剂型研究;e— mail:chenwen2000@126.COrn. 第5期王如,等:氮酮对复方斯生发酊中苦杏仁苷的体外透皮吸收实验研究597 复方斯亚旦生发酊为模型药物,以离体鼠皮为实验 ,采用Franz扩散装置,研究了不同浓度氮酮作 为药物透皮吸收促进剂时,对制剂中苦杏仁苷的透 皮吸收影响].分别考察了在接收液为生理盐水 和甲醇一水(30:70)时苦杏仁苷经皮渗透速率,系统 的比较了氮酮浓度及不同接收液对苦杏仁苷透皮性 能的影响,为本制剂的透皮吸收行为提供一定的参 考. 1材料与方法 1.1材料 1.1.1仪器 Waters高效液相色谱仪;Rya-6a型药物透皮扩 散试验仪(上海黄海药柃仪器有限公司,扩散面积为 2.8em,接收池窬积6.5mI);Sartorius(BP211D)电 子天平(北京赛多利斯仪器系统有限公司). O. O. O. O. 5.001O.OO15.oo mll1 1.1.2试药 苦杏仁苷对照品(中国药品生物制品枪定所.批 号:l10820—200403);氮酮(天津市福晨化学试剂 厂);复方斯亚旦生发酊为自制;水为自制超纯水,甲 醇为色谱纯试剂,其它试剂为分析纯试剂. 1.1.3实验动物 Wistar大鼠,雌雄不限,体重(200?2O)g,由石 河子大学动物实验中心提供. 1.2方法 1.2.1色谱条件与系统适用性 色谱柱:KromasilC18(250irlm×4.6mm, 5"m),流动相:甲醇一水(30:70);检测波长:210nm; 柱温:20?;流速:0.7ml/min;进样体积20I. 理论板数按苦杏仁苷峰计约为2000.对照品及接 收液的色谱图见图1,苦杏仁苷峰的保留时间约为 15min O.2O O.15 0.10 O.O5 O.0o 5.0O10.OO15.O0 mln 扎涛卉竹对照品b:透皮接收液 图1对照晶及样品HPLC Fig1TheHPLOchromatogramofreferencesubstanceandthesample 1.2.2供试品溶液的制备 精密移取复方斯亚口.牛发酊供试品溶液0.5 mI至10mI容量瓶中.水浴挥于乙醇,再用甲醇一 水(30:70)稀释至刻度超声分散10min,摇匀,过 0.22/~m的微孔滤膜,取续滤液,即得. 1.2.3离体鼠皮的制备 处死大鼠,先用手术剪将大鼠背部拟用区域的 毛剪短,再用理发器将毛剃除干净,注意勿损伤鼠 皮.手术剪取下去毛区域的皮肤,剥离皮下组织和 脂肪,用生理盐水将皮肤反复漂洗至下净,备用. 1.2.4体外透皮试验 将皮肤真皮层而向接收室固定在Franz散池 上,分别精密移取0.5mI,含氮酮依次为0%,1%, 2,3及4的复方斯亚目.牛发酊人给药室,接收池 r}1加满,弹盐水或甲醇一水(30:70.(37土0.1)?), 使接收液与鼠皮之间无气泡.开启磁力搅拌器,搅 拌速度为300r/min.分别在2,4,6,8,10,2lh吸 取接收液1.0mI,同时补回同温度生理盐水或甲 醇一水(30:70)1.0mI.取出的接收液立即置于 1.5mI离心管中,12000r/min离心10min.并于进 样前过0.22m的微孔滤膜,弃去初滤液,取续滤 液20I,注入高效液相色谱仪,记录苦杏仁苷的峰 面积,代入标准曲线方程,求出药物浓度,并按公式 (1)计算单位面积累积透皮量Q. n一1 Q一[C×6.5+?×】.0]/2.8,(1) II 其中,C,为第"个取样点测得的药物浓度(g/ mI),C为第i(?"一1)个取样点测得的药物浓度 (1,g/mI),V为扩散池容积(mI),s为有效扩散面 积(CIll.). 利用公式(2)计算累积透过百分率P 598石河子大学(自然科学版)第28卷 p=~--z"x]oo%,(2) 其中,P为累积透过百分率,』\,为接收池中苦 杏仁苷的量(g),S为释放池中苦杏仁苷的量(g). 鼍 i 瑚{ 蜊 商l} 0246810121416182O22 时间,h 以单位面积累积透过量(Q)为纵坐标,时间() 为横坐标,得到经皮渗透曲线如图2. i 嘲 02468l0l214l6182O22 时间,h a:接收液为生理盐水b:接收液为甲醇一水(30:70) 图2复方斯亚旦生发酊经皮渗透曲线 Fig.2ThetransdermalpermeationcurveofCompoundSiyadanTincture 2结果 2.1方法学考察结果 2.1.1线性关系考察 称取苦杏仁苷对照品适量,加甲醇配制成浓度为 0.324mg/mI的对照品溶液.精密吸取此对照品溶 液0.1,0.2,0.3,0.4,0.6,0.8,1.0mI于5mI容量 瓶中,甲醇一水(3O:70)稀释至刻度.分别精密吸取 20td,注入高效液相色谱仪,测定峰面积.以峰面 积y为纵坐标,苦杏仁苷的浓度C(txg/mI)为横坐 标,绘制标准曲线,得到苦杏仁苷高浓度的回归方 程:Y一284l3×C+6708.1(r一0.9990),表明苦杏 仁苷在6.48,64.8,ug/mI范围内线性关系良好. 精密移取11.96t~g/mI苦杏仁苷对照品溶液 0.05,0.1,0.5,1.0,2.0于10mI容量瓶中,甲醇一 水(30:70)稀释至刻度.分别精密吸取2OI,注入 高效液相色谱仪,测定峰面积.以峰面积y为纵坐 标,苦杏仁苷的浓度C(/~g/mI)为横坐标,绘制标准 曲线,得到苦杏仁苷低浓度的回归方程:Y一29398 ×C+674.89(r一0.9999),表明苦杏仁苷在0.0598 , 11.96g/mI范围内线性关系良好. 2.1.2精密度试验 精密吸取同一对照品溶液(浓度为9.72g/ mI)2OI,按上述色谱条件重复进样6次,测定峰面积,RSD为0.97(一6). 2.1.3稳定性试验 取同一供试品溶液在0h,2h,5h,7h,24h分 别测定苦杏仁苷的含量,其峰面积RSD为1.5. 表明供试品溶液在24h内稳定. 2.1.4重复性试验 取同一批样品,精密移取5份,按"1.2.2"项下 处理,分别测定苦杏仁苷的含量,RSD为1.7("一 5). 2.1.5加样回收率试验 分别精密移取同一批号本品6份,各0.1mL 至10mI容量瓶中,加入0.2mI苦杏仁苷对照品 (0.598mg/mI),按"1.2.2"项下方法制备l共试品 溶液,测得苦杏仁苷的平均回收率为99.90,RSD 为3.0. 2.2体外透皮吸收实验结果 表1给出了酊剂在两种接收介质中,不同浓度氮 酮时的实验结果.当接收液为生理盐水,氮酮浓度为 4时,21h的单位面积累积透过量最大(269.8g/ cm2),透皮速率为l5.74t-tg/(cn17?h);当接收液为甲 醇一水(30:70),氮酮浓度为3时,21h的单位面积 累积透过量最大(222.7t,g/cm),透皮速率为 l1.26g/(cm?h),且加入各浓度氮酮后21h单 位面积累积透过量显着高于不加促透剂时(P< 0.05). 透皮速率以生理盐水组明显大于甲醇一水(30: ,21h的单位面积累积透过量也是生理盐水 70)组 组较高.可能是后者更接近于生理环境,更有利于 苦杏仁苷透过皮肤进入接收液中,故确定以生理盐 水为接收液.结合图2可以看出,在两种接收介质 姗珊猢枷拗姗嘞呦啪啪踟???0咖 蝌嚓 姗抛枷啪啪m啪啪踯???o粕 第5期王闲姬,等:氮酮对复方斯亚照生发酊中苦杏仁背的体外透歧吸收实验研究 中,苦杏仁苷从酊剂中释放,透过大鼠皮肤,进入接由表1的实验结果可以得知,酊剂中的苦杏仁 收液的速度在开始阶段较快,随着透皮时间的增加,苷在大鼠皮肤上可维持21h的持续释放,其经皮渗 透过速率减慢.透过程符合Higuchi方程的扩散模式. 表1体外透皮吸收的实验结果 Tab1Theexperimentalresultsoftransdermalpermeation 接收介质促透剂浓度/Higuchi方程相关系数Qz./(/,g/cm)透皮速率/(t~g/(cm?h))P/ 生理盐水0Q=::=6.7014t一17.9560.9949l23.23.38526.95 1Q==lI.31lt一2.82380.9836223.09.63l48.77 2Q一12.332t一35.620.9948230.25.9885O.35 30—13.449t+7.76180.9521265.4】2.8958.O5 4Q=12.72lt+30.6940.9221269.8l5.7459.0l 甲醇一水0Q9.4902t一28.4350.9843169.44.27037.05 (30:70)】Q:9.8886t+13.6220.9684206.810.4l45.23 2Q一9.8548t+7.6330.9711202.210.424{.22 3Q=1】.233t+2.39020.97l6222.7】1.2648.71 4Q:=10.964t一3.27520.9635209.89.02745.89 3讨论 外用制剂中,常用的渗透促进剂有薄荷脑,冰 片,丙二醇,氮酮和萜类物质等.氮酮以使用浓度 低,促透效果好,无毒无刺激性等而广泛使用.氮酮 对疏水性和亲水性成分均有较好的促进作用,适用 于有效成分较多而复杂的中药制剂【.本实验结果显示,氮酮能够明显地促进复方斯亚旦生发酊中苦 杏仁苷的透皮吸收过程,且以其浓度为3,4时 促透效果最好.文献报道中也大多使用低浓度 (0.5,5%)的氮酮作为透皮促进剂进行研究,可 能是考虑到氮酮本身具有的潜在生理毒性作用. 本实验建立了HPIC考察复方斯亚旦生发酊 中苦杏仁苷的透皮释药情况,此方法灵敏度高,分离 效果好,专属性高.实验中考虑到以甲醇一水(30: 70)作为接收液时,与液相方法的流动相系统一致, 实验结果也显示以甲醇一水(30:70)作为接收液 时,色谱图的溶剂峰小,峰形好,且分离度优于以生 理盐水作为接收液时c8]. 临床外用制剂多为一天多次用药,而本实验为 了获得酊剂中苦杏仁苷的最大透过量,将体外透皮 吸收试验延长到21h,但还是未达到释药的平台 期.根据经皮渗透曲线可以看出,试验后期的药物 释放量将逐渐减小,趋于释药平台期. 此外,在体外透皮试验操作过程中,大鼠皮肤与 扩散池内接收液之间易出现气泡,形成一层屏障,这 将阻碍苦杏仁苷透过皮肤进入接收液中.故在每次 取样后加入新的接收介质时,都应注意保持接收液 与鼠皮的良好接触,这是本试验各组结果重现性的 关键. 参考文献: [1]国家药典委员会.中华人民共和围卫生部药品标准,维 吾尔药分册[M].乌鲁木齐:新疆科技卫生出版社, t998:173. 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