【最新word论文】HPLC法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量【医学专业论文】

【最新word论文】HPLC法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量【医学专业论文】 HPLC法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含 量 【关键词】褪黑素 摘要:目的采用高效液相色谱法同时测定梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量。方法色谱柱为迪马公司Diamonsil,18柱;流动相:甲醇水(体积比60?40);波长:278nm。结果在建立的色谱条件下，褪黑素和维生素B6能完全分离。褪黑素在0.066~0.33μg，维生素B6在0.024~0.122μg范围内与峰面积呈良好线性关系，r分别为0.9998,0.9999，回收率依次为102.1%、101.9%。结论本法精密度好，结果准确可靠。 关键词:HPLC法;梦驼铃片;褪黑素;维生素B6 梦驼铃片是本公司的产品，主要由褪黑素和维生素B6等成分组成。本公司的质量标准只对褪黑素进行含量测定，未对维生素B6进行含量测定。有关褪黑素与维生素B6的分析方法已有文献报道,1,2,，但同时测定两者的方法未见报道。本文采用HPLC法同时测定了梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量，操作简便，精密度好，结果准确可靠，能更好地控制成品质量。 1仪器与试剂 10AT泵，SPD-10A紫外检测器，浙江大学N2000工作站。梦驼铃片岛津LC- 为本公司产品，褪黑素对照品(美国SIGMA公司出品)，维生素B6(经归一化法测得含量>99%)，甲醇(色谱纯)，水(二次蒸馏水)。 2实验方法与结果 2.1色谱条件 迪马公司DiamonsilC18柱;流动相:甲醇水(体积比60?40);检测波长:278nm，流速:1.0ml/min;柱温:室温;进样量:10μL;理论板数按褪黑素峰计算应不低于3000，褪黑素与维生素B6的分离度应大于15。对照品与样品的色谱图见图1。 2.2线性试验 精密称取褪黑素对照品约30mg，维生素B6原料约10mg，置同一量瓶中，用流动相制成分别含0.03mg/mL及0.01mg/mL的对照品储备液，精密量取20，4.0，6.0，8.0，10.0mL分别置于10mL量瓶中，用流动相定容。精密量取10μL注入色谱仪，与进样量(m)为横坐标，峰面积(A)为纵坐标，得回归方程分别为:A褪黑素=10973890m+685.6r=0.9998A维生素B6=6632090m-423.5r=0.9999 结果表明，褪黑素与维生素B6进样量分别在0.066~0.33μg及0.024~0.122μg范围内与峰面积均呈良好线性关系。 2.3供试品溶液的制备 取梦驼铃片10片，研细，精密称取0.1g置50mL容量瓶中，加流动相45mL，超声处理15min，加流动相至刻度，摇匀，静置片刻，取上清液用0.45μm微孔滤膜过滤，得供试品溶液。2.4阴性对照溶液的制备与测定 按处方比例配制未加褪黑素和维生素B6的辅料，按“2.3”项制备阴性对照溶液，精密量取10μL，注入色谱仪记录色谱图，结果表明，阴性对照溶液对褪黑素和维生素B6测定无干扰，见图1。1维生素B6;2褪黑素 1 2.5重现性试验 取同一批样品(批号为000604)5份，分别精密称定，按“2.3”项方法制备，分别进样测定峰面积，测得褪黑素及维生素B6峰面积RSD分别为1.1%和1.3%(n=5)。 2.6回收试验 取已知含量的样品粉末5份(批号为:000604)，分别加入含褪黑素及维生素B6为0.9150mg/mL和03271mg/mL的混合对照品溶液1.0mL(3份)及1.1mL(2份)，按供试品溶液的制备方法处理并测定，计算回收率，结果褪黑素为102.1%，RSD=0.9%(n=5)，维生素B6平均回收率为101.9%，RSD=1.2%(n=5)。表1褪黑素回收率测定结果(略)表2维生素B6回收率测定结果(略) 2.7稳定性试验 在本实验条件下，样品溶液室温放置0、2、4、8、24h后测定，测得褪黑素和维生素B6峰面积RSD分别为0.3%、1.0%，说明样品溶液在室温放置24h内基本稳定。 2.8样品含量测定 取3批样品，按“2.3”项方法制备，进样分析，测得结果见表3。表3梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量(略) 3讨论 3(1检测波长的确定 取褪黑素与维生素B6对照品溶液，分别在200~400nm波长进行扫描，记录其吸收光谱，结果褪黑素在278nm处有最大吸收，维生素B6在290nm处有最大吸收，经比较上述2个测定波长，褪黑素在278nm处有最大吸收，维生素B6有较大吸收，为了同时测定两个成分，故采用278nm作为检测波长。 3(2经试验供试液用流动相超声10、15、20min的结果与超声30min的结果没有明显差异，为节省试验时间和保证样品守全提取，采用超声15min。 3(3在筛选色谱柱时，曾选用不同牌子的C18柱进行试验，如:HYPERSILBDSC18柱，SUPELCOLC-18DBC18柱，以及迪马公司DiamonsilC18柱，结果表明，迪马公司DiamonsilC18柱分离性能较好，理论板数据按褪黑素计算为3700，褪黑素与维生素B6的分离度为5.0。 3(4本文采用HPLC法同时测定了梦驼铃片中褪黑素和维生素B6的含量，操作简便，精密度好，结果准确可靠，能更好地控制成品质量。 参考文献: ,1,付良青，骆传环，舒融.质谱学报，2000,21(3-4):103. ,2,国家药典委员会(中华人民共和国药典:一部,S,(北京:化学工业出版社，2005:667. ,3,顾鹏，罗鹏,罗,等.功能因子梦驼铃(Melatonin褪黑素)的HPLC分析检测方法研究,G,.//现代仪器.2000:138. 2 3