HPLC法测定复方虎杖颗粒中大黄素

HPLC法测定复方虎杖颗粒中大黄素 ?550?中草喃ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月 PEG4000和PEG6000均可作为滴丸基质,但 在实验中发现PEG6000与独一味提取物混合熔融 后黏度较大,滴制困难,而PEG4000与独一味提取 物混合熔融后黏度较小,但滴丸不易成型,故选用 PEG4000与PEG6000的混合物作为独一味滴丸 的基质. HPLC法测定复方虎杖颗粒中大黄素 张彤,丁越,陶建生,徐莲英 (上海中医药大学,上海201203) 复方虎杖颗粒是根据名老中医经验方研制的 中药六类新药,由虎杖,黄柏,苦参3味中药组成,具 有清热解毒,活血祛瘀,收湿止痒,加快伤El愈合之 功效,主治各类痔疮,肛瘘等肛肠科疾病.虎杖为方 中君药,主要含有大黄素等蒽醌类成分.因此本实验 采用HPLC法对复方虎杖颗粒中主要药效成分游 离大黄素和水解总大黄素进行了测定,以期建立该 制剂的质量控制方法. 1仪器与试药 HP8453E紫外可见光谱仪(Aglient公司); Aglient1100型高效液相色谱仪;大黄素对照品(批 号756—200110,中国药品生物制品检定所),复方虎 杖颗粒(上海中医大药业股份有限公司),甲醇为色 谱纯,重蒸水为自制,其他试剂均为分析纯. 2方法与结果 2.1检测波长的选择:文献报道大黄素检测波长有 254nm[1c,434nm[z!,437nm[, 290nm[.本实验 将大黄素对照品甲醇溶液在190,600nlTl全波长 扫描.结果在230nlTl以上,大黄素有253,267,290, 437nlTl4个吸收峰.因此实验选择以吸收强度最大 的吸收峰290nlTl为HPLC法的检测波长. 2.2色谱条件与系统适用性试验:色谱柱为Hy— persilC18柱(250ITIITI×4.6ITIITI,5m)(大连依利特 科学仪器有限公司);甲醇一0.1%磷酸水溶液(85: 15)为流动相;检测波长:290nlTl;体积流量:1.0 mI/rain;柱温:室温.在上述条件下,样品中大黄素 与其他组分达到基线分离,与相邻的色谱峰分离度 大于1.5.大黄素峰理论塔板数不小于3000.结果 见图1. 2.3供试品溶液的制备:取复方虎杖颗粒约0.5g, 精密称定,置100mL量瓶中,加5%醋酸甲醇约9O AC t/min 1一大黄素 1一emodin 图1大黄素对照品(A),复方虎杖颗粒(B),复方虎杖 颗粒水解后样品(c)和缺虎杖的阴性样品溶液 (D)的HPLC色谱图 Fig.1HPLCChromatogramsofemodinreferencesub— stance(A),CompoundHuzhangGranula(B), hydrolyzedsampleofCompoundHuzhang Granula(C),andnegativesample(D) mL,超声处理(功率250W,频率3OkHz)3Omin.放 至室温,加甲醇至刻度,摇匀,滤过.取续滤液,即得 用于测定游离大黄素的供试品溶液. 另取上述续滤液10mL,置100mL圆底烧瓶 中,挥去甲醇.加2.5mol/L硫酸溶液2OmL,水浴 1h,冷却.加氯仿约3OmL,继续回流2h,冷却.移 置分液漏斗中,用少量氯仿洗涤容器,洗液并入分液 漏斗中,分取氯仿层.酸液用氯仿提取2次,每次约 8mL,氯仿液并入100mL圆底烧瓶中.挥干氯仿, 残渣用甲醇溶解并定容至50mL,即得用于测定总 大黄素的供试品溶液. 2.4空白干扰试验:根据处方组成,取除虎杖外的 其余药味,按制剂工艺制备,制得缺虎杖的阴性样品 颗粒.按供试品溶液的制备方法同法处理制得阴性 样品供试品溶液.取大黄素对照品溶液,供试品溶液 收稿日期:2006—05—12 作者简介:张彤(1972一),男,浙江杭州人,副教授,博士,从事中药制药和中药质量标 准研究. Tel:(021)51322318E—mail:zhangtdmji@sohu.com 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第4期2007年4月?551? 和阴性样品溶液依法测定,结果阴性样品溶液在大 黄素位置上无吸收峰出现,表明其他组分对大黄素 测定无干扰.结果见图1. 2.5线性关系考察:精密称取以五氧化二磷为干燥 剂减压干燥24h的大黄素对照品6.19mg,置5O mL量瓶中,以甲醇溶解并稀释至刻度,得质量浓度 为0.1238mg/mL的对照品溶液.以此为母液,依 次稀释2倍,分别配制成0.00193,0.0619 mg/mL的一系列质量浓度的对照品溶液.分别吸 取上述的对照品溶液各2OL,进样测定.以峰面积 积分值为纵坐标,质量浓度为横坐标,绘制曲 线,计算得回归方程:y一86656.963一4.08834, r一0.99998.结果表明大黄素质量浓度在 0.00193,0.0619mg/mL与峰面积的线性关系 良好. 2.6精密度试验:取批号为031003的复方虎杖颗 粒,制备供试品溶液,连续进样5次,测定大黄素的 峰面积,计算得游离大黄素的峰面积RSD为 0.94%,水解后总大黄素的峰面积RSD为0.54. 2.7溶液的稳定性:取批号为031003的复方虎杖 颗粒,制备供试品溶液,分别于0,1,2,4,8,12,24h 进样测定大黄素的峰面积.结果表明,在24h内供 试品溶液基本稳定,游离大黄素的峰面积的RSD为 1.9,水解后总大黄素的RSD为1.5. 2.8重现性试验:取批号为031003的复方虎杖颗 粒,平行取样6份,精密称定,制备供试品溶液,进样 测定,计算大黄素的质量分数,结果游离大黄素的质 量分数的RSD为1.3,水解后总大黄素的RSD 为2.O%. 2.9加样回收率试验:取批号为031003的复方虎杖 颗粒(含游离大黄素2.75mg/g)约0.35g,加入大黄 素对照品0.774,0.968,1.162mg,制备测定游离大 黄素的供试品溶液,进样测定,计算回收率.结果平均 加样回收率为99.4,RSD为2.1(一6). 取批号为031003的复方虎杖颗粒(含水解后总 大黄素1O.10mg/g)约0.25g,加入大黄素对照品 2.32,2.71,3.10mg,制备测定总大黄素的供试品 溶液,进样测定,计算回收率.结果平均加样回收率 为100.7,RSD为2.3(一6). 2.1O样品测定:分别取3批复方虎杖颗粒,制备 供试品溶液,进样测定,以外标法计算大黄素的质量 分数,结果见表1. 表1复方虎杖颗粒中大黄素的测定结果(,l一3) Table1DeterminationofemodininCompound HuzhangGranula=3) 3讨论. 大黄素是常见的一类蒽醌类有效成分,在大黄, 虎杖,何首乌,决明子中均有,常作为指标成分.本实 验的研究表明,290nm吸收峰的响应值最高,灵敏 度最高,且远离了溶剂的末端吸收区,选作HPLC— UV法测定大黄素的检测波长较为合适. 中药所含蒽醌类成分,一部分以游离大黄素,大 黄酚等游离蒽醌类存在,另一部分以大黄素葡萄糖 苷等结合蒽醌的形式存在.因此,为更好控制这类中 药的质量,应同时控制游离蒽醌和水解后总蒽醌的 量.研究考察了不同提取溶剂,不同超声时间对复方 虎杖颗粒中游离大黄素的提取率的影响,结果表明 以5%的醋酸甲醇溶液为提取溶剂超声30min提 取效率较高.加酸水解时,用直火加热较难控制火 候,总大黄素的量降低.所以选用沸水浴加热水解的 方法. 3批复方虎杖颗粒中试样品游离大黄素和水解 后总大黄素平均质量分数分别为2.85,10.08 mg/g.由于1g复方虎杖颗粒含虎杖药材1.33g, 生产这3批复方虎杖颗粒的虎杖药材中游离大黄素 和水解后总大黄素质量分数分别为3.o0,14.8 mg/g,可计算出该制剂生产工艺对游离大黄素和水 解后总大黄素的转移率分别为71,51.因此,制 剂指标成分的测定在一定程度上反映出制剂工艺的 合理性. References: [1]DuanYB,HanYW,JinJ,eta1.Determinationofemodin contentinMeibaoCapsules[J].LishizhenMedMaterMed Res(时珍国医国药),2006,17(1):37—38. [2]LiHL,SunxH,SunW,eta1.Determinationofthecon— tentsofrheinandemodininZhipingkangbyHPLC[J].Chin JHospPharm(中国医院药学杂志),2005,25(9):835— 837. [3]FuYM,LiBJ,BaiY,ta1.Determinationthecontentof emodininFeijiehePillsbyHPLC[J].ChinaPharm(中国药 师),2006,9(1):20—21. [43LiY,FuXT,ZhangXQ.Determinationoftheemodinin GengnianchunTabletbyHPLC[J].ChindJTroditChin Med(中国中医药信息杂志),2003,10(9):35—36.