妇炎康分散片的质量标准研究

妇炎康分散片的质量标准研究 中草菊ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月?863? 妇炎康分散片的质量标准研究 王临润,张国兵,倪晟,蔡捷 (1.浙江大学医学院附属第一医院,浙江杭州310003;2.浙江医药发展研究有限公司, 浙江杭州310012) 妇炎康分散片是由妇炎康片改剂型得到,由赤 芍,土茯苓,三棱(醋炙),川楝子(炒),莪术(醋炙), 延胡索(醋炙),芡实(炒),当归,苦参,香附(醋炙), 黄柏,丹参,山药13味中药组成,具有活血化瘀,软 坚散结,清热解毒,消炎止痛之功效,对于慢性附件 炎,盆腔炎,阴道炎,膀胱炎,慢性阑尾炎,尿路感染 有较好疗效.为了更好的控制产品的内在质量,本实 验对妇炎康分散片中的延胡索,黄柏,赤芍,苦参4 味药材进行薄层色谱鉴别,并采用高效液相色谱法 对方中君药赤芍中的活性成分芍药苷进行测定,为 该制剂建立完善的质量标准提供了依据. 1仪器与试药 岛津LC一1OA液相色谱仪,岛津SPD一1OA 紫外检测器. 芍药苷(供薄层对照和定量测定用),延胡索乙 素(供薄层色谱对照用),苦参碱(供薄层色谱对照 用),盐酸小檗碱对照品(供薄层色谱对照用)由中国 药品生物制品检定所提供,乙腈为色谱纯,其余试剂 均为纯. 2薄层色谱鉴别 2.1延胡索的鉴别:取本品和阴性样品各5.0g,加 入甲醇100mL,超声提取30min,放冷,滤过,水浴 挥干.残渣加60mL水和60mL醋酸乙酯溶解,转 移至分液漏斗中,取醋酸乙酯液层,水浴挥干,残渣 加甲醇定容至1mL,分别作为供试品溶液和阴性溶 液.另取延胡索乙素对照品适量,加甲醇配制成0.5 mg/mL的溶液,作为对照品溶液.吸取供试品溶液 和阴性溶液各5L,对照品溶液1L,分别点于同 一 ,在氨水饱和的环境中以正己烷一醋 硅胶G板上 酸乙酯一氨水(6:4:0.2)为展开剂,展开,取出,晾 干,置碘缸中10min,取出,挥干板上的碘,置365 nm紫外灯下检视,见图1.可见供试品溶液色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上,有相同颜色斑点,而 阴性样品无对照品斑点. 2.2黄柏的鉴别:取本品和阴性样品各6.0g,加氯 仿50mL和浓氨2mL,浸渍1h,时时摇晃,滤过, 收稿时期:2006—10—20 1一延胡索乙素对照品2一妇炎康分散片3一阴性对照 1一corydalisBreferencesubstance2-Fuyankang DispersedTablets3一negativesample 图1妇炎康分散片中延胡索的薄层色谱图 Fig.1TLCChromatogramsofRhizomaCorydalis inFuyankangDispersedTablets 水浴挥干,残渣加乙醇1mL溶解定容,分别作为供 试品溶液和阴性溶液.另取盐酸小檗碱对照品适量, 用甲醇制成0.45mg/mL溶液,作为对照品溶液.吸 取供试品溶液和阴性溶液各5L,盐酸小檗碱对照 品溶液1L,分别点于同一硅胶G薄层板上,在氨 水饱和的环境中以正丁醇一冰乙酸一水(7:1:2)为 展开剂,展开,取出,晾干,置365nm紫外灯下检 视,见图2.可见在供试品色谱中,与盐酸小檗碱对 照品色谱相应的位置上,显相同颜色的斑点,而阴性 样品无对照品斑点. 2.3赤芍的鉴别:取本品和阴性样品各6.0g,加入 甲醇30mL,超声提取30rain,放冷滤过,水浴挥干, 残渣加水60mL加热溶解后转移至分液漏斗中,冷 却后用乙醚洗涤两次,每次30mL,弃去乙醚液,水 液用水饱和正丁醇萃取两次,每次60mL,合并正丁 醇液,水浴挥干,残渣加甲醇定容至1mL,分别作为 供试品溶液和阴性溶液.另取芍药苷对照品适量,加 甲醇制成1.73rag/mL的溶液,作为对照品溶液. 吸取供试品溶液和阴性溶液各5L,对照品溶液2 L,分别点于同一硅胶G板上,以氯仿一醋酸乙酯一 甲醇一甲酸(40:5:10:0.2)为展开剂,展开,取出, 晾干,喷以5香草醛硫酸溶液,在1O5?下烘1O ?864?中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月 min,在日光下观察,见图3.结果样品溶液色谱中, 在与对照品色谱相应的位置上,有相同颜色斑点,而 阴性样品无对照品斑点. 1一盐酸小檗碱对照晶2一妇炎康分散片3一阴性对照 1,berberinehydrochlorldereferencesubstance 2-FuyankangDispersedTablets3-negativesample 图2妇炎康分散片中黄柏的薄层色谱图 Fig.2TLCChromatogramsofCortexPhellodendri inFuyankangDispersedTablets 1一芍药苷对照品2一妇炎康分散片3阴性对照 1一paeoniflorinreferencesubstance2一Fuyankang DispersedTablets3一negativesample 图3妇炎康分散片中赤芍的薄层色谱图 Fig.3TLCChromatogramsofRadixPaeoniaeRubra inFuyankangDispersedTablets 2.4苦参的鉴别:取本品和阴性样品各6.0g,加氯 仿50mL和浓氨2mL,浸渍1h,时时摇晃,滤过, 水浴挥干,残渣加乙醇1mL溶解定容,分别作为供 试品溶液和阴性溶液.取苦参碱对照品适量,用乙醇 制成0.675mg/mL溶液,作为苦参碱对照品溶液. 吸取供试品溶液和阴性溶液各1L,对照品溶液2 L,分别点于同一硅胶G板上,在氨水饱和的环境 中以甲苯一丙酮一醋酸乙酯一氨水(10:15:20:1)为 展开剂,展开,取出,晾干,喷以稀碘化铋钾试液,在 日光下检视,见图4.可见样品溶液色谱中,在与苦 参碱对照品色谱相应的位置上,有相同颜色的斑点, 而阴性样品无对照品斑点. 1一舌参碱对照品2一妇炎康分散片3一阴性对照 1一sophorcarpidinereferencesubstance2Fuyankang DispersedTablets3一negativesample 图4妇炎康分散片中苦参的薄层色谱图 Fig.4TLCChromatogramsofRadixSophoraeFlaves— centisinFuyankangDispersedTablets 3芍药苷的测定 3.1对照品溶液的制备:精密称取真空干燥至恒重 的芍药苷对照品10mg,置25mL量瓶中,用75 乙醇溶解并稀释至刻度,摇匀.精密量取5mL,置 50mL量瓶中,加75%乙醇至刻度,摇匀,即得(含 芍药苷40t~g/mL). 3.2供试品溶液的制备:取本品装量差异项下的内 容物,混匀,研细(过三号筛),取细粉0.5g,精密称 定,置25mL量瓶中,加75%乙醇约20mL,超声 提取20rain,取出,放冷,加75乙醇至刻度,摇匀, 静置,用0.45m微孔滤膜滤过,取续滤液,即得. 3.3检测波长的选择:取芍药苷对照品适量,用甲 醇溶解,制成溶液,在190,500nm进行了光谱扫 描,结果表明芍药苷甲醇溶液在229nm左右有最 大吸收,因此选择230nm作为测定的吸收波长. :色谱柱:AngilientZorbaxC18色谱 3.4色谱条件 柱(250mm×4.6mm,5m);流动相:乙腈一0.1 磷酸溶液一三乙胺(15:85:0.2);体积流量:1mL/ rain;检测波长为230nm;柱温为室温. 3.5阴性试验:按照本品的处方,制法制备缺少芍 药的模拟样品,精密称取0.5g,按供试品溶液的制 备方法制成阴性对照溶液.将芍药苷对照品溶液,供 试品溶液和阴性对照溶液分别注入高效液相色谱仪 中,进行测定,得到色谱扫描图,见图5.可见供试品 与对照品溶液在相应的位置上有相似的峰,而阴性 对照则无明显其他峰出现. 3.6标准曲线的制备:精密称取芍药苷对照品 9.65mg,置25mL量瓶中,加75乙醇适量溶解并 加至刻度.精密量取1.0mL置10mL量瓶中,加 75乙醇到刻度,摇匀,得0.0386mg/mL芍药苷 中草药ChineseTraditionalandHerbalDrugs第38卷第6期2007年6月?865? 对照品溶液.分别取1,5,10,15,18,20,25L进样 测定,峰面积.以进样质量为横坐标,峰面积积 分值为纵坐标,绘制标准曲线,计算得回归方程y= 1370020.32X一6718.9602,r=0.9999.结果显 示芍药苷在0.0386,0.7720g与峰面积呈良好 的线性关系. 3.7精密度试验:取0.0386mg/mL芍药苷对照 品溶液,进样6次,每次1OL,测定峰面积,计算得 其RSD为1.77. 3.8稳定性试验:取批号040526样品制备供试品 溶液,放置0,2,4,8,12h,分别精密量取10L进 样,测定中芍药苷的峰面积,计算得其RSD为 1.31,说明供试品溶液在制备后12h内稳定. 3.9重现性试验:取批号040526的样品6份,精密 称定,分别制备供试品溶液,进样测定,计算得芍药 苷的平均质量分数为1.8861mg/g,RSD为 0.61. 3.10加样回收试验:取批号040526的样品适量, 共6份,精密称定,置具塞锥形瓶中,分别准确加入 1mL0.465mg/mL芍药苷对照品溶液,制备供试 品溶液,进样测定,计算得平均回收率为98.86, RSD为0.92. 3.11样品测定:取1O批样品,制备供试品溶液.分 别精密吸取对照品溶液和供试品溶液各1OL,注 入液相色谱仪,采用外标法计算芍药苷的质量分 数,结果见表1.考虑到所购药材中芍药苷的差异, 故将样品中定量限度定为本品每片以芍药苷计不得 少于0.6mg. 表1妇炎康分散片中芍药苷的测定结果 Table1DeterminationofpaeoniflorininFuyankang DispersedTablets mg?片) 批次芍药苷/(mg?片)批次芍药苷/( 0404160.94890405120.9900 0404170.98260405130.9825 0404250.98390405260.9619 0404260.97270405270.95.42 0405110.97490405280.9754 4讨论 按本品处方比例及制备工艺分别制备的不含延 胡索,黄柏,赤芍,苦参的缺味样品并制成阴性对照 溶液,将它们分别与相应的供试品同板进行薄层色 谱试验.结果表明各阴性对照均无相应斑点,该4味 药的鉴别方法具有专属性. 测定芍药苷时,供试品的提取方法进行了索氏 提取,超声,回流3种提取方式比较,结果采用超声 法提取得到的样品中芍药苷的量比索氏提取和回流 得到的都高,提取更完全,并且方法简便,故选择超 声作为提取方法.采用超声处理的方法,比较了甲 醇,乙醇,75乙醇对样品中芍药苷提取效果的影 响,结果以75乙醇所得提取率最高,因此选择 75乙醇为提取溶剂.采用75乙醇超声提取,分 别比较了提取5,10,20,30rain时样品中芍药苷的 量,结果提取20rain得到的芍药苷的量较高,故采 用超声提取20rain. 发汗与不发汗续断中水溶性浸出物和川续断皂苷VI的比较 王初 (杭州市中医院,浙江杭州310007) 续断为川续断科植物川续断l~'psacusasper- oidesC.Y.ChengetT.M.Ai的干燥根.味苦, 辛,微温,归肝,肾经,具有补肝肾,行血脉,续折伤的 功用,临床上多用于腰膝酸软,风湿痹痛,崩漏,胎 漏,跌打损伤等症.续断在秋季采挖.《浙江省中药 炮制规范》中续断采用除去根头和须根,用微火烘至 半干,堆置"发汗"至内部变绿色时,再烘干获得.近 年来,市场上存在使用没有发汗或未发汗完全的续 断药材,并且其颜色和性状与发汗完全的续断药材 收稿日期:200612—20 也具有很大的区别.因此本实验比较发汗与不发汗 续断药材中水溶性浸出物和药效成分的差异,探讨 发汗工艺对续断药材炮制的影响. 1仪器与试药 Agilent1100高效液相色谱仪,超声波清洗器 (昆山市超声仪器有限公司),MettlerXSLO5电子 天平,Memmerr电热恒温鼓风干燥箱.发汗与不发 汗续断药材均由浙江中医药大学中药饮片厂提供, 经浙江中医药大学中药饮片厂张云副主任中药师鉴